摘要：目的 研究酸敏感离子通道(ASIC)1a对帕金森细胞炎症反应的作用机制。方法 500μmol/L MPP^(+)碘化物诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)建立帕金森病模型,根据ASIC1a基因序列设计siRNA和阴性对照(si-neg)。实验分为对照组、模型组、siRNA组、si-neg(阴性对照)组。细胞计数试剂盒(CCK)8法检测MPP^(+)碘化物对SH-SY5Y细胞存活率的影响;免疫荧光检测ASIC1a、多巴胺转运体(DAT)表达;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染效率、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切后的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-Caspase)-3 mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8水平;Western印迹检测ASIC1a、p65、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2及磷酸化蛋白表达。结果 500μmol/L MPP^(+)碘化物抑制SH-SY5Y细胞增殖,激活ASIC1a,减少DAT荧光强度,Bax、cleaved-Caspase-3 mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达减少,增加TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平,并且抑制p65、ERK1/2蛋白磷酸化水平差异均显著(P<0.05);沉默ASIC1a后,在帕金森细胞中,ASIC1a mRNA表达显著降低,ASIC1a荧光强度显著降低,DAT荧光强度显著增加,Bax、cleaved-Caspase-3 mRNA表达显著增加,Bcl-2 mRNA表达显著降低,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平明显增加,p65、ERK1/2蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.001)。结论 沉默ASIC1a能够促进帕金森病模型细胞炎症反应和凋亡,其作用机理与降低p65、ERK1/2磷酸化有关。

摘要：目的研究HJURP基因对肾癌细胞生物学功能的影响。方法利用TCGA肾癌数据库分析HJURP基因在肾癌中的表达及对预后的影响,qPCR进一步检测HJURP基因在20例肾癌组织,肾癌细胞株CAKI-1、786O、A498及正常化肾小管细胞HK2中的表达。分别设计HJURP特异性siRNA(si-HJURP组)和对照序列(NC组)转染CAKI-1细胞株,采用细胞克隆形成实验和MTT法检测HJURP基因对肾癌细胞增殖活性影响,流式细胞术检测肾癌细胞周期变化,Transwell实验检测肾癌细胞迁移能力,Western blot检测上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白的表达变化。结果(1)TCGA数据库中HJURP在肾癌组织中显著高表达,且随着肿瘤分期的升高而增高(P<0.05)。HJURP高表达组患者总生存率和无病生存率明显较HJURP低表达组患者降低。(2)肾癌组织及肾癌细胞株中HJURP表达均高于癌旁组织及正常肾小管细胞。(3)细胞学实验结果显示,与NC组相比,si-HJURP组CAKI-1细胞增殖活性明显受抑制,G2期细胞比例增高,细胞迁移数量明显下降,EMT相关蛋白N-cadherin表达下降,E-cadherin表达升高,同时AKT通路关键蛋白p-AKT及p-GSK3β明显下调(P<0.05)。结论HJURP基因在肾癌中高表达,促进肾癌细胞的增殖及迁移,其可作为肾癌的潜在临床诊治靶点及预后标志物。

摘要：目的采用环介导等温扩增(LAMP)方法检测疟原虫DNA,并评价其检测效果。方法采集2013-2018年从疟疾流行区回国人员中确诊为疟疾患者的滤纸血样。根据疟原虫的18S r RNA序列,使用PrimerExplorer V5软件设计恶性疟原虫与非恶性疟原虫LAMP引物,建立疟原虫LAMP检测方法,进行敏感性、特异性、灵敏度和扩增效率评价,并与巢式PCR比较。检测钙黄绿素指示剂对LAMP反应的影响。结果LAMP和巢式PCR各检测96份疟疾患者血样(47份恶性疟血样和49份其他疟疾血样),均检出93份疟原虫阳性。LAMP检测结果显示,恶性疟血样均被检出,非恶性疟假阴性率为2.1%, 10份利什曼原虫玻片血、8份日本血吸虫感染兔血和38份健康人血均为阴性,与巢式PCR检测结果具有极高的一致性(Kappa值=0.956)。LAMP检测恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫的灵敏度分别为25、3、4、2个疟原虫/μl血。扩增效率检测结果显示,4种疟原虫LAMP反应出现浊度时间(Tt值)均小于60 min,速率曲线峰值(Df)达0.14以上,其中恶性疟原虫扩增效率较高,Tt值为20.4 min, Df达0.16。可视化LAMP检测结果显示,钙黄绿素指示剂对不同种疟原虫LAMP反应延时约8~22 min, Df下降约21%~35%。结论 LAMP技术检测疟原虫有高度敏感性、特异性和灵敏度,且可视,具有在现场及基层医疗机构应用前景。

