摘要：采用响应面法在摇瓶水平对重组巴斯德毕赤酵母合成内切几丁质酶的培养基组分进行优化,并探讨重组内切几丁质酶降解几丁质的最佳反应条件。首先对培养基中显著影响内切几丁质酶活力的关键组分通过Plackett-Burman试验设计进行筛选;然后通过Box-Behnken试验设计和响应面法确定关键组分的最佳浓度。结果筛选出3个具有显著效应的关键组分为酵母膏、油酸和吐温-80,最佳浓度分别为:2.45%、0.17%和0.62%。优化后的最佳培养基组成为:2.45%酵母膏、2.00%蛋白胨、0.50%酵母氮碱(YNB)、0.50%甲醇、0.17%油酸、0.62%吐温-80和0.40%PTM1。在该培养基中,重组巴斯德毕赤酵母在摇瓶水平(25m L/250m L)发酵生产内切几丁质酶的活力高达92.26U/m L。重组内切几丁质酶催化几丁质降解的最佳反应条件为:粉末几丁质浓度为4%,p H和温度分别为7.0和30℃,反应时间为10h。研究结果为后期在发酵罐中大规模生产内切几丁质酶和几丁寡糖提供了基础。

摘要：中国湿地博物馆是以展示湿地景观及文化为主题,集收藏、研究、展示、教育、宣传、娱乐于一体的大众化国家级专业博物馆。其湿地景观的塑造和表达特色明显,在总体设计、道路布局、空间疏理等方面都具有独到之处,且将各种类型的湿地景观化、情景化,在追求精密风格的同时,还夹杂着东方园林中的空间渗透与穿插的浪漫情结。现就中国湿地博物馆景观空间结构及形态设计进行分析,归纳出还原自然,虚实相交、柳暗花明,动态布局,步移景异等湿地景观展示特色。

摘要：通过磁珠富集法分离了乌鳢(Channa argus)和斑鳢(***)的微卫星DNA序列,根据这些微卫星DNA序列的两翼序列,采用Primer 3.0或Primer 5.0软件设计出乌鳢与斑鳢的微卫星引物各31对。用62对微卫星引物对乌鳢和斑鳢自交与杂交F1代的4个组合进行扩增,10对引物无扩增产物,其余52对引物中,均能在4个组合的鱼中扩增出条带的引物有49对。位点CHA16在乌鳢中呈多态,在斑鳢中呈单态;位点CHM23在乌鳢中呈单态,在斑鳢中呈现多态;另外,位点CHM24在乌鳢中呈单态,在斑鳢中没有扩增出条带。检测到乌鳢和斑鳢的差异位点22个,其中18个均可单独有效鉴定出F1子代的乌鳢、斑鳢及包括正交和反交在内的杂交鳢,其余4个位点也可以通过组合鉴定出F1子代的乌鳢、斑鳢及杂交鳢。但是,杂交鳢中正交组合和反交组合不能通过本研究开发的微卫星鉴别。

摘要：临床护理工作中发现患者在取半卧位时由于重力作用身体常会有下滑情况发生,有的甚至下滑呈平卧位而达不到治疗作用。护士每1~2 h就要协助半卧位患者移向床头一次,消耗了护士的时间与体力;半卧位患者的床单常随患者躯体下滑发生腰背下皱折不平,患者身穿的衣物则由于躯体下滑向上卷边,致使半卧位患者腰背部、臀部下床单与衣物堆叠造成不适,且易损伤皮肤。

摘要：目的　建立一种快速有效地鉴定李斯特菌属和鉴别单核细胞增生李斯特菌 (Lm)的方法。方法　以具有李斯特菌种、属特异性的iap基因和Lm特异的溶血素基因 (hlyA)为靶目标 ,分别设计双重聚合酶链反应 (PCR)和三重PCR鉴别李斯特菌 ,并比较 2种PCR方法的特异性。结果　双重和三重PCR方法检测李斯特菌属和Lm标准株 ,均具有良好的特异性 :进行三重PCR检测 ,可出现 3个条带 ,其中 2条为Lm的特征性条带 ( 70 0 ,42 0bp) ,另 1条为其他李斯特菌的iap基因片段 ( 12 0 0bp) ,但是双重PCR不能鉴别部分Lm食品分离株 ,而三重PCR则可以鉴别。结论　建立的三重PCR法可用于李斯特菌属细菌特异性鉴定和混合培养物中Lm的特异性鉴别。

