摘要：根据GenBank登录的鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白(OmpA)基因保守区序列,设计引物和探针,建立了直接检测鸭疫里默氏杆菌的实时荧光定量PCR快速方法。10倍梯度稀释RA菌株制备DNA模板测定方法的灵敏度,结果可在8.0×103CFU/mL浓度下特异地检测出目的菌,最低能检测到RA的DNA模板为8.0拷贝/μL;对鸭源大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌进行检测,结果均为阴性,建立的实时荧光定时PCR方法特异性强。用RA菌株人工感染雏鸭,感染后定时采集咽喉拭子、泄殖腔拭子、心血、肝脏、肺脏、脑,分别用实时荧光定量PCR检测,对脏器进行病原菌分离。结果表明,1/10半数致死量接种组,感染后8 h从心血、肝脏、脑组织检测到RA核酸,16 h后全部试样呈阳性;24 h首先从肝脏分离到RA,心血、肝脏、肺脏、脑组织均分离出RA。心血和脏器RA实时荧光定量PCR阳性检出率为63.8%(51/80),RA分离率为28.8%(23/80)。10个半数致死量接种组,1 h即可从咽喉拭子、心血和肝检测到RA核酸,5 h全部样品为阳性;5 h从肺和脑分离到RA。RA人工感染鸭的心血、肝脏、肺脏、脑实时荧光定量PCR阳性检出率为86.3%(69/80),RA分离率为60%(48/80)。用加热裂解法提取样品RA DNA只需30 min,建立的实时荧光定量PCR检测RA只需2 h,适用于RA的快速诊断、流行病学调查、种鸭引进隔离检疫、活鸭及其产品国内市场和进出口检验检疫。

摘要：根据GenBank上所公布的新城疫病毒（NDV）的全基因组序列，设计了8对引物，运用RT-PCR方法获取了3株广西地方强毒株GX7／02、GX9／03和GX11／03的全基因组序列，并对其进行了比较分析。此3株病毒的全基因组序列均由15192个碱基组成，与GenBank公布的ZJ1、U．S／Largo／71、Italy／2736／00等7个毒株的全基因组序列长度相同，比LaSota、Clone-30和B1的全基因组序列多出6个核苷酸，此6个核苷酸位于np基因的非编码区内，相对与NDV毒株LaSota、Clone-30和B1序列的1647～1648nt位。通过序列的比较分析，发现GX7／02、GX9／03和GX11／03与ZJ1毒株的同源性较高，而与LaSota、Clone-30和B1等毒株的同源性较低。

摘要：目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/00的全基因序列,并对所得序列进行了比较分析。结果同源性分析及遗传进化分析发现,所分离的3个毒株的各基因与A/Chicken/Guangdong/4/00和A/Chicken/Jiangsu/1/00的相应基因的核苷酸序列有着较高的同源性和较近的亲缘关系,可能起源于同一种系。所分离毒株中每个毒株的8个基因,在遗传进化树上的分支不具有统一性,说明此3个毒株可能为不同基因亚系间发生自然重排的产物。氨基酸序列比较发现,A/Chicken/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/003株AIV的na基因核苷酸序列在开放性阅读框架的187～195位均缺失了ACAGAGATA共9个核苷酸,它们所编码的氨基酸为T、E、I。3个分离株的HA蛋白第226位氨基酸均为Gln,证明它们为人类非易感性的H9N2亚型AIV。结论此3株H9N2亚型流感病毒为基因自然重排的产物,其na基因均存在缺失,且从分子水平上证明它们对人类不具有易感性。

摘要：设计了一对能扩增大小为231bp对虾Taura综合征病毒 (TSV)某段基因的特异性引物 ,优化建立了能快速检测TSV的二温式RT-PCR。特异性和敏感性试验结果表明 ,二温式RT-PCR能对3个试验用TSV毒株的RNA进行扩增 ,并得到与预期大小一致的231bp的扩增产物 ,而其它3种对虾病原则无相同大小的特异性扩增产物出现 ;RT-PCR最低能检测到1pg的TSVRNA。应用RT-PCR对320份分别来自广西沿海不同对虾养殖场的对虾样品进行检测 ,结果一共有85份检出TSV。这说明了TSV在广西沿海地区养殖对虾中已呈现出区域性流行趋势 ,同时也显示了RT-PCR在TSV临床检测中具有较高的实用性。