摘要：2022年于卫氏并殖吸虫流行区湖北兴山县和保康县分别采集34只和27只溪蟹,捣碎后用NaOH消化法提取DNA。根据卫氏并殖吸虫5.8S核糖体RNA序列,使用Primer Explorer V5软件设计卫氏并殖吸虫环介导等温扩增(LAMP)特异引物,建立卫氏并殖吸虫LAMP检测方法,评价该方法的特异性、灵敏度、扩增效率及现场应用效果,并与沉淀镜检法比较。结果显示,建立的LAMP检出限可达1个卫氏并殖吸虫囊蚴,且与日本血吸虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫、肝毛细线虫、钩虫等虫种无交叉反应。检测4份卫氏并殖吸虫囊蚴DNA样品,出现浊度时间(Tt值)和浊度速率峰值(Df)均值为29.0 min和0.237。LAMP检出兴山和保康县卫氏并殖吸虫阳性溪蟹分别为24只和0只,阳性率分别为70.6%(24/34)和0(0/27);沉淀镜检法检出囊蚴阳性溪蟹分别为23只和0只,阳性率分别为67.6%(23/34)和0(0/27),两种方法结果差异无统计学意义(χ^(2)=0.2,P>0.05)。建立的卫氏并殖吸虫LAMP检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可用于淡水蟹卫氏并殖吸虫流行区现场调查或筛查。

摘要：目的探讨孕妇行为生活方式与早产的关系,为母婴保健提供科学依据。方法采用前瞻性观察设计,以2012年9月—2014年10月在湖北省武汉市妇幼保健院定期产检并拟在该院分娩的11311名孕妇为研究对象,住院分娩时通过自制调查问卷、孕产妇保健手册和病历收集资料,组间比较使用χ2检验和Fisher确切概率法,采用非条件logistic回归分析进行多因素分析。结果共有11311名孕妇进入本研究。孕前半年吸烟与孕晚期每周锻炼不超过2d的孕妇早产的发生率较高,分别为14.94%和9.77%。logistic回归分析显示,早产可能的危险因素包括夫妻全年总收入<30000元(以≥200000元为参照,OR=2.50,95%CI=1.25~4.99),孕前半年吸烟(OR=2.42,95%CI=1.30~4.48),丈夫文化程度为初中及以下(以大专及以上为参照,OR=2.08,95%CI=1.60~2.69)、高中及中专(OR=1.45,95%CI=1.16~1.82),孕妇文化程度为初中及以下(OR=1.93,95%CI=1.51~2.47),孕晚期每周运动不超过2d(以每天运动为参照,OR=1.81,95%CI=1.52~2.15)。结论孕晚期每周运动不超过2d和孕前半年吸烟会增加早产的发生风险。

摘要：目的探索全科医生岗位胜任力的模型构建,分析影响全科医生能力的因素。方法通过设计问卷,开展调查,经因子分析构建模型,分组分析不同人口学特征的影响。结果全科医生胜任力模型的5个一级指标为:以患者为中心、职业素养、团队协作、解决问题、学习能力,不同的人口学特征对胜任力的亚方面重视程度不同。结论社会对全科医生的综合能力提出了更高层次的要求,可根据医生的人口学特征差异进行针对性的考核培训。