摘要：目的 比较颅内动脉瘤破裂急性期和非急性期手术治疗的优缺点.方法 对2008年12月至2009年9月浙江大学医学院附属第二医院184例颅内动脉瘤破裂的数据进行回顾性分析.将动脉瘤破裂后3 d内行手术治疗的患者归入急性期手术组（102例）,将破裂后大于3 d再行手术治疗的患者归入非急性期手术组（82例）.组间比较采用成组设计的t检验;率比较采用x2检验.研究两者之间在术前再出血率,术中完全夹闭率,术后脑梗死、脑积水发生率等方面的差异.在6～12个月的随访中,通过格拉斯哥预后评分（glasgow outcome scale,GOS）计分,分析两组患者手术预后的差异.结果 急性期组术前再出血2例,非急性期组再出血7例;术前再出血率差异具有统计学意义（P＜0.05）.急性期组完全夹闭率91.2%（93/102）,非急性期组完全夹闭率80.5%（66/82）,差异具有统计学意义（P＜0.05）.急性期手术组患者术后脑梗死发生率10.8%（11/102）,术后脑积水发生率6.86%（7/102）.非急性期组术后脑梗死发生率4.88%（4/82）,术后脑积水发生率3.66%（3/82）.两组之间差异无统计学意义.术后随访中,将患者根据GOS评分分为死亡（1分）,致残（2～3分）,良好（4～5分）.非急性期组7例死亡,11例致残,55例恢复良好;急性期组8例死亡,16例致残,73例恢复良好,急性期组良好率较高,但两组间差异无统计学意义.结论 ①急性期手术可以明显减少术前再次出血,从而减低因术前出血引起的死亡致残风险.②急性期手术术中可以通过腰大池置管引流等方法降低颅内压,明显提高完全夹闭率,促进患者的康复.

摘要：HBV感染呈全球流行趋势，严重危害了人类的身心健康。目前根据HBV基因全核苷酸序列异源性≥8％或S基因区核苷酸异源性≥4％将HBV毒株分为A～I九种不同基因型，HBV毒株在不同的地域流行趋势存在明显差异，我国主要流行B、C两种基因型。HBV基因型对HBV感染者的治疗以及预后判断具有重要意义，然而目前HBV基因分型检测方法存在操作繁琐或检测灵敏度不够理想等问题。为解决上述问题，我们根据HBV基因型序列特征，设计了B、C特异型的恒温扩增引物，同时结合SYBR Green I荧光染料，建立了实时荧光恒温扩增技术检测HBV基因B、C型的实验方法。

摘要：癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)作为肿瘤标志物,在临床肿瘤诊断及肿瘤靶向治疗等方面具有重要应用价值。癌胚抗原单链抗体(CEA-specific single chain antibody fragments,CEA-scFv)能够特异性结合癌胚抗原。本研究将癌胚抗原单链抗体展示于大肠杆菌细胞表面,分析其作为癌胚抗原检测平台和细菌靶向载体的可行性。首先将CEA-scFv基因克隆到表面展示载体pBAD-OmpA-m Cherry中,经酶切和测序证实,成功构建了重组质粒pBAD-OmpA-mCherry-CEA。重组菌经阿拉伯糖诱导后可检测到红色荧光,荧光强度在胰酶的作用下降低,全菌ELISA检测呈阳性反应,提示融合蛋白和目的蛋白质在重组菌表面展示成功。由Western印迹分析可知,融合蛋白质的相对分子质量约为85 k D,符合预期设计。进一步的研究提示,重组菌在大肠杆菌表面展示的癌胚抗原单链抗体具有生物活性,能够有效结合A549细胞裂解液的癌胚抗原。在细菌侵染细胞实验中,与对照组相比,重组菌孵育A549细胞后细胞内可明显观察到点状红色荧光,证明重组菌能够靶向侵入癌胚抗原阳性肿瘤细胞。本研究为癌胚抗原相关的快速诊断和基于细菌载体的肿瘤靶向治疗奠定了实验基础。

摘要：目的:建立血浆中甘草酸二铵浓度的高效液相测定方法,并探讨甘草酸二铵及其磷脂复合物注射液在家兔血中的药代动力学过程。方法:甘草酸二铵(50mg·kg-1)和磷脂复合物(100mg·kg-1)家兔耳缘静脉注射后10、20、30、45、60分钟,2、4、6、8、10小时采血,RP-HPLC法测定兔血浆中药物浓度,用DAS软件拟合药动学参数。结果:甘草酸二铵平均回收率为(111.1±8.6)%,高中低浓度的精密度分别为日内8.8%、4.2%、1.9%,日间8.4%、9.9%、2.2%。血药浓度在3.0～1000.0mg·L-1时,浓度与峰面积有良好的线性关系(r2=0.9872)。甘草酸二铵和脂质体注射液在家兔体内的主要药动参数为:甘草酸二铵:AUC(0～t)=(101953.9±14919.5)mg/min·L-1,AUC(0～∞)=(118154.2±14854.6)mg/min·L-1,CLz=(0.00016±0.0004)L/min·kg-1,Tmax=(26.6±14.6)min,Cmax=(586.7±108.3)mg·L-1;磷脂复合物:AUC(0～t)=(144056.0±38659.0)mg/min·L-1AUC(0～∞)=(163463.4±41067.0)mg/min·L-1,CLz=(00075±0.0005)L/min·kg-1,Tmax=(22.5±10.5)min,Cmax=(714.1±208.1)mg·L-1。结论:甘草酸二铵磷脂复合物注射液的生物利用度较高,达峰浓度较高,作用较强,且在体内较快地被清除,初步符合了预定设计要求。

摘要：运用单因素法和均匀设计法对链霉菌Fu培养基组成及发酵时间进行了优化,并用3 L发酵罐对菌种产抗生素的发酵动力学规律做了初步的探索。实验结果表明,菌种最佳摇瓶发酵培养基组成(%)为:可溶性淀粉7、酵母粉0.2、黄豆粉0.5、NaCl 0.15、MgSO40.03、K2HPO40.04,发酵时间3 d。在罐培养至40 h左右菌体浓度达到最大,产抗生素水平在48 h左右达到最大。