摘要：根据基因库中新城疫病毒(NDV)的NP基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000～2003年暴发新城疫的鸡群中分离的11株NDV毒株NP基因进行RT-PCR扩增和序列测定,拼接出11个NDV广西分离株的NP基因的全序列,10个NDV广西分离株的NP基因阅读框的核苷酸序列全长均为1470 bp,编码489个氨基酸,它们的NP基因核苷酸全序列及推导的氨基酸全序列与10个已发表的NDV参考株的NP基因全序列比较分析结果表明:核苷酸序列同源性为84.8%～98.2%,氨基酸同源性为89.8%～99.4%.

摘要：根据基因库中新城疫病毒M基因核苷酸序列,设计一对特异性引物,对2000年-2003年期间广西分离的11个NDV毒株的M基因进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定。结果表明,11个NDV广西分离株的M基因都为1223个核苷酸,含有1个1095bp核苷酸阅读框(ORF),编码364个氨基酸。序列分析结果表明,这11个NDV分离株核苷酸的同源性在86%～99.9%之间,推导氨基酸的同源性在89.3%～99.7%之间;11个毒株与国内外其他7个NDV毒株比较核苷酸的同源性在83.3%～98.5%之间,推导氨基酸的同源性在87.4%～98.6%之间。

摘要：根据基因库(GenBank)新城疫病毒(NDV)的HN基因序列设计了2对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000～2003年暴发新城疫的鸡群中分离的10株NDV毒株的HN基因进行了扩增,扩增产物克隆并测序,拼接出10个NDV广西分离株的HN基因全序列,其序列全长均为1 713 bp,编码571个氨基酸,均有13个半胱氨酸残基.其中GX8/03有6个糖基化位点,而GX2/00、GX6/02、GX7/02和GX5/00有5个糖基化位点,GX1/00、GX3/00、GX4/00和GX9/03有4个糖基化位点.除GX5/00和GX10/03分离株外,其他8个NDV分离株在HN基因抗原位点Ⅰ发生变异,即347位由谷氨酸(E)被甘氨酸(G)替代,GX8/03分离株在HN基因抗原位点Ⅱ的495位由赖氨酸(K)替代谷氨酸(E).与11株已发表的NDV HN基因全序列相比较,其核苷酸同源性在79.6%～ 97.9%之间,推导的氨基酸同源性在87.2%～98.1%之间.

摘要：根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列，设计了3对引物（L1和L2、13和14、L5和L6）。用***技术对3株新城疫病毒广西分离GX7／02、GX9／03、GX11／03的L基因进行了分段扩增和克隆，并对克隆出来的3个片段进行序列测定，用DNAstar软件比较分析后进行拼接，得到长约为6．8kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6704bp，拥有一个6615bp的开放阅读框，推导其编码的氨基酸数为2204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98．6％～98．7％；与ZJ1株同源性为98．8％～98．9％；与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92．0％～94．2％。

摘要：根据基因库的新城疫病毒(NDV)的磷蛋白(P)基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对11个NDV广西分离株的P基因进行RT-PCR扩增和序列测定,P基因阅读框的核苷酸序列全长均为1188bp,编码395个氨基酸。核苷酸及氨基酸全序列比较分析,结果表明:11个NDV广西分离株与10个参考株的核苷酸序列同源性为81.2%～97.8%,氨基酸同源性为78.8%～97.0%。

摘要：根据GenBank上牛分枝杆菌(***)CFP-10、ESAT-6、MPB70的基因序列,设计并合成了3对扩增CFP-10、ESAT-6、MPB70基因的特异性引物,扩增片段大小分别是321、306、582bp。对牛分枝杆菌广西分离株MBT359进行以上3个基因的克隆、序列测定及分析,结果显示,可以从广西分离株MBT359扩增出大小与预期相符的基因片段,经测序证实,扩增出的片段即为3个目的基因片段。序列分析表明,广西分离株MBT359的CFP-10、ESAT-6、MPB70基因片段与国际标准强毒株AF2122/97相应基因核苷酸同源性为100%。该研究结果为广西牛分枝杆菌流行株主要基因测序、建立广西牛结核病流行株遗传多态性数据库奠定了基础。