摘要：目的探讨无防腐剂的1％利多卡因对年龄相关性白内障（ARC）患者晶状体上皮细胞（LEC）的作用及其作用机制。方法自身配对设计。收集75例（82只眼）ARC患者的晶状体前囊膜，其中男性40例（44只眼），女性35例（38只眼）；年龄41～85岁，平均67．97岁；皮质性自内障34只眼，核性22只眼，后囊膜下性26只眼。对超声乳化白内障吸除术中撕下的82只前囊膜标本分别用1％利多卡因溶液浸泡1min（利多卡因组）或用平衡液（BSS）浸泡1min（BSSⅠ、Ⅱ组）或不加入任何药物处理（对照组），然后行锥虫蓝-茜素红活性染色，显微镜照相，计数LEC及坏死细胞；并通过HE染色及电镜观察LEC的病理及超微结构改变。采用配对设计t检验和单因素方差分析对数据进行统计学分析。结果LEC坏死率对照组和BSSI组分别为（56．19±2．71）％和（57．23±1．98）％，两组间差异无统计学意义（t=2．0693，P=0．0505），利多卡因组和BSSⅡ组分别为（99．86±8．22）％和（57．64±7．00）％，二者比较差异有统计学意义（t=27．6781，P=0．0000），但利多卡因组内不同年龄组、不同性别、不同类型白内障患者LEC坏死率差异均无统计学意义（F值分别为0．03、2．37、0．71，P〉0．05）。HE染色显示利多卡因组LEC空泡变性明显，细胞与囊膜间出现空隙，胞核浓缩、碎裂、溶解。对照组和BSS组LEC结构基本正常，仍贴附于囊膜上。电镜下利多卡因组LEC形态不规则，细胞与细胞及细胞与囊膜间的连接崩解断裂，细胞膜内陷，细胞器严重变性，结构破坏，染色质凝聚、边集、裂解，不少细胞皱缩、脱落、消失。结论无防腐剂的1％利多卡因能松解ARC患者LEC间及细胞与囊膜间的连接，并可破坏细胞结构，导致细胞变性、坏死。

摘要：【摘要】目的探讨肺癌患者血清／外周血单个核细胞（PBMC）mieroRNA（miltNAs）表达谱的变化及其意义。方法本研究属于临床病例对照研究。建立基于实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测miRNA的方法，对其进行定量研究；2011年11月至2012年9月收集苏州大学附属第一医院住院及门诊肺癌患者61例，肺部良性疾病及健康对照各48例，各组间性别、年龄匹配，年龄为64（40-85）岁；采用RT-qPCR技术检测血清及配对PBMC中miR．20a、miR-21、mitl-25、mitl-29a、miR-31、miR-126、miR-129、miR-145、miR-205的表达水平，以U6为内参，用F=2^△Ct法计算。其中△Ct=CtmiRNA-CtU6。F表示目标miRNA表达量相对于同一样本u6的变化倍数。采用SPSS19．0软件进行统计分析，两组样本的比较采用成组设计的两样本t检验，多组数据的比较采用单因素方差分析，若差异有统计学意义，多组数据两两间的比较采用S-N-K检验，两变量之间关系采用Pearson相关性分析，对各样本中u6的ct值是否相等作Brown-Forsythe检验。结果肺癌患者血清miR．20a（F=271．64，P〈0．01）、mill-21（F=2232．51，P〈0．01）、miR-205（F=45．13，P〈0．01）、miR-29a（F=19．98，P〈0．01）、miR-25（F=313．19，P〈0．01）、miR-126（F=32．38，P〈0．叭）与健康对照组、肺部良性疾病组之间差异有统计学意义，且其中miR-29a（健康对照组3．27±2．44，肺部良性疾病组3．19±0．32，肺癌组0．99±2．31）、miR-25（健康对照组3．88±0．62，肺部良性疾病组3．42±0．51，肺癌组1．79±0．37）、miR-126（健康对照组3．19±1．77，肺部良性疾病组2．67±1．55，肺癌组0．96±0．84）在肺部疾病恶性化发展中呈下调趋势；肺癌miR-31（比值=1．85，P〈0．01）与健康对照相比升高，miR．145（比值=-3．00，P〈0．05）则下降；不同分化程度的肺癌患者血清mill-31（F=5．22，P〈0．01）表达差异有统计学意义，中分化时期（1．40±0．39）表达最高；当全身转移（特别是骨转移）时，miR-31（无转移1．16±0．40，有转移1．03±0．24，P〈0．05）表达下降。在与肺癌患者血清配对PBMC中，mill-126（F=690．58，P〈0．01）、miR-129（F=26．66，P〈0．01）、miR-145（F=48．57，P〈0．01）、miR-205（F=308．61，P〈0．01）、mill-25（F=218．57，P〈0．01）、miR-31（F=48．05，P〈0．01）与健康对照组、肺部良性疾病组之间差异有统计学意义，且其中miR-25（健康对照组6．54±0．63，肺部良性疾病组5．82±0．51，肺癌组3．97±0．55）、mill-31（健康对照组4．26±0．43，肺部良性疾病组4．08±0．37，肺癌组3．43±0．38）在肺部疾病恶性化发展中呈下调趋势；肺癌miR-20a（比值=1．39，P〈0．01）、miR．29a（比值=1．42，P〈0．01）与健康对照相比均升高；当全身转移时，miR-21（无转移5．11±0．24，有转移5．28±0．24，P〈0．05）表达上升；患者miR-31血清和PBMC中的表达水平呈负相关（r=-0．369，P〈0．05）；血清miR-29a（S=0．968，P〈0．01）、miR-25（S=0．906，P〈0．01）、miR-126（S=0．969，P〈0．01）的t／OC曲线下面积有统计学意义。结论miRNA可能参与了肺癌转移的多个步骤，包括局部浸润、渗出血管或在远处的初步生存和转移灶生长等，也可能影响肺癌的预后。mittNA的检测可为肺癌的进展机制提供一个新的研究线索。

