摘要：对硫化叶菌病毒(Sulfolobus virus)STSV2脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)基因进行克隆表达,并分析其酶学特征.根据STSV2的dUTPase基因序列设计特异性引物,以病毒STSV2 DNA为模板进行PCR扩增,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,然后,将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)进行dUTPase的IPTG诱导表达及纯化,通过SDS-PAGE检测其大小,并测定其酶学活性.结果表明,诱导表达的重组dUTPase蛋白分子量(Mr)约为38×103(含pET32a(+)自带的助溶标签),重组dUTPase在Mg2+存在的情况下能特异性催化dUTP生成dUMP和PPi,其反应最适温度为60℃,在pH值3-8之间有较高的活性,其在提高PCR扩增效率和特异性方面具有一定的作用.本研究通过克隆表达获得了硫化叶菌病毒(Sulfolobus virus)STSV2脱氧尿苷焦磷酸酶,其在基因扩增领域有一定的应用价值.

摘要：根据采样点及其样品相关信息结合近几年对高盐环境放线菌的分离经验,设计出一种含有10%～30%复合盐的CMKA培养基,同时以补充10%～30%复合盐的高氏一号琼脂培养基(GA)、ISP4培养基、淀粉酪素琼脂培养基(SCK)和HV培养基为对照,对采集于新疆阿克陶盐山、罗布泊洼地和阿克苏盐碱地的3份土壤样品利用上述5种培养基进行了分离.结果表明,CMKA培养基分离效果最好,共分离到7个属的放线菌(Actinopolyspora、Streptomonospora、Nocardiopsis、Saccharomonospora、Brevibacterium、Streptomyces和Amycolatopsis),并且获得1个放线菌新种(TRM F103).ISP4、GA、HV和SCK培养基分离效果较差,获得的属级分类单元少.同时,CMKA培养基的出菌率也是最高的,说明比较适合分离高盐环境土壤放线菌,而用于分离普通环境中放线菌的ISP4、GA、HV和SCK培养基则不适于高盐环境放线菌的分离.此外,新疆的高盐环境土壤中存在着丰富的放线菌资源,包括一些新类群的存在.

摘要：采用响应面方法对解淀粉芽胞杆菌TF28产抗菌脂肽培养基进行优化,以提高其产量。利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响抗菌脂肽产量的3个主要因素:葡萄糖、硫酸镁和磷酸氢二钠。通过最陡爬坡试验逼近最大响应值区域,利用响应面分析方法确定显著组份的最佳水平。结果表明,优化后的培养基组份为葡萄糖42.37 g/L,酵母膏2 g/L,牛肉膏2 g/L,硫酸铵2 g/L,硫酸镁2.11 g/L,氯化钙0.1 g/L,硫酸锰0.1 g/L,磷酸二氢钾1.5 g/L,磷酸氢二钠3 g/L,经3次平行试验验证,抗菌脂肽产量为1.75 g/L,比优化前提高了5.25倍。该研究优化了解淀粉芽胞杆菌TF28提高抗菌脂肽产量的培养基,为抗菌脂肽的生产奠定基础。