摘要：【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10%SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10%SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。

摘要：为适应社会发展需求,垃圾收费作为环卫行业的一项主要工作,应逐渐实现高科技信息化管理。基于SQL Server设计并开发了一套C/S模式的垃圾收费信息管理系统。具有界面友好、使用灵活简单等特点,在宝鸡市垃圾收费处已正式投入使用。该系统运行状态良好,用户反馈评价优良,达到了预期需求的开发目标。

摘要：为研究菌株混合发酵对烟叶品质的影响,通过使用解淀粉芽孢杆菌GUHP86与GZU03复配菌种对大理红大CL314烟叶进行人工控制发酵,对发酵工艺进行探究,采用气相-质谱联用仪(GC-MS)检测发酵前后风味物质变化。在单因素和Plackett-Burman试验的基础上,采用中心组合设计(Central composite design)响应面法对发酵条件进行探究,得到最佳发酵工艺:复配菌种接种量24.0%、葡萄糖添加量1.20%、水分含量40%、接种比例(GZU03∶GUHP86)1∶1、大豆蛋白添加量1.00%。GC-MS检测发现,发酵后烟叶中由于解淀粉芽孢杆菌的代谢作用,烟碱相对含量降低6.84个百分点,多种烟叶香味物质如芳樟醇、β-大马酮和β-紫罗兰酮等相对含量增加。结果表明,复合菌发酵比单菌发酵和自然发酵对烟叶质量提升有明显作用。可见对烟叶进行混菌发酵,能缩短发酵时间,提高蛋白酶活力和烟叶感官质量。

摘要：采用粉煤灰、矿粉、硅灰作为掺和料,制备低水胶比的高性能混凝土.通过干湿交替环境下的混凝土配合比正交试验,研究了有关因素对混凝土硫酸盐腐蚀和泛碱的影响.结果表明:水胶比对混凝土性质的影响最大,硅灰掺量影响次之,粉煤灰和矿粉的掺量影响较小;除了水胶比,其余因素的影响效果均随掺量的变化而波动;综合考虑混凝土腐蚀和泛碱问题,确定本试验最优的配比设计为水胶比0.33、硅灰10%、粉煤灰10%和矿粉15%;采用低水胶比和矿物掺和料的高性能混凝土有利于水化产物的结晶,掺和料的填充效应和叠加的火山灰效应也起到密实混凝土的作用.

摘要：分析了宝鸡市垃圾收费传统征管模式存在的弊端,针对此设计并开发了1套基于C/S模式的垃圾收费信息管理系统。介绍了该系统的功能模块、界面、子模块的设计与实现方式,实际应用效果表明该系统安全可靠,运营效率高。

摘要：为适应新时代对劳动教育提出的新要求,以高职院校大学生的劳动价值观培养为导向,从大学生的劳动素养研究现状出发,结合产业劳动力的劳动价值观调研结果,完善构建职业院校劳动教育改革体系。运用文献查阅法,通过分层抽样进行深度访谈并设计结构化调查问卷,对3 955名高职学生进行大样本调研,了解目前高职院校大学生的劳动素养现状和对劳动教育体系的构建愿景等,同时线下选取典型产业的7位劳动者进行实地访谈,线上邀请299名劳动者填写问卷,深入了解劳动力生存情况和劳动价值观等。对高职院校学生群体开展以劳动价值观为导向的劳动教育改革实践,为人才培养路径探索提供依据。

摘要：在云南文山某铜矿矿体群开采设计过程中,通过对各矿体通风网络进行真三维解算,从全局的角度来确定矿山通风系统方案。在对I号矿体下部区段开采设计过程中,提出了一翼回风和两翼回风的抽出式机械通风系统。通过对两个方案进行网络解算和技术经济比较,结果表明,方案2 (一翼回风)比方案1 (两翼回风)节约通风费用276. 18万元,建议矿山采用方案2作为矿山的通风系统。对中小型复杂矿体群通风系统优化设计思路及成果,可为类似矿山生产提供参考。