摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前影响养猪业的重要病毒之一,国内PRRSV是以美洲型为主,根据致病性的强弱又可分为高致病性(HP)和经典性PRRSV毒株,高致病性PRRSV是引起国内2006年'猪高热病'的主要病原。PRRSV属于条件性致病病毒,对PRRSV感染猪和发病猪的准确、快速检测是采取有效措施的前提和依据。环介导等温扩增技术(LAMP)是一种敏感、快速、操作相对简便的核酸扩增技术,整个反应在单一温度下进行,反应结果可以通过肉眼观察,在动物病原检测方面应用较多。本试验通过GenBank获得了HP-PRRSV和经典PRRSV分离株序列,选择2种毒株共同的保守基因区段,设计了用于检测PRRSV的RT-LAMP引物。通过对反应体系、反应温度、特异性、敏感性等优化,建立了检测PRRSV的RT-LAMP方法。建立的方法总体系为25μL,外引物终浓度为0.20μmol/L、内引物终浓度为1.60μmol/L,63.0℃恒温作用1 h,给反应产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,阳性结果呈绿色,紫外光下可见荧光,阴性结果呈橙色,紫外光下无荧光。方法对PRRSV RNA的最低检测质量浓度为9.44×10-5 mg/L。用建立的方法对临床送检的19份猪样品(血清和组织)进行检测,与国标(GB/T 27517-2011)的HP-PRRSV和PRRSV双重RT-PCR检测方法进行对比,双重RT-PCR方法检测出6份阳性,RT-LAMP方法检测出8份阳性。本试验建立了检测PRRSV经典毒株和高致病毒株的RT-LAMP方法,为PRRSV的检测提供了可选择的方法。

摘要：为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一种特异、灵敏、量化且耗时短的检测方法,通过设计1对PRRSV ORF7基因的引物,建立Eva Green染料的实时荧光定量PCR(real-time PCR)的检测方法,对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验,并检测PRRSV疑似感染的临床病料。结果显示,所建立的real-time PCR检测方法标准曲线的线性相关系数R2=0.999,具有良好的线性关系;与传染性胃肠炎病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,特异性强;与常规RT-PCR检测方法相比,灵敏度提高100倍;重复试验表明变异系数系数在1%以下,重复性良好。对27份临床样品进行检测,结果比常规PCR多检出3份阳性。说明建立的real-time PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面均相比良好,可用于临床PRRSV的检测。

摘要：为优化山茱萸葡萄露酒生产工艺,保证产品品质,选择酿造法生产山茱萸葡萄露酒进行试验研究。以感官分值和马钱苷含量为指标,对产品进行综合评分。根据响应面中心组合设计理论,用响应面法探讨了原料组分比、液料比和前发酵温度对山茱萸葡萄露酒产品的影响,建立了二次多项式回归模型,并对酿造工艺参数进行了优化。结果表明,影响山茱萸葡萄露酒感官分值的主效应关系为液料比>原料组分比>前发酵温度;影响马钱苷含量的主效应关系为原料组分比>液料比>前发酵温度。发酵型山茱萸葡萄露酒的最佳生产工艺参数为:原料组分比2.1g·g^(-1)、液料比20.6︰1 mL/g、前发酵温度23℃。在此条件下,山茱萸葡萄露酒的感官分值为94.2,马钱苷含量为173.21 mg/L。

摘要：试验采取裂区设计,主处理分别为行间生草覆盖和清耕,副处理为4个施肥处理,具体为不施肥(CK)、单施有机肥(M)、氮磷钾配合(NPK)、有机肥与氮磷钾肥配合(MNPK),采用微孔板荧光法研究生草覆盖条件下不同肥料配施对果园土壤酶活性的影响.结果表明:生草刈割覆盖后土壤含水量、有效磷、硝态氮含量和β-1,4-木糖苷酶(βX)、β-1,4-N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β-1,4-葡萄糖苷酶(βG)、纤维二糖水解酶(CBH)活性均显著高于刈割前,土壤全氮、有机碳含量和碱性磷酸酶(AKP)活性在刈割前后差异均不显著.生草覆盖处理的土壤全氮、有机碳含量和土壤βX、NAG、βG、CBH、AKP活性在刈割前后均显著高于清耕处理,但土壤含水量、有效磷、硝态氮含量在刈割前则显著低于清耕处理.生草覆盖条件下,有机肥添加处理(M和MNPK处理)的土壤全氮、有效磷、有机碳含量在刈割前后均显著高于CK和NPK处理,其中MNPK处理的βX、βG、CBH、NAG、AKP等5种酶活性在刈割后均显著高于NPK处理.清耕条件下,MNPK处理的土壤有效磷、有机碳、硝态氮、全氮含量和βG、CBH、AKP活性在刈割前后均显著高于CK和NPK处理.冗余分析结果表明,土壤酶活性与土壤养分因子之间存在显著相关关系,可以利用土壤酶活性来反映土壤肥力状况.综上所述,生草覆盖条件下,有机无机配施显著提高了土壤养分含量、增强了土壤酶活性,是改善当前果园土壤质量下降的重要措施,对当地苹果产业的可持续发展具有重要意义.

