摘要：目的:针对β-连环蛋白(β-catenin)基因的不同部位,构建靶向β-catenin的shRNA真核表达质粒,鉴定并筛选出最佳抑制效率的表达质粒。方法:针对β-catenin基因的不同部位设计3对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到真核表达载体pGPU6中,构建靶向β-catenin的shRNA真核表达质粒pGPU6-β-catenin-shRNA-1、2、3。利用脂质体转染人胃癌细胞株AGS,Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒。结果:3个靶向β-catenin的shRNA真核表达质粒pGPU6-β-catenin-shRNA-1、2、3经限制性酶切和测序确实基因插入正确,Westernblot法证实pGPU6-β-catenin-shRNA-3明显降低细胞内β-catenin蛋白的表达。结论:成功构建了靶向β-catenin的shRNA真核表达质粒pGPU6-β-catenin-shRNA-1、2、3,并筛选出最佳抑制效率的表达质粒,为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中的作用奠定了基础。

摘要：背景与目的:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,通常与体内某些基因突变导致细胞周期改变和抗凋亡机制有关。凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成员Survivin,通过诱导细胞增殖和抑制细胞凋亡参与了人类多种肿瘤的发生,其中包括膀胱癌。本研究探讨转染靶向survivin的小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)对膀胱癌生物学行为的影响。方法:设计、合成一对survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染T24膀胱癌细胞,分成不同的浓度组(50～200nmol/L);鼠异位膀胱肿瘤模型中瘤内注射不同剂量的siRNA(5!g和50!g)。分别于体外和体内观察siRNA对膀胱癌生物学行为的影响。结果:survivin编码基因序列特异性siRNA能有效下调survivin基因表达水平,最大效应浓度为100nmol/L,此时survivin表达水平下调了75.91%,并显著的抑制了细胞增殖,抑制率达55.29%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。同时,细胞凋亡率亦由2.8%增加至45.70%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠移植瘤内重复多次注射50!g survivin-siRNA能够明显抑制肿瘤生长,与对照相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:survivin-siRNA能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。

摘要：目的构建靶向survivin的siRNA表达载体。方法设计合成靶向survivin的siRNA相应DNA模板单链,将其克隆入空质粒pRNAT-U6.1/Neo,模板链两端分别设计两个不同的酶切位点,退火形成siRNA载体插入片段。用限制性酶切将空载体线性化,T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-sur-vivin。脂质体法将pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株,实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况。结果PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达,并具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株。结论成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pR-NAT-U6.1/Neo-survivin,并转染膀胱癌细胞株,为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。

摘要：背景与目的:研究发现survivin基因参与了包括膀胱癌在内的人类多种肿瘤的发生。近期研究表明survivin的异构体同样具有独特的亚分子定位和功能。本研究通过检测survivin及其异构体survivin-2B和survivin-△Ex3mRNA在膀胱癌组织中的表达,探讨这两个异构体潜在的临床意义。方法:选取手术切除的原发膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)新鲜标本60例,膀胱良性疾病患者病变膀胱组织标本12例作为对照。应用实时定量PCR方法检测survivin、survivin-2B和survivin-△Ex3mRNA的表达量,分析其表达与不同病理分级和临床分期膀胱癌的关系。结果:Survivin、survivin-2B和survivin-△Ex3mRNA在BTCC组织中均存在表达,表达量分别为0.333±0.163、0.056±0.017、0.124±0.096;对照组12例均表达survivin-2B mRNA,其中分别有3例和4例标本存在survivin和survivin-△Ex3mRNA的微量表达。Survivin和survivin-△Ex3mRNA的表达与病理分级和临床分期呈正相关(0<r's<1,P<0.05),survivin-2B呈负相关(-1<r's<0,P<0.05)。3例复发患者原膀胱肿瘤组织中survivin mRNA的表达较相同病理级别者明显高,而survivin-2B却低。结论:检测survivin及其异构体survivin-2B和survivin-△Ex3mRNA在BTCC组织中的表达,对判断膀胱肿瘤的恶性程度以及术后复发具有潜在的临床应用价值。

摘要：目的建立实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法。方法采用自行设计的检测协同刺激分子B7-H4及内参照基因GAPDH的引物及TaqMan探针，经优化反应体系及反应条件后，检测B7-H4及GAPDH的基因表达。将B7-H4和内参照基因GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确并纯化后分别与pMDl9-T载体连接，克隆构建含B7-H4及GAPDH基因片段的重组质粒，作为实时荧光定量PCR检测B7-H4及GAPDH基因表达的标准品。将重组质粒标准品进行定量及梯度稀释，建立标准曲线。结果PCR扩增产物分别经测序证实为B7-H4及GAPDH基因的特异性片段。该法检测B7-H4基因表达的灵敏度为527copies／ml，线性范围为5．27X×10^2～5．27×10^7copies／ml，标准曲线方程为：Y=-3．1395X＋41．805，直线回归相关系数r=0．995，批间变异系数范围为2．39％～3．59％，扩增效率108．2％。该法检测GAPDH基因表达的灵敏度为386copies／ml，线性范围为3．86×10^2～3．86×10^7 copies／ml，标准曲线方程为：Y=-3．2436X＋41．083，直线回归相关系数r=0．999，批间变异系数范围为2．26％～3．86％，扩增效率103．4％。结论成功构建实时荧光定量PCR检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法，该方法特异性好、灵敏度高、重复性好。

摘要：目的分析种植体支持修复下颌第一磨牙时,不同直径和数目种植体对种植体骨界面应力分布的影响。方法建立3种不同直径的单种植体和1种双种植体支持修复下颌第一磨牙的模型,运用三维有限元法,分析种植体骨界面应力分布。结果单种植体设计模型,随直径的增大,种植体及周围骨vonMises应力值减小。双种植体设计模型,种植体及周围骨vonMises应力值小于单种植体。结论双种植体和宽直径单种植体支持修复下颌第一磨牙的设计有利于种植体及周围骨应力的分布。

摘要：目的自主研究计算机辅助设计制造(CAD/CAM)导板的数字化设计方法,完成软件设计,创新性地加入了力学分析功能。方法与南京航空航天大学合作完成CAD/CAM牙种植导板的软件设计开发,结合颌骨和义齿的锥形束CT扫描数据,在软件中完成颌骨和义齿的建模、配准,并设计导板。结果成功将CT扫描数据导入软件,完成三维重建,实现了义齿与颌骨的三维配准,设计出牙种植导板。结论成功研发了CAD/CAM牙种植导板的设计软件,有一定临床应用价值。