摘要：目的构建针对人MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对食管癌细胞MTA1基因表达的抑制作用。方法设计MTA1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测MTA1基因mRNA和蛋白表达的变化。结果把针对MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Westernblotting检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低,其中以481-499(GACCCTGCTGGCAGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最强,MTA1蛋白几乎完全不表达。结论成功构建出沉默食管癌细胞MTA1基因表达的siRNA载体,为通过沉默MTA1基因的表达来减少恶性肿瘤侵袭转移提供了实验基础。

摘要：目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰介导的MAGE3基因表达默寂对肺癌细胞定植和转移的影响。方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneoGFP载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR和Western印迹检测MAGE3基因mRNA和蛋白表达水平的变化。用软琼脂克隆形成实验和细胞体外侵袭实验,观察对肿瘤形成能力和侵袭力的影响。结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPERneoGFP载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR和Western印迹检测显示,MAGE3基因的表达水平明显降低;转染siRNA表达载体组的肺癌细胞在软琼脂中形成克隆数和穿透Matrigel的细胞数都显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.05)。结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体,RNA干扰介导的MAGE3基因表达沉寂可有效降低肺癌细胞定植和转移。

摘要：目的:构建野生型PTEN基因真核表达载体pcDNA3.0PTEN,并进行鉴定。方法:参照野生型PTEN基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从正常人外周血淋巴细胞中提取mRNA作为模板合成PTENcDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片段,经双酶切后定向克隆至pcDNA3.0真核表达载体中,蓝白斑试验筛选阳性重组质粒。分别经双酶切、特异PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。结果:双酶切和特异PCR结果表明克隆的基因片段约为1.2kb;测序法进一步证实该基因为野生型PTEN编码基因,经NCBIBLAST分析与GenBank中PTEN基因序列同源性为99.92%,编码的氨基酸同源性为100%。结论:成功构建了PTEN真核表达载体pcDNA3.0PTEN,为研究PTEN在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

摘要：联合国教科文组织于1972年制定《保护世界文化和自然遗产公约》,把文化遗产和自然遗产纳入保护的范围;1989年又在《保护传统文化和民俗的建议》中,把民族传统和民俗文化纳入保护的范围。世界各国大都制定了保护民间文化遗产的法律规定,我国保护民族文化遗产的立法正在抓紧进行,开发和保护中华民族文化遗产资源具有十分重要的意义。必须加快对民间文学艺术等遗产的立法保护,积极贯彻落实文物保护法实施条例。

摘要：目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌HCT8细胞系中的表达,以期为肿瘤的基因治疗提供新的思路和手段。方法构建逆转录病毒表达载体pSIRENEphA2,应用逆转录病毒载体介导的RNAi技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌细胞HCT8中的表达,同时利用Western免疫印迹和免疫组织化学SP法分别检测转染后HCT8细胞中EphA2蛋白的表达水平。结果从EphA2mRNA序列中筛选出有效的siRNA序列,并设计了互补双链寡核苷酸发夹结构,成功构建了EphA2siRNA的逆转录病毒表达载体,重组逆转录病毒载体pSIRENEphA2经酶切鉴定结果正确;测序分析证实插入的EphA2siRNA的方向及序列正确。Western免疫印迹和免疫组织化学方法分析,与对照空载体及未转染细胞相比,重组pSIRENEphA2转染的HCT8细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论通过逆转录病毒载体介导的RNAi能够抑制HCT8细胞中EphA2的蛋白表达,为以EphA2为靶向的结直肠癌的基因治疗提供了新的思路和手段。

摘要：目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)mRNA靶向siRNA表达载体,观察其表达情况。方法:设计人VEGF靶向的发夹样siRNA,依据设计,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneo-GFP载体,转化扩增后得到重组载体pSUPERneo-GFP-siVEGF,进行序列测定。用脂质体转染法将重组载体转染食管癌细胞株Eca109,采用RT-PCR检测转染细胞VEGF mRNA的表达水平。结果:经过酶切鉴定与测序,pSUPERneo-GFP-siVEGF构建成功。稳定转染该重组体的Eca109细胞VEGF mRNA表达水平明显降低。结论:成功构建了针对VEGF mRNA的siRNA载体,转染细胞后可显著抑制VEGF mRNA的表达。

摘要：西部民族地区城镇化建设应开辟多元投资渠道,开放城镇化建设市场,清理对非国有资本的市场准入障碍,通过项目融资、金融融资、地方政府债券融资等途径,优化资金的来源模式,并且必须从法律经济学效益最大化的思想出发,设计相应的法律制度进行保障。

摘要：实施西部大开发战略,为西部地区经济、文化事业的繁荣发展带来了难得的历史机遇。对蕴藏着丰富的民族文化遗产的西部地区来说,保护好民族民间文化是西部开发中的一项重要课题。从民族民间文化的界定入手,分析民族民间文化的保护在西部大开发中的意义,在了解国内外关于民族民间文化的立法现状的基础上,对民族民间文化的法律保护提出建议。

摘要：西部民族地区城镇化建设应开辟多元投资渠道,开放城镇化建设市场,清理对非国有资本的市场准入障碍,通过项目融资、金融融资、地方政府债券融资等途径,优化资金的来源模式,并且必须从法律经济学效益最大化的思路出发,设计相应的法律制度进行保障。

摘要：目的:构建同时沉默Livin基因和MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)载体。方法:设计Livin和MTA1的siRNA靶序列,合成它们互补的寡核苷酸链,分别退火后重组入pRNAT-U6.2载体,得到pRNAT-U6.2-Livin和pR-NAT-U6.2-MTA1。AccⅡ和XhoⅠ酶切pRNAT-U6.2-MTA1,回收475bp的MTA1siRNA单元,然后与XhoⅠ和PmeⅠ酶切线形化的pRNAT-U6.2-Livin重组,得到pRNAT-U6.2-Livin-MTA1,后者用脂质体包被转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR法分别检测转染细胞Livin和MTA1基因mRNA的表达情况。结果:针对Livin基因和MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段分别克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析插入片段正确。PCR扩增证实MTA1siRNA单元重组入pRNAT-U6.2-Livin。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-Livin-MTA1的EC9706细胞Livin基因和MTA1基因mRNA表达水平皆明显降低。结论:同时沉默Livin基因和MTA1基因表达的siRNA载体构建成功。