摘要：为了筛选出促进黄精种子萌发的最佳破眠技术,采用正交试验设计的方法,研究GA3质量浓度、浸种温度、浸种时间、消毒剂4个因素对黄精种子萌发的影响。结果表明:GA3质量浓度为100mg/L,浸种温度20℃,浸种时间12h,消毒剂为w=3%的过氧化氢是黄精种子萌发的最佳处理条件,萌发率可达92.36%。4种因素中,浸种温度是影响黄精种子萌发的主要因素,浸种时间和GA3质量浓度次之,消毒剂的使用可以有效控制黄精种子在萌发过程中的霉变现象。

摘要：本试验通过研究谷氨酸渣对奶山羊产奶量及乳成分的影响,探究谷氨酸渣在奶山羊精料补充料中的最适添加量,旨在丰富奶山羊饲料原料来源,降低饲料成本。本试验采取单因素随机区组设计,选择处于泌乳前期[泌乳天数:(20±5)d]、胎次相同、体重(59.80±2.15)kg、产奶性能相近的2胎健康萨能奶山羊40只,随机分为4组,每组10只。4组山羊所喂精料补充料营养水平基本相同,其中谷氨酸渣的添加量分别为0(对照组)、2%、4%和6%。试验期共63 d,其中预试期7 d,正试期56 d。结果显示:日均干物质采食量、产奶量、乳糖率、乳脂率各组之间差异不显著(P>0.05)。试验第35天时,2%谷氨酸渣组和4%谷氨酸渣组乳蛋白率显著高于对照组和6%谷氨酸渣组(P0.05)。乳脂、乳糖、乳蛋白的日绝对产量各组之间差异不显著(P>0.05)。由此得出,谷氨酸渣可以作为奶山羊的饲料蛋白质原料,其在奶山羊精料补充料中的最适添加量为4%。

摘要：为建立一种特异、灵敏、量化、快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,设计1对PEDV N基因的特异性引物,建立Eva Green染料的实时荧光定量RT-PCR的检测方法,并对疑似PEDV感染的临床样品进行检测。结果显示,所建立的实时荧光定量RT-PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数R2=0.999;不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发生交叉反应,具有较强的特异性;灵敏度比常规RT-PCR方法高100倍;重复性试验的变异系数均小于5%,重复性良好。对43份临床样品进行检测,结果比普通PCR多检出2份阳性。结果表明,建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法在特异性、灵敏度和重复性方面都很好,可用于临床PEDV检测。

摘要：陕西省某山羊养殖场发生了一起山羊流产病,经流行病学调查,临床症状和病理剖检观察进行初步诊断;利用布鲁菌虎红平板凝集试验、衣原体间接血凝试剂盒对10份流产母羊血清检测;对病料进行细菌学检测;依据GenBank收录的山羊流产性衣原体基因组设计1对特异性引物,通过PCR方法从病料中扩增衣原体特异性片段。结果表明,根据临床症状和病理变化初步怀疑为布鲁菌和鹦鹉热亲衣原体感染;10份血清检测结果为布鲁菌病血清全部阴性,衣原体感染血清全部为阳性;细菌学检测结果为阴性;PCR结果获得523bp基因片段,测序结果与鹦鹉热亲衣原体100%相似。依据流行病学调查,临床症状和病理剖检观察,病原学和血清学诊断,最终确诊该病为鹦鹉热亲衣原体引起的山羊地方流行性流产。

摘要：对羊布鲁菌(Brucella)陕西分离株OMP19基因进行克隆、序列分析及原核表达。利用GenBank中收录的布鲁菌(KT229642.1)OMP19基因序列,设计合成引物,应用PCR技术扩增OMP19基因,并将OMP19基因连接到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET28a-OMP19,转化到BL21感受态细胞进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot法分析。结果克隆了羊布鲁菌陕西分离株OMP19全基因序列,核苷酸序列分析表明,陕西分离株OMP19基因与国内外已报道的羊布鲁菌核苷酸同源性超过98%,氨基酸同源性超过98%。OMP19重组菌经诱导表达约为19ku的重组蛋白,该蛋白能与本实验室鉴定保存的阳性血清特异性结合,反应原性良好。为羊布鲁菌陕西分离株分子生物学特性研究提供资料,为进一步进行基因工程疫苗研制及ELISA试剂盒抗体检测提供了基础。

摘要：为建立一种特异、灵敏、量化且耗时短的小反刍兽疫病毒(PPRV)检测方法,通过设计一对PPRV N基因的引物,建立检测PPRV的Eva Green实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)的检测方法,对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行分析,并用建立的方法对临床疑似PPRV样品进行检测。结果显示,所建立的检测PPRV RT-qPCR方法标准曲线具有良好的线性关系(R2=0.999);与羊口疮病毒(ORFV)、山羊痘病毒(GTPV)、羊流产嗜性衣原体(Goat Chlamydophila abortus)无交叉反应,特异性强;相比常规RTPCR检测方法灵敏度高出100倍;重复试验变异系数系数在1%以下,重复性良好。对16份临床样品提取的RNA检测结果显示,该方法与常规RT-PCR检测结果一致。建立的RT-qPCR检测方法可用于临床PPRV的检测。