摘要：目的了解达到血吸虫病传播控制标准前(2013年)及达标后第4年(2017年)武汉市血防专业机构能力建设情况,为武汉市强化能力建设、巩固血防成果提供依据。方法设计调查表、建立数据库,对比分析达标前后全市血防专业机构人员及基本建设情况。结果全市血防人员数量由361人增至385人,13家血防机构中,5家独立血防所人员占比超85%;年龄分布趋于合理,平均年龄由42. 89岁降至41. 29岁,减小1. 6岁(P=0. 000),35岁以下占比由16. 34%升至27. 01%;学历与职称结构有了一定改善,5年来本科及以上学历人数增加60人,高中级职称人员占比增加,无职称人员由20. 78%降至15. 32%,但2017年区血防机构高级、中级、初级职称之比为1:8. 3:8. 4,职称比例仍处于失调状态;建筑面积明显不足,实验用房面积基本达标,实验室本科学历人才增加,但仍存在仪器配置更新缓慢、人员年龄偏大、技术职称低等问题。结论达标后,武汉市血防专业机构血防队伍较为稳定,人员素质与结构有一定改善,市级机构基本合理;但区级机构与疾控人力资源标准相比仍有较大差距,并且基础设施老化严重。应继续强化能力建设,加快消除血吸虫病的进程。

摘要：目的优化黄芩苷磷脂复合物制备工艺。方法采用溶剂法制备黄芩苷磷脂复合物,黄芩苷含量测定采用高效液相色谱法,DIKMA C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(53:47),柱温30℃,流速0.8mL/min,检测波长280nm,进样量10μL;以复合率作为评价指标,采用单因素试验依次考察投料比、药物浓度、反应温度和反应时间;设计四因素三水平正交试验,以复合率与复合物中黄芩苷质量分数为指标进行综合评分,优选出黄芩苷磷脂复合物制备工艺。结果确定最优工艺条件为投料比1:3,黄芩苷浓度2.5mg/mL,反应温度50℃,反应时间为1h。结论该制备工艺稳定可行。

摘要：目的优化磷酸川芎嗪(TMPP)-冰片(B)脂质体的制备方法。方法采用乙醇注入式(NH4)2SO4梯度法制备TMPP-B脂质体,利用超速离心法测定包封率。以包封率为考察指标,通过正交设计考察磷脂-胆固醇质量比(因素A)、TMPP-(磷脂+胆固醇)质量比(因素B)、水化时间(因素C)和(NH4)2SO4浓度(因素D)对制备工艺的影响。结果对TMPP-B脂质体包封率的影响顺序为A>D>B>C,最佳工艺条件为A1B2C1D2。按此优化工艺制备3批TMPP-B脂质体,其平均粒径为(136.10±6.30)nm,分布均匀,Zeta电位为(-35.70±3.60)mV,TMPP包封率为(73.14±0.71)%。结论该制备工艺的脂质体包封率高,分布均匀,形态好,质量稳定,该方法简单合理。

摘要：目的建立PCR-RFLP方法检测疟原虫,并评价其应用效果。方法收集2010-2018年武汉市输入性疟疾患者血样。根据4种人疟原虫线粒体细胞色素b(Cytb)基因属、种特异位点,设计1组疟原虫属特异性公共引物。提取患者血样中的疟原虫DNA,巢式PCR扩增得到产物后,用限制性内切酶AluⅠ进行酶切,不同种疟原虫将产生特异性的酶切条带,建立PCR-RFLP检测方法。分析该方法的灵敏度和特异度,并与巢式PCR相比较,评价其应用价值。结果PCR-RFLP检测恶性疟、三日疟、间日疟和卵形疟血样(包括curtisi亚种和wallikeri亚种),最低检出阈值分别为2.5、2、3.6、4、1.5个虫/μL血。共检测121份疟疾血样和45份健康人血样,巢式PCR检出阳性115份,PCR-RFLP方法检出阳性118份,灵敏度分别为95.0%和97.5%,结果一致性较好(Kappa值=0.93),差异无统计学意义(χ2=0.8,P>0.05)。PCR-RFLP分别检测日本血吸虫、利氏曼原虫、隐孢子虫样品无任何扩增条带产生,均为阴性。结论建立的PCR-RFLP方法实验流程相对简单,且检出阈值低,敏感度、特异度高,检测结果易于判断,是一种新的疟原虫核酸检测方法。