摘要：根据转基因玉米GA21品系的特异序列设计了3套环介导等温扩增(LAMP)引物。通过反应温度优化、特异性测定,筛选到1套特异性好的LAMP引物,包括内引物、外引物和环引物各1对。在LAMP反应体系中加入SYBR Green I荧光染料,在实时荧光定量PCR仪上进行实时监测,对筛选到的LAMP引物进行反应条件、反应体系的优化,建立了转基因玉米GA21品系LAMP检测方法。对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,结果表明建立的LAMP检测方法能特异、灵敏、稳定地检测转基因玉米GA21品系,检测限达到0.05%。将建立的LAMP检测方法应用于玉米及其制品中GA21品系的检测,检测结果与实时荧光PCR法的结果完全一致。

摘要：根据澳洲坚果豌豆蛋白AMP2基因序列,利用设计软件Primer Explorer Version 4设计并筛选了食品过敏原澳洲坚果的环介导等温扩增引物,对反应体系和反应条件进行优化,建立澳洲坚果的环介导等温扩增检测方法,结果判断可采用实时荧光法和荧光染料终点显色法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性评价,结果显示:该方法能够特异性、灵敏、稳定地检测食品中的澳洲坚果成分,检测低限为0.5%。此外,对7种市售食品样品的检测结果表明,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0,在市售食品的过敏原成分检测上较商业化快速检测试纸条更加稳定可靠。

摘要：根据巴西坚果2S白蛋白基因序列,利用设计软件Primer Explorer Version 4设计并筛选了食品过敏原巴西坚果的环介导等温扩增引物,对反应体系和反应条件进行了优化,建立了巴西坚果的环介导等温扩增检测方法,结果判断可采用实时荧光法和荧光染料终点显色法。以澳洲坚果、开心果、碧根果等17种常见坚果来验证方法的特异性;将巴西坚果DNA进行梯度稀释后验证方法的灵敏度;将0.5%、1%和1.5%3个浓度梯度的巴西坚果DNA重复检测20次来验证方法的稳定性。结果表明,本方法能够特异、灵敏、稳定地检测食品中的巴西坚果成分,检测低限为0.5%。此外,对7种市售食品样品的检测结果表明,该方法与食品标签标示的过敏原成分结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0%。

摘要：本文对国内外研究者设计的11对PCR引物检测柑桔黄龙病菌的特异性进行了比较。其中包括5对一步法PCR引物(A2/J5、GB1/GB3、MP1/MP2、CQULA03F/CQULA03R和CLA-F2/CLA-R2)和6对巢式PCR引物(P1/P2、P3/P4、LP1/LP2、LP3/LP4、DP1/DP2和DP3/DP4)。结果发现,MP1/MP2和CLA-F2/CLA-R2 2对引物具有非特异性,不能区分亚洲柑桔黄龙病菌和非洲柑桔黄龙病菌,其余的9对引物特异性较好。本文旨在为研究者选择柑桔黄龙病菌扩增引物提供参考。

摘要：以生活用纸中荧光增白剂检测为实例,通过分析9家协同实验室在相同检测条件下、利用同一新制定标准检测的数据,探讨并建立了生活用纸中荧光增白剂协同实验评价分析方法。通过设计合理的验证方案,对新研制标准的精确度和正确度进行了验证。结果表明,该分析方法清晰、模式简便,可为标准研制人员提供思路,并可用于纸制品有关标准适用性和重复性的评价分析。

摘要：建立了钼蓝分光光度法测定钼铁中硅的方法。通过溶样方法的比较、基体影响、杂质离子的影响确定了样品的溶解方法;同时研究了钼酸铵用量、硫酸亚铁铵用量、波长等对硅测定的影响。在优化条件下对4个不同级别试样进行了测定,RSD〈10%,回收率在96.8%~103.1%之间。能够满足GB/T 3649—2008标准的要求,适用于0.016%~2.5%硅含量的测定。

摘要：根据转基因大豆A2704-12品系的特异序列设计了4套环介导等温扩增(LAMP)引物。通过反应温度优化、特异性测定,筛选出1套特异性强的LAMP引物。对筛选到的LAMP引物进行反应条件、反应体系的优化,建立了转基因大豆A2704-12品系的LAMP检测方法。结果表明:建立的LAMP检测方法能特异、稳定地检测转基因大豆A2704-12品系,检测限达到0.1%(m/m)。应用建立的LAMP方法检测大豆及其制品中转基因大豆A2704-12品系,检测结果与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)结果完全一致。

摘要：伪狂犬病是世界范围内严重影响养猪业发展的重要动物疫病,快速检测是有效防控该病的重要措施之一。为了建立该病的快速分子生物学检测方法,根据GenBank中登录的伪狂犬病病毒gD基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立了用于检测伪狂犬病病毒的实时荧光PCR方法。特异性试验结果表明,该检测方法只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.42pg/μL的总DNA,与PCR方法的灵敏度对比试验表明,其敏感度比PCR至少高10倍。对同一样品进行重复性检测,在组内及组间检测的荧光扩增曲线基本重叠,证实其重复性好。对180份临床样品进行伪狂犬病病毒核酸检测,结果发现有52份阳性样品。结果表明,所建立的实时荧光PCR方法可对伪狂犬病病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点,是开展伪狂犬病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。

摘要：为实现转基因甜菜品系H7-1的标识管理和精准定量,根据H7-1的5’边界序列和甜菜谷氨酰胺合成酶基因(glutamine synthetase,GS)设计引物和探针建立双重数字PCR检测体系。该方法的特异性、灵敏度、精密度和准确度均进行了测试。结果显示:建立的转基因甜菜H7-1数字PCR检测方法特异于H7-1品系检测,在20μL反应体中H7-1品系特异性序列和内源基因GS的定量下限(limit of quantitation,LOQ)分别为3.1拷贝/μL和6.3拷贝/μL,检测下限(limit of detection,LOD)检出限分别为0.6拷贝/μL和1.3拷贝/μL,精密度和准确度在可接受范围内,该定量方法不依赖于标准曲线建立,可便捷的应用于转基因甜菜H7-1成分的精确定量检测。

摘要：根据转基因玉米品系Bt176外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系Bt176的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价。评价结果表明:该方法定性检测低限为0.5%,特异性和稳定性均达到100%。