摘要：目的探讨外周血胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-II)-mRNA在肝癌诊断和判断预后中的价值。方法从癌组织和外周血中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶作用合成IGF-ⅡcDNA,再分别以RT-PCR扩增IGF-ⅡcDNA片段,分析其在肝病诊断与鉴别中的临床价值。结果肝癌组织和外周血中扩增出的IGF-Ⅱ基因片段大小为170bp,并与原设计相一致。肝癌、癌灶周围和远癌组织中,IGF-Ⅱ基因检出率分别为100%、53.3%和0。肝癌患者外周血IGF-II基因片段阳性率34.2%,在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中分别为14.3%、19.4%和45.5%,在伴有肝外转移肝癌中全数阳性,在AFP0.05)。结论外周血IGF-Ⅱ基因分析有助于肝癌的诊断、转移判别及术后复发的监测。

摘要：目的基于自主研发的专用软件系统设计制作数字化头颈部放疗口腔定位支架,评价其与传统放疗口腔定位支架的临床效果差异。方法选取2021年7至12月于南京大学医学院附属口腔医院·南京市口腔医院口腔修复科就诊的鼻咽癌放疗术前行口腔检查的患者30例,年龄20~71岁,男性15例,女性15例。根据患者意愿分为3组,对照组(不戴用放疗口腔定位支架)、传统支架组(戴用传统放疗口腔定位支架)、数字化支架组(戴用数字化放疗口腔定位支架),每组各10例。计算两种定位支架的制作耗时,分别于初戴和放疗结束时由患者对支架戴用舒适度进行视觉模拟评分,并于放疗结束后统计分析放疗靶区和周围健康组织的受照剂量。结果数字化放疗口腔定位支架的制作耗时[(209±7)min]显著短于传统放疗口腔定位支架[(490±10)min](t=69.85,P<0.001)。数字化支架组支架戴用舒适度评分[初戴和放疗结束时分别为5(3,6)和4(3,5)分]显著优于传统支架组[初戴和放疗结束时分别为7(3,7)和7(3,7)分](U=22.00,P=0.033;U=20.50,P=0.023)。3组患者放疗靶区总受照剂量差异无统计学意义(F=0.94,P=0.404),传统支架组和数字化支架组患者舌[分别为(36.74±5.45)和(35.96±4.98)Gy]和下颌骨[分别为(35.46±4.19)和(35.34±3.98)Gy]的受照剂量均显著小于对照组患者[舌:(41.49±4.46)Gy;下颌骨:(39.32±3.52)Gy](P<0.05)。结论鼻咽癌头颈部放疗口腔定位支架可显著降低患者舌和下颌骨的受照剂量,数字化放疗口腔定位支架比传统支架的制作耗时更短,患者戴用舒适度更佳。

摘要：目的利用激光熔融数字化导板技术获得钙化根管治疗的新方法,并评估其准确性。方法采用激光熔融数字化导板技术辅助2例前牙钙化根管的治疗。术前使用锥形束CT(CBCT)扫描患者上颌牙,建立三维牙体硬组织根管系统模型;制取患者上颌印模,三维扫描仪扫描模型,整合CBCT及三维扫描数据,通过Mimics 19.0及3-matic 11.0软件设计开髓路径,使用钴铬合金激光熔融法打印导板,在根管导板引导下开髓及打通钙化段根管,完成根管治疗。测量术前开髓设计路径和术后实际路径的位置和角度偏差。结果2例患牙均获得较好的治疗效果。病例1的开髓角度偏差为1.77°,钻基底偏差为0.403~0.497 mm,钻尖端偏差为0.433~0.537 mm。病例2的角度偏差为3.26°,钻基底偏差为0.183~0.347 mm,钻尖端偏差为0.310~0.463 mm。结论钴铬合金激光熔融根管导板辅助建立根管通道是治疗钙化根管的有效方法,可作为钙化根管治疗的新策略。

摘要：目的建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子(GRAF)基因启动子甲基化。方法设计针对GRAF基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系,对不同DNA模板进行检测,评价方法的特异性、重复性和灵敏度;对10例急性髓系白血病(AML)标本进行检测。结果建立的MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;检测不同稀释度的甲基化阳性模板,其最大灵敏度可达2%;在不同时间进行MSP检测的结果均一致;对10例AML患者的初步检测发现7例存在着GRAF基因启动子甲基化。结论成功建立了检测GRAF基因启动子甲基化的MSP方法,有良好的特异性、灵敏度和重复性,可用于临床AML标本的批量检测。

