摘要：目的建立一种先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺陷的快速基因检测方法。方法选择中国人群21-羟化酶缺乏症相关基因CYP21A2的突变热点Exon3 Del 8bp、Q318X、R356W、IVS2 A/C>G、I172N、P30L和V281L共7个位点进行巢式PCR。设计上述突变热点的单链延伸引物进行扩增,采用SNaPshot技术对上述7个突变热点进行一次性基因分型检测。结果建立了一套满足质量控制标准的CYP21A2基因快速检测的方法,5例阳性干血片标本患者SNaPshot技术和测序技术的结果完全吻合,有2例复合突变,3例纯合突变,显示SNaPshot技术高度的特异性和灵敏度。结论采用SNaPshot技术检测CYP21A2基因具有高通量、准确、对样本容受性高的特点,便于临床应用。

摘要：目的:胰瘘仍是胰十二指肠切除术后主要的并发症和死亡原因之一,可分为单纯性胰瘘和临床重症胰瘘。回顾性分析表明多种胰肠吻合口重建方式均能降低胰瘘发生率,但极少见前瞻性随机化的临床研究。文中采用前瞻性随机化设计旨在比较胰管空肠黏膜吻合与胰肠套入式吻合对术后胰瘘的影响。方法:64例胰十二指肠切除术患者随机分为胰管空肠黏膜吻合组(A组,n=32例)和胰肠套入式吻合组(B组,n=32例)。所有胰腺残端均为易致胰瘘的软质胰腺。结果:2组病例在基础疾病、病理类型、胰管直径、胰管引流方式等方面没有显著差异。共有21例(32.8%)患者出现手术并发症,其中8例(12.5%)并发胰瘘(胰管黏膜吻合组2例为6.3%,胰肠套入式吻合组6例为18.8%,P>0.05);胰管黏膜吻合组未发生一例有明显临床症状的Ⅱ型重症胰瘘,与胰肠套入式吻合组的4例Ⅱ型胰瘘相比亦无显著差异(0vs12.5%,P=0.057)。胰肠套入式吻合组患者有2例(6.3%)患者再手术。2组病例各有1例死亡(3.1%)。术后住院时间无明显差异(A组为19 d,B组为21 d,P>0.05)。而所有胰瘘患者均经非手术治疗后痊愈。结论:胰管空肠黏膜吻合与胰肠套入式吻合相比,并未显著降低胰十二指肠切除术后临床胰瘘发生率。

摘要：目的 :探讨天幕脑膜瘤的分型和手术入路的选择。　方法 :对 1992年 1月至 2 0 0 2年 12月间收治的天幕脑膜瘤进行回顾性分析 ,并按分型选择不同的手术入路。本组 5 6例 ,其中内侧型 2 8例 ;外侧型 17例 ;镰幕型 11例。对主要向幕上发展者 ,根据肿瘤的部位 ,采用扩大翼点入路、颞下入路、颞枕部入路和枕部入路 ;肿瘤全部或主体在颅后窝者 ,采用枕下或枕部 枕下联合开颅术 ;跨幕者采用颞下 乙状窦前入路 ;镰幕型均采用枕部入路。　结果 :本组肿瘤全切除 5 3例 ,部分切除 3例 ,全组共死亡 2例 (3.6 % ) ,术后出现新增神经功能障碍 5例 ,复发 6例。　结论 :天幕脑膜瘤手术入路的选择必须根据患者的具体情况进行个体化设计 ;

摘要：目的：采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）法检测急性髓系白血病（AML）中黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因转录本,初步评价其在AML中的临床意义。方法：设计PRAME基因引物,建立扩增PRAME基因转录本的EvaGreen染料法RQ-PCR法,对PRAME转录本克隆质粒进行扩增,评价其特异性、重复性和灵敏性。并对10例AML患者的骨髓单个核细胞标本进行初步检测。结果：所建立的EvaGreen RQ-PCR法具有良好的特异性,最低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但其重复性差,而10^8～10^2拷贝/μl阳模的重复性良好。10例初诊AML患者PRAME转录本绝对含量为4.91×10^2～8.07×10^5拷贝/50ng（中位7.26×10^3拷贝/50ng）,ABL标化后的相对含量为4.42%～13 170.01%（中位67.98%）。而对照组8例缺铁性贫血患者中PRAME转录本相对含量为0.00%～0.01%（中位0）。1例AML患者诱导缓解后PRAME转录本下降,复发时又明显升高。结论：EvaGreen染料法RQ-PCR检测PRAME转录本方法敏感可靠,可用于AML患者临床监测。

