摘要：为建立一种快速、敏感的弓形虫检测方法,本研究根据弓形虫GRA7基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立了弓形虫荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法能特异地检测弓形虫DNA,而对新孢子虫、牛巴贝斯、马驽巴贝斯等虫DNA的检测均为阴性,具有良好的特异性;经3D数字PCR判定,其最低检测限为4.58拷贝/μL,灵敏度是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内、组间变异系数均小于5%;对62份疑似弓形虫感染流产的胎牛脑组织DNA进行检测,荧光定量PCR阳性检出率为24.19%(15/62),常规PCR为19.35%(12/62),阳性样品均包含于荧光定量PCR阳性样品中。本研究建立的荧光定量PCR检测方法可用于弓形虫病的早期诊断和日常监测,为监控弓形虫"带虫宿主"提供了良好的技术支持。

摘要：本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499F/SN/T3499R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499F/SN/T 3499R的最低检测量相同,为19.9fg/μL,F2/R2最低检测量为199fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499F/SN/T 3499R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9pg/μL和199fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。

摘要：根据新孢子虫Nc2基因保守区设计特异性引物,应用均匀设计法优化反应中Taq DNA聚合酶、引物浓度和退火温度等,建立新孢子虫二温式PCR检测方法。结果显示,扩增条带与预期目的片段大小(266bp)相符,未扩增出弓形虫等虫种的阳性DNA片段;扩增片段经克隆、测序发现与引物基因序列的同源性为100%;最低检出量为32.5fg/μL,是三步法PCR的10-1倍,但循环时间缩短了38min;重复3次对10-4、10-5、10-6和10-7稀释的阳性质粒进行二温扩增,10-7稀释均未出现扩增条带。同时对156份牛全血DNA进行检测,检出率为10.90%(17/156),与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)的检出符合率为83.33%(30/36),二者检测结果差异性不显著(P>0.05)。由此可见,建立的二温式PCR检测方法可用于临床诊断和日常监测新孢子虫,为监控"带虫宿主"提供技术支撑。

摘要：目的了解新疆巴音郭楞蒙古自治州(简称巴州)地区大中专学生对艾滋病防治知识的认知和行为现状及观念,为大中专院校开设健康教育课程、做好艾滋病的健康干预工作提供支持。方法采取分层整群抽样法,采用自行设计的调查表,对巴州地区2 377名在校大中专学生进行现场不记名问卷调查,运用Epi Data建立数据库录入数据,采用Spss 18.0软件进行描述性分析。结果巴州大中专学生对艾滋病传播途径有一定程度了解,大部分问卷题目的正确应答率达70.00%以上,但对非传播途径如蚊虫叮咬和共用劳动工具是否传播艾滋病的知晓率仅为26.00%和79.60%,卫生学校学生的艾滋病防治知识知晓率均高于师范学院;学生中4.71%有过性行为,19.48%赞同婚前性行为,仅37.32%认为正确使用安全套可以降低艾滋病传播的危险,30.46%愿意与感染艾滋病病毒的熟人继续交往,绝大部分不愿参与HIV感染者及艾滋病患者的救助工作。结论巴州地区大中专学生对艾滋病防治知识的知晓率低于国内其他地区;对艾滋病预防办法掌握不足,自我保护意识及技能均较缺乏,存在较高比例的艾滋病歧视和恐惧心理;建议大中专院校把艾滋病的防治列为必修课或选修课,提高艾滋病基本知识知晓率,减少对艾滋病的歧视和恐惧。

摘要：为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法。PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表明,Ct值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系;当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性DNA时均为阴性;经3D数字PCR判定,Real-time PCR方法的最低有效检测量为6.41拷贝/μL,灵敏性是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内平均变异系数为1.108%,组间为2.732%;本方法与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)的检测符合率为100%(46/46)。该Real-time PCR方法可用于早期诊断和日常监测家畜感染犬新孢子虫。