摘要：通过调研目前国内法规和使用四参数模型计算效价的实验室数据,对生物效价测定在使用四参数模型计算中常见问题总结如下:(1)《中华人民共和国药典》虽然收载了多个品种的四参数模型计算要求,但对使用该模型进行效价计算时缺乏具体要求。(2)国内实验室在使用该模型计算生物效价时,在实验设计、系统适用性和样本适用性等方面均存在评价不足,没有提供充分的数据分析及结果,从而导致结果的可信程度下降。(3)由于差异性检验的自身缺陷,建议今后使用该模型时,对样品适用性的统计检验逐步过渡到使用等效性检验,以保证计算的准确性和科学性。

摘要：目的优选湿法超微粉碎提取水蛭的最佳工艺。方法在单因素试验基础上,以料液比、浸泡时间、提取温度和粉碎时间为自变量,根据Box-Behnken原理采用4因素3水平的响应面分析法,以抗凝血酶活性为响应值,对湿法超微粉碎提取条件进行优化。结果湿法超微粉碎提取水蛭的最佳工艺条件:料液比为1∶12,浸泡时间为4.9 h,提取温度为6.5℃,粉碎时间为12 min,其抗凝血酶活性达到20.13 U/g。结论湿法超微粉碎提取技术适用于水蛭的提取,本实验优选的提取工艺稳定可行,适于进一步推广应用。

摘要：目的:测定盐酸苯环壬酯油水分配系数,研究不同pH值对药物脂水分配系数的影响,为盐酸苯环壬酯新剂型的处方设计提供理论参考。方法:本实验采用摇瓶-高效液相色谱法测定盐酸苯环壬酯在不同pH值条件下正辛醇-水/缓冲液体系中的表观脂水分配系数。结果:盐酸苯环壬酯的脂水分配系数lgP值为1.29±0.16;在pH为1.2,3.0,4.5,5.0,5.5,6.0,6.8,7.0,8.0,9.0的环境中,脂水分配系数lgP值分别为0.31,0.72,1.16,1.34,1.99,2.26,2.22,1.61,2.34,3.24。结论:盐酸苯环壬酯的脂水分配系数与介质的pH值有关,在pH4.5~8.0生理条件下,盐酸苯环壬酯的脂溶性较好,水溶性差。

摘要：目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。

摘要：[目的]研究儿童变应性鼻炎临床随机对照试验的设计要素,为病证结合类中药临床试验的标准化设计提供借鉴和指导,提高不同试验结果比较的可行性。[方法]通过文献研究,系统检索中国知网数据库(CNKI)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、万方数据库(WF)、PubMed、Cochrane及Web of Science等中英文数据库中的儿童变应性鼻炎随机对照试验(RCT)文献,对符合纳入标准的文献进行资料提取、分析、归纳,提炼儿童变应性鼻炎临床试验设计与评价的主要技术要素。[结果]检索出2735篇文献,最终纳入18篇,包括中文5篇、英文13篇。全部研究,无论短期或远期治疗,临床定位均为缓解鼻部症状。试验总体设计均采用随机,全部研究以双盲为主12项(66.67%);有样本量估算8项(44.44%)。受试者选择均有明确的西医诊断标准,以及纳入标准、排除标准设计。干预措施,全部研究分别为鼻内皮质类固醇和抗组胺药各5项(27.78%),中西医联合治疗和舌下免疫疗法各3项(16.67%),口服皮质类固醇和抗组胺药联合治疗、鼻用纤维素散各1项(5.56%)。对照药物的选择以安慰剂对照10项(55.57%)为主,也有阳性药对照6项(33.33%),其余为三臂试验设计2项(11.11%)。设计导入期8项(44.44%),时长为3 d~3周;疗程为1周~1年,以2~4周为主,其中,以中西医联合治疗、鼻部局部治疗及抗组胺药为干预措施者多为2~4周,以系统治疗为干预措施者可长达1年,甚至更久。主要有效性指标,采用变应性鼻炎症状体征综合疗效5项(27.78%)和症状/疾病严重程度评估12项(66.67%),其余1项(5.56%)采用无症状天数百分比;使用的评估工具包括鼻部症状总评分(TNSS)量表4项(22.22%),鼻部综合评分(RTSS)和总症状评分(TSS)量表各2项(11.11%),4项总症状评分(T4SS)、鼻部症状评分(NSS)、总症状严重程度评分(TSSC)、每日症状评分(DSS)量表各1项(5.56%),或3项鼻部症状总评分(3TNSS)、4项鼻部症状总评分(4TNSS)、眼部症状总评分(TOSS)量表联合应用1项(5.56%)。[结论]纳入文献质量较高,信息完善,研究结果涵盖了病证结合模式下儿童变应性鼻炎药物临床试验设计与评价的主要技术要素,具有较高的借鉴和参考价值,为中华中医药学会标准化项目-《儿童变应性鼻炎中药临床试验设计与评价技术指南》的制定,提供了文献依据。

