摘要：目的建立检测沙门氏菌的环介导等温扩增技术。方法针对沙门氏菌侵袭蛋白基因(invA),用LAMP引物在线设计软件设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立了快速检测食品中沙门氏菌的环介导等温扩增方法。对dNTP浓度、Mg2+浓度、内引物浓度和外引物浓度等反应条件进行优化,并测定方法的特异性和灵敏度,然后用该方法对猪肉模拟样品和猪肉实物样品进行检测。结果优化的LAMP反应体系为:0.8 mmol/L dNTP,6.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L外引物F3和B3,1.6μmol/L内引物FIP和BIP。对6种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅含invA基因的沙门氏菌扩增阳性。对细菌纯培养物检测的灵敏度为101 cfu/ml,对猪肉模拟样品检测的灵敏度为102 cfu/g。采用环介导等温扩增方法检测57份猪肉实物样品,invA基因阳性5份。LAMP方法检测(包括DNA提取、LAMP反应和电泳分析)可在2h内完成。结论检测沙门氏菌的环介导等温扩增方法快速、灵敏、特异,适合在基层食源性疾病监测和应急检测中应用。

摘要：目的:建立能快速、特异检测副溶血性弧菌的环介导等温扩增技术。方法:针对副溶血性弧菌不耐热溶血素基因(tlh)和热稳定直接溶血素基因(tdh)设计2套引物,建立环介导等温扩增技术检测方法,与PCR法进行比较,并进行了虾肉模拟样品和实际样品检测。结果:环介导等温扩增技术特异性高。灵敏度高于PCR法,对细菌纯培养物的检测灵敏度为101cfu/ml,对虾肉模拟样品检测灵敏度103cfu/g。而PCR法的灵敏度分别为102cfu/ml和105cfu/g。采用环介导等温扩增技术在69份实际样品中检测出11份tlh基因阳性,其中2份tdh毒力基因阳性。结论:初步建立能快速、灵敏、特异地检测副溶血性弧菌的环介导等温扩增技术。

摘要：目的建立快速、特异检测霍乱弧菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法针对霍乱弧菌毒素基因(ctxA)设计4条引物,建立环介导等温扩增检测方法,优化反应体系,测定方法的特异性和灵敏度,并进行鱼肉模拟样品和实际样品检测。结果 LAMP最佳反应条件为8.0 mmol/L Mg2+、0.6 mmol/L d NTPs、1.6μmol/L FIP和BIP(2条内引物)、0.2μmol/L F3和B3(2条外引物);对细菌纯培养物的检测灵敏度为10 cfu/m L,对鱼肉模拟样品检测灵敏度为102cfu/g;在16份实际样品中检测出4份ctxA基因阳性。结论建立的LAMP方法灵敏度高、特异性强,可快速地检测食品样品中霍乱弧菌。

摘要：目的建立能快速、特异检测志贺菌的环介导等温扩增技术。方法针对志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)设计4条引物,建立环介导等温扩增检测方法,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,与PCR法进行比较,并进行了猪肉模拟样品和实际样品检测。结果环介导等温扩增技术特异性高。灵敏度高于PCR法,对细菌纯培养物的检测灵敏度为101cfu/ml,对猪肉模拟样品检测灵敏度102cfu/g。而PCR法的灵敏度分别为102cfu/ml和104cfu/g。采用环介导等温扩增技术在34份实际样品中检测出5份ipaH基因阳性。结论初步建立能快速、灵敏、特异地检测志贺菌的环介导等温扩增技术。其在食源性疾病监测和应急检测中具有重大意义,值得推广应用。