摘要：目的观察小干扰RNA（siRNA）抑制大鼠垂体生长激素腺瘤细胞（GH3）中垂体特异转录因子．1（Pit-1）的基因表达对其生物学行为的影响。方法设计合成针对Pit-1基因的siRNA，经脂质体包裹转染GH3细胞。采用Westernblot、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法测定经siRNA转染24h后；Pit．1蛋白和Pit-1mRNA表达；用细胞计数试剂盒（CCK-8）细胞增殖-毒性检测法检测细胞生长增殖的变化；用流式细胞仪检测细胞凋亡的改变；制备Transwell小室测定GH3细胞体外侵袭能力的变化。结果siRNA显著地抑制Pit-1蛋白和Pit-1mRNA的表达水平，分别降低58．18％和75．82％；CCK．8法结果显示siRNA组细胞增长率明显低于与阴性对照组；流式细胞仪分析显示，siRNA组细胞凋亡率[（9．25000±0．99695）％]较阴性对照组[（2．89330±0．66516）％]增加；，siRNA组穿过Matrigel胶及滤膜的细胞数[（92．91±53．25）个]，与阴性对照组[（7．50±7．95）个]比较侵袭力明显减弱，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Pit-1siRNA能够有效地抑制GH3细胞的生长、促进其凋亡，降低侵袭力。

摘要：背景与目的:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,通常与体内某些基因突变导致细胞周期改变和抗凋亡机制有关。凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成员Survivin,通过诱导细胞增殖和抑制细胞凋亡参与了人类多种肿瘤的发生,其中包括膀胱癌。本研究探讨转染靶向survivin的小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)对膀胱癌生物学行为的影响。方法:设计、合成一对survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染T24膀胱癌细胞,分成不同的浓度组(50～200nmol/L);鼠异位膀胱肿瘤模型中瘤内注射不同剂量的siRNA(5!g和50!g)。分别于体外和体内观察siRNA对膀胱癌生物学行为的影响。结果:survivin编码基因序列特异性siRNA能有效下调survivin基因表达水平,最大效应浓度为100nmol/L,此时survivin表达水平下调了75.91%,并显著的抑制了细胞增殖,抑制率达55.29%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。同时,细胞凋亡率亦由2.8%增加至45.70%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠移植瘤内重复多次注射50!g survivin-siRNA能够明显抑制肿瘤生长,与对照相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:survivin-siRNA能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。

摘要：目的研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞（hBMSC）中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）3酶活性的影响及其抗凋亡作用。方法原代培养hBMSC。谷氨酸诱导hBMSC凋亡。设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰（siRNA）序列（Par-4-SiRNA-1、2），构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染hBMSC，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western印迹测定Smac蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶的活性。结果设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默，Par-4 mRNA水平分别被降低88％、67％，谷氨酸诱导hBMSC凋亡，凋亡百分率为（58．9±8．9）％。Par-4-SiRNA-1可显著拈抗谷氨酸的诱导凋亡作用，凋亡百分率降为（37．2±6．3）％（F=58．26，P〈0．01）。Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上凋（P〈0．01）和Caspase-3酶活性上调（P〈0．01）有显著的抑制作用（P〈0．01）。结论Par-4基因沉默能拈抗谷氨酸对hBMSC凋亡的诱导作用。其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关。