摘要：目的:开展SD大鼠3天重复经口灌胃给药毒性实验,联合肝、肾和外周血碱性彗星电泳试验和骨髓微核试验,并对遗传毒性试验常用的溶媒及阳性化合物进行检测和比较。通过对比相同实验条件下开展的以染色体损伤和DNA断裂为检测终点的组合遗传毒性试验结果,为给药和取材时间点以及阳性剂的选择提供参考依据。方法:雄性SD大鼠随机分为去离子水组、0.9%氯化钠注射液组、玉米油组、环磷酰胺(CPA)10 mg·kg^(-1)组、环磷酰胺(CPA)40 mg·kg^(-1)组、N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)40 mg·kg^(-1)组和甲磺酸乙酯(EMS)200 mg·kg^(-1)组,每组5只。连续3 d灌胃给药,实验期间记录动物临床症状和体重变化。末次给药后3 h处死大鼠。称量肝、肾脏器重量,并收集肝、肾及外周血制备单细胞悬液开展多脏器碱性彗星试验。样本制片后分别经裂解、解旋、电泳、染色等步骤,使用Komet 6.0软件进行图像分析;取材同时收集骨髓细胞制作涂片,计数2 000个嗜多染红细胞(PCE)的含微核细胞发生率。结果:1)CPA、ENU和EMS均未对动物整体产生严重的毒性作用。2)只有EMS组的肝细胞、肾细胞和淋巴细胞的刺猬细胞百分率明显升高,CPA及ENU对刺猬细胞百分率无明显影响。ENU组在3种组织的彗尾DNA含量百分率及Olive尾矩与溶媒对照组比较为弱致DNA断裂作用;而EMS则在3种组织中均显示了强致DNA断裂作用。3)CPA作为经典的骨髓微核试验阳性剂,其微核结果显示了一定的剂量相关性;ENU的致微核作用相对较弱。结论:将多脏器彗星试验与微核试验与3天重复给药毒性实验整合是可行的;实验流程的标准化、阳性剂的选择及实验设计等需根据具体情况来设计。

摘要：目的:设计适用于Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基。方法:以商品化的DMEM/F12合成培养基为基础培养基,应用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法设计支持Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基。结果:以细胞密度为评价指标,在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman实验设计考察10种培养基添加成分对Vero细胞生长的影响,确定了3种对Vero细胞生长起明显促进作用的培养基添加成分,为胰岛素、血清素和腐胺。继而利用响应面法分析了这3种添加成分的最佳水平范围,设计了一种支持Vero细胞贴附培养的无血清培养基(VERO-SFM-A)。在Bellco搅拌式培养瓶中采用VERO-SFM-A和Cytodex 1微载体培养Vero细胞,细胞密度由接种时的4×105cells/ml增加到培养6 d后的22.3×105cells/ml,细胞活力保持在96%以上。结论:VERO-SFM-A能够有效地支持Vero细胞在微载体表面固定化生长并达到较高的细胞密度,具有实际应用于Vero细胞微载体规模化培养的应用潜力。

摘要：目的采用离心萃取系统萃取毛蕊花糖苷提取物。方法通过单因素试验,研究油相中毛蕊花糖苷含量、流量、油水相比、萃取次数、转速、pH对毛蕊花糖苷萃取率的影响。利用响应面Box-Behnken实验设计探究油相中毛蕊花糖苷含量、流量、转速、油水相比对毛蕊花糖苷萃取率的影响并优化最优工艺参数。结果单因素试验结果表明:萃取最佳条件为油相中毛蕊花糖苷含量为19.20 mg·mL^(-1),转速为48 Hz,流量为300 mL·min^(-1),油相与水相比=1∶1,乙酸加入量为2%,萃取次数为3次。通过响应面分析发现各因素对毛蕊花糖苷萃取率的影响顺序为油相中毛蕊花糖苷含量>油水相比>流量>转速;在最佳条件下:油相中毛蕊花糖苷含量21.50 mg·mL^(-1)、转速48 Hz、流量290 mL·min^(-1)、油水相比1∶1,3次平行试验得到的毛蕊花糖苷萃取率分别达82.49%,79.38%,81.76%,与预测值80.03%的相对误差分别为3.07%,0.81%,2.16%。结论此方法能够有效对毛蕊花糖苷进行纯化,为毛蕊花糖苷的开发利用提供理论依据。

摘要：以2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶5(4H)乙酸甲酯为原料,设计并合成了一系列新型的N-取代-2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(4a～4o),其结构经1H NMR和MS表征。体内初步生物活性测试结果表明,4a～4o均有一定的抗血小板聚集作用,其中4a,4l和4m对大鼠血小板聚集的抑制率分别为60.3%,63.0%和65.1%。

摘要：以病毒蛋白为靶的抗病毒药物面临易产生耐药、抗病毒谱较窄等诸多问题,宿主分子靶向已经成目前抗病毒药物研究的重要策略,宿主靶标的辨识是宿主靶向药物设计的关键。病毒-宿主相互作用的系统生物学研究将成为抗病毒药物宿主靶标辨识和宿主-病毒联合靶向治疗策略设计提供有力工具。近年来通过蛋白质组学、大规模基因沉默、基因芯片等实验得到了大量的病毒感染相关宿主分子和病毒-宿主分子相互作用关系,为在病毒-宿主分子网络水平揭示病毒生存策略奠定了基础。整合病毒感染基因表达谱和人蛋白相互作用网络可以构建病毒感染激活网络,进而通过网络分析获得关键的宿主因子。正在发展的动态蛋白质组学和动态网络分析技术将为建立更加真实的病毒-宿主分子网络模型,进而辨识有效的宿主靶标提供有力工具。