摘要：目的:建立检测急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者PML/RARα融合基因6种特异性异构体(bcr1/2、P4R3、P46R3、bcr3及P2R3)的实时定量PCR(RQ-PCR)技术,并评价其特异性。方法:设计不同异构体的特异性引物和探针,建立异构体特异性RQ-PCR方法对6种特异性异构体PML/RARα阳性模板进行扩增,评价异构体定量检测的特异性,并检测10例APL患者中不同异构体的含量。结果:所建立的各异构体特异性RQ-PCR法最大敏感性均达10拷贝/μL,但其重复性较差,108~102拷贝/μL阳性模板的重复性良好,正常对照及空白对照无扩增信号,每个异构体特异性RQ-PCR均不能扩增其他异构体。5例长型(bcr1)和1例变异型(bcr2)阳性APL患者中bcr1/2异构体表达量为7.71%~89.71%(中位数13.70%),P4R3异构体表达量为0.71%~16.26%(中位数4.48%),P46R3异构体表达量为3.57%~14.09%(中位数6.33%)。4例短型(bcr3)患者中bcr3异构体表达量为21.43%~197.04%(中位数100.69%),P2R3异构体表达量为0.34%~9.07%(中位数2.45%)。1例短型患者经诱导治疗缓解后bcr3和P2R3异构体转录本明显下降,复发时又明显升高。结论:检测PML/RARα异构体特异性RQ-PCR方法敏感、可靠,可用于APL患者不同异构体的定量检测和微小残留病灶的随访监测。

摘要：目的:建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化。方法:设计针对DAPK基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系对甲基化阳性模板进行检测,评价其特异性、重复性和灵敏性,并经测序鉴定。结果:所建立的甲基化MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;对不同梯度稀释的甲基化阳性模板进行检测,其最大敏感性可达2%;在不同时间进行甲基化MSP检测的结果均一致。结论:成功建立的DAPK基因启动子甲基化MSP检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可用于肿瘤标本的批量检测。

摘要：目的比较两种羟乙基淀粉(HES200/0.5和HES130/0.4)及琥珀酰明胶对成人静脉血辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的影响。方法采集18例健康志愿者外周静脉血5 ml,采用随机区组设计,每份血样均参与下列各组研究。根据临床常用剂量设置20%、40%(体积比)两个血液稀释浓度,分为不同浓度HES200/0.5组[20%(H1组)、40%(H2组)];不同浓度HES130/0.4组[20%(V1组)、40%(V2组)];不同浓度琥珀酰明胶组[20%(G1组)、40%(G2组)];未稀释的全血的空白对照组(C组)。将全血在体外用相应剂量的药物预先培养24 h,然后加入刺激剂(氟波醇乙酯、离子霉素及蛋白质转运抑制剂),刺激4 h,采用流式细胞技术测定每份样本中Th1及Th2细胞亚群比例,并计算Th1与Th2细胞亚群的比值(Th1/Th2)。结果与C组比较,H1、V1组Th1细胞亚群比例升高(P<0.05或P<0.01),H2、V2组Th2细胞亚群比例下降(P<0.05或P<0.01);G2组Th1、Th2细胞亚群比例均下降(P<0.01);H2组、V1组、V2组、G2组Th1/Th2比值均升高(P<0.05或P<0.01)。H1、V1、G1组三组的Th1、Th2细胞亚群比例分别高于H2、V2、G2三组(P<0.05或P<0.01)。结论在20%浓度时,HES200/0.5、HES130/0.4可促使Th细胞向Th1细胞亚群分化,琥珀酰明胶作用不明显;在40%浓度时,HES200/0.5、HES130/0.4抑制Th2细胞亚群的分化,琥珀酰明胶对Th1和Th2细胞亚群的分化均有抑制作用。HES130/0.4在两种浓度下均可引起Th1/Th2比值升高。

摘要：肿瘤是一个多因素导致的疾病,必须从多方面考虑其治疗机制。医学及其相关领域的不断发展,尤其是分子生物学技术,使人们对肿瘤的发病机制有了进一步的认识,专门针对肿瘤的治疗方法也由此而生,即靶向治疗。靶向治疗是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点(此位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子,也可以是一个基因片段),来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞,从而提高疗效、减少毒副作用的一种方法。本文将对肿瘤靶向治疗的发展现状、作用靶点和机制、存在问题及展望予以综述。

摘要：本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT-PCR和免疫印迹反应检测flt-1 mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT-PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达。结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1 shRNA序列能不同程度干扰flt-1基因和蛋白在细胞中的表达,两组阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46.1%和65.4%;flt-1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力(4.3±1.2)%较对照组(12.7±1.9)%及(9.6±1.7)%明显降低(p<0.01)。结论:VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转染入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平下降。这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移。

摘要：目的:建立高分辨熔解曲线分析法(high-resolution melting analysis,HRMA),检测骨髓增生异常综合征(my-elodysplastic syndrome,MDS)患者中SF3B1基因的突变。方法:针对SF3B1基因热点突变位点(密码子E622、H662、K666和K700)设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增反应体系,对30例初诊MDS患者的骨髓标本进行PCR扩增,应用HRMA对相应PCR产物进行突变检测,并对HRMA检测结果进行DNA测序验证。结果:HR-MA检测发现2例MDS患者存在异常的熔解曲线,经DNA测序验证1例为K666M杂合子突变,另1例为K700E杂合子突变。所建立的HRMA技术检测SF3B1基因突变的灵敏度为0.05(5%)。结论:成功建立检测SF3B1基因突变的HRMA技术,可快速筛查MDS标本中的SF3B1基因突变。