摘要：目的:应用NOD/SCID小鼠构建人急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID小鼠模型。方法:采用4-5周龄NOD/SCID小鼠,每只小鼠尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞,通过对小鼠一般状态,骨髓涂片,组织病理学检查等方法对白血病模型进行鉴定。结果:注射白血病细胞15 d后,小鼠开始出现精神萎靡、食欲不振、皮毛皱缩、后肢无力和脊柱抬高等表现,骨髓涂片可见成团分布的白血病细胞,脾脏组织病理切片亦可见白血病细胞浸润。结论:通过尾静脉注射Nalm-6细胞于未经照射的NOD/SCID小鼠中可以成功建立全身播散的白血病模型,该模型的构建操作简单易行,成功率高,重复性好,为研究白血病发病机制及指导临床化疗方案设计提供了良好的研究平台。

摘要：目的构建人组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)编码序列基因逆转录病毒表达载体,转染人单核细胞白血病细胞株,为探讨TIMP-2的生物学功能奠定基础。方法根据基因库中已公布的序列设计引物,用PCR方法扩增出人TIMP-2编码序列基因片段,用限制性内切酶及T4连接酶将目的片段插入MSCV逆转录病毒载体中。采用酶切和PCR鉴定及测序后经脂质体介导转染至PT67包装细胞中,以病毒上清感染单核细胞白血病细胞株SHI-1,G418筛选,极限稀释法挑选单克隆细胞株,定量PCR和Western Blotting检测TIMP-2的表达。结果TIMP-2基因克隆进逆转录病毒载体MSCV中,经酶切、PCR和DNA测序证实重组逆转录病毒载体构建正确,病毒上清感染SHI-1细胞,经G418筛选并挑选出单克隆细胞,经实时定量PCR和Western Blotting检测发现SHI-1细胞中TIMP-2 mRNA及蛋白表达明显上调。结论成功构建了高表达TIMP-2的SHI-1细胞,可对其生物学行为作进一步研究。

摘要：目的探讨浅静脉干对远端蒂耳大神经营养血管皮瓣成活的影响。方法以30只日本大耳白兔作为实验对象随机分为3组:Ⅰ组静脉-神经组、Ⅱ组神经组及Ⅲ组对照组。另外2只日本大耳白兔作为实验对照。于兔耳根部中央区设计远端蒂皮瓣1.2cm×3.8cm,Ⅰ组保留静脉和神经;Ⅱ组保留神经;Ⅲ组动、静脉和神经均不保留,皮瓣制备完成后即刻原位缝合。术后1h对3组皮瓣进行组织学观察并测定皮瓣的丙二醛(MDA)含量。术后1周,测量3组皮瓣的成活面积。结果术后1h,各组皮瓣均出现不同程度的出血和水肿,其中I组反应相对较轻;MDA含量Ⅰ组与Ⅱ组间没有显著性差异,Ⅰ组与Ⅲ组、Ⅱ组与Ⅲ组间有显著性差异。术后1周,各组皮瓣的成活率以Ⅰ组最高。结论保留浅静脉干没有增加兔耳远端蒂耳大神经营养血管皮瓣的回流负荷,对皮瓣的成活有利。

摘要：目的构建靶向survivin的siRNA表达载体。方法设计合成靶向survivin的siRNA相应DNA模板单链,将其克隆入空质粒pRNAT-U6.1/Neo,模板链两端分别设计两个不同的酶切位点,退火形成siRNA载体插入片段。用限制性酶切将空载体线性化,T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-sur-vivin。脂质体法将pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株,实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况。结果PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达,并具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株。结论成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pR-NAT-U6.1/Neo-survivin,并转染膀胱癌细胞株,为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。

摘要：目的探讨黄芩苷对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及迁移能力的影响及其机制。方法 50 mg·L-1黄芩苷孵育A431细胞,Western blot检测细胞中cofilin-1蛋白的表达水平;设计合成cofilin-1特异性siRNA并转染A431细胞,使用CCK8法检测细胞增殖活性,细胞划痕试验检测细胞的迁移能力。结果 Western blot结果显示,与对照组相比,细胞cofilin-1蛋白表达下降了49.3%;单独黄芩苷处理和cofilin-1-siRNA沉默均可抑制A431细胞生长与迁移,合并cofilin-1-siRNA则明显增强黄芩苷的作用效能。结论黄芩苷可有效降低肿瘤细胞的增殖活性和迁移能力,cofilin-1基因可能成为增强药物作用的调控靶点之一。