摘要：目的:探讨靶向骨桥蛋白基因(osteopontin,OPN)的siRNA片段对U87胶质瘤细胞生长和侵袭力的影响及其可能的作用机制。方法:根据OPN基因序列设计并合成的siRNA片段(OPN-RNAi)转染U87细胞。MTT法检测U87细胞增殖;Western blotting检测OPN及基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)2、MMP9蛋白的表达;Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的侵袭力;明胶酶谱法检测MMP2、MMP9的酶活性。结果:体外合成的OPN-RNAi能有效抑制U87细胞中OPN蛋白的表达(P<0.05),OPN-RNAi同时还能下调MMP2、MMP9蛋白的表达(P<0.05)及其酶活性(P<0.01),并抑制U87细胞的增殖(P<0.05)和侵袭力(P<0.05)。结论:OPN-RNAi能够有效抑制U87胶质瘤细胞的生长及其侵袭力,其机制与其抑制OPN下游基因MMP2、MMP9的表达和酶活性有关。

摘要：复发、难治性急性髓系白血病（AML）总体预后较差，且目前仍缺乏统一的、标准的再诱导化疗方案。我们设计应用去甲氧柔红霉素（IDA）与小剂量阿糖胞苷（Ara-C）、G-CSF组成的IAG方案对复发、难治陛AML患者进行再诱导治疗，现报道如下。

摘要：目的探讨环氧合酶-2(COX-2)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达质粒对人结肠癌HT-29细胞COX-2表达和生长的影响。方法设计短发夹结构的COX-2 siRNA对应模版DNA序列,构建重组质粒pshCOX-2。将重组质粒转染人结肠癌HT-29细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测COX-2表达。用四氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪观察COX-2表达被抑制后细胞的生长情况,放射免疫法(RIA)和ELISA法分别检测培养上清中PGE2和VEGF的含量变化。结果酶切及测序证实质粒pshCOX-2构建成功。转染重组质粒72h后可以显著抑制HT-29细胞COX-2 mRNA和蛋白表达(P<0.05),细胞生长受抑,凋亡细胞数显著增加(P<0.05),细胞PGE2和VEGF的产生受抑制(P<0.05)。结论成功构建的COX-2 siRNA真核表达质粒pshCOX-2通过抑制人结肠癌HT-29细胞COX-2基因表达,从而抑制细胞生长、PGE2合成和VEGF的产生。

摘要：目的构建大鼠骨桥蛋白（OPN）基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO-1-OPN-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用逆转录-聚合酶链反应（***）检测VSMCsOPNmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测VSMCOPN蛋白表达水平；噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PLKO-1-OPN—shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPNmRNA及蛋白的表达水平，OPN蛋白表达明显下降，其中以PLKO-1-OPN2-shRNA最为明显，达到90％以上；转染PLKO-1-OPN2-shRNA后72h的细胞增殖能力[吸光度（A）值=0．365±0．011]明显低于未处理组（A值=0．941±0．028）和阴性对照组细胞（A值：0．941±0．040，P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（20．44±2．69）％和晚期细胞凋亡率（16．79±1．01）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO-1-OPN2-shRNA，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。

摘要：背景:纤维蛋白凝胶已被证实为优质的生物材料,其在神经组织工程中亦得到应用,既往研究表明纤维蛋白凝胶可以做为一些移植细胞的支架材料。目的:观察纤维蛋白凝胶与大鼠嗅鞘细胞的生物相容性。设计、时间与地点:体外细胞学对比观察,于2007-08/2008-02在南通大学神经生物学研究所完成。材料:将纤维蛋白单体与催化剂混合制成纤维蛋白凝胶;取SD大鼠嗅球,行嗅鞘细胞原代培养。方法:实验分为对照组(单纯培养嗅鞘细胞)和纤维蛋白凝胶组(嗅鞘细胞与纤维蛋白凝胶联合培养)。培养1周后冰冻切片,行免疫荧光抗体标记,显微镜下观察及检测。主要观察指标:嗅鞘细胞形态学,细胞计数、胞体面积及细胞周长。结果:嗅鞘细胞接种到纤维蛋白凝胶后,大多数嗅鞘细胞能在纤维蛋白凝胶内生长,悬浮在纤维蛋白凝胶之中,以下层为主,接种7d后细胞胞体呈梭形或三角形,多为双极或三极。纤维蛋白凝胶组的嗅鞘细胞数明显多于对照组(P0.05)。结论:纤维蛋白凝胶与嗅鞘细胞具有良好的生物相容性,嗅鞘细胞能够在纤维蛋白凝胶内存活和增殖。

摘要：目的观察芳香烃受体(AHR)基因沉默后对P19细胞向心肌分化进程中WNT信号通路的影响。方法根据小鼠AHR基因序列设计并构建AHR基因的shRNA真核表达载体,将AHR干扰质粒转染至P19细胞,通过G418筛选出稳定的AHR基因沉默表达的阳性细胞株,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测P19细胞分化过程中WNT信号通路中关键基因GSK3β、β-catenin mRNA的表达水平。结果构建的AHR-shRNA表达质粒能显著抑制AHR基因的表达;随着P19细胞向心肌细胞分化,实验组β-catenin基因的相对表达量低于对照组,而GSK3β基因的相对表达量则高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论干扰AHR基因表达对心脏发育过程中WNT信号通路产生调节作用。