摘要：目的研究褪色沙雷菌的耐药率与分子流行病学规律,建立多位点序列分析方法,明确其进化特征,为临床针对性使用抗菌药物和防控此致病菌感染提供依据。方法对2013年9月-2014年12月分离的40株褪色沙雷菌进行体外药物敏感性试验与多位点序列分析（MLSA）,并用Splits tree与CLUSTALW软件进行生物信息学分析,揭示其流行趋势。结果体外药敏试验结果表明,40株褪色沙雷菌对13种抗菌药物的耐药率在10.0%~52.5%,对亚胺培南耐药率为32.5%;MLSA设计4个管家基因,GC含量约为60.0%;各等位基因数分布于14~16,各多态性位点数分布于33~74,gyrB的多态性位点数最多（74个）;Splits tree软件分裂分解分析结果显示,大部分褪色沙雷菌聚在一起,形成一个克隆复合体;CLUSTALW软件聚类分析结果显示,40株褪色沙雷菌形成19个ST型,其中ST8型12株,且ST8型是耐碳青霉烯类抗菌药物褪色沙雷菌的流行与暴发型,ST8、ST9、ST10与ST11形成一个克隆复合体CC8。结论褪色沙雷菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率较高,且多为泛耐药菌株;褪色沙雷菌的分子流行病学趋势相对较慢,在基因组上高度保守,目前需要重点监测以ST8型为代表褪色沙雷菌CC8克隆复合体的流行,以防其在医院的大规模流行与暴发。

摘要：目的　探讨克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增产物的简便方法。方法　用PCR方法分别特异性扩增Wilms瘤基因wt1和尿激酶受体 (UPAR)基因 ,并利用Taq聚合酶具有的延伸酶活性将扩增产物直接克隆入T -载体 ,EcoRⅠ酶切鉴定阳性重组子。结果　设计的引物可分别扩增wt1基因锌指区 (34 3bp)和UPAR基因编码区全长 (10 83bp) ;未经修饰的常规PCR和高保真PCR扩增产物可被直接克隆入pGEM -TEasy载体 ,其中正确重组率为 6 2 .5 %～ 87.5 % ;克隆的wt1基因和UPAR基因已被成功用于竞争性PCR或表达。结论　T -载体法是克隆PCR产物通用而有效的方法。

摘要：目的:应用Excel2003软件编制营养计算器,应用于膳食调查,膳食干预、饮食管理及优化。方法:以《中国食物成分表(2004版)》和《中国食物成分表(2002版)》为数据源,应用Excel2003建立食物营养成分数据库;根据实际需求建立数据库查询;根据食物净含量比例,采用函数或公式方法进行数据处理及数据引用。结果:Excel2003营养计算器可完成食物营养成分的计算,按照实际所需食谱营养标签界面的自动打印输出结果,取得良好效果。

摘要：目的:建立多重RT-PCR同步检测技术,联合检测黑色素瘤抗原MAGEA3基因、人类斯钙素hsTC1基因、上皮细胞角质蛋白CK20、CK19基因及癌胚抗原CEA基因mRNA在食管癌患者外周血中的表达。方法:在分析MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19、CEA和β-actin六种基因mRNA全长序列资料的基础上,自行设计并筛选出6对引物及6条寡核苷酸探针,利用多重RT-PCR技术并结合基因芯片对样本进行检测。结果:全部样品均可检出β-actin,55例食管癌患者外周静脉血中MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA的阳性表达率分别为25.45%、47.27%、49.09%、34.55%和52.73%;多重RT-PCR技术同时检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因,如果至少表达其中一种即可作为阳性表达者,其阳性表达率可达72.73%。而10例食管癌组织中均为阳性,28例正常健康捐献者的外周血中有2例CEA表达阳性,27例非肿瘤病人的外周血中有3例CK20阳性,3例CK19阳性,3例CEA阳性。测序结果证实RT-PCR产物确为MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因。结论:联合检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA可以增加外周血循环癌细胞检测的敏感性,本研究建立的多重RT-PCR技术可以做为一种快速、灵敏的检测手段。

摘要：目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。

摘要：目的 :探讨早期干预对高危儿在婴儿早期发育的影响。方法 :采用自行设计的一套早期干预方法通过指导家长对实验组实施 ,分别在 3个月、6个月时进行体格生长和行为发育的评估 ,另设对照组进行比较。结果 :实验组和对照组在体重、身长、头围方面均无统计学差异 ,但实验组的 5个能区行为发育商均值都高于对照组 ,除 3个月的语言能区外 ,其余均有统计学差异。结论 :早期干预在婴儿早期就能促进高危儿的行为发育 。

摘要：【目的】　探讨早期干预对高危儿行为发育的作用。　【方法】　采用自行设计的一套早期干预方法通过指导家长对实验组实施 ,另设对照组 ,用Gesell婴幼儿发育检查量表测出两组高危儿的行为发育商 (DQ)并作比较 ,同时还与正常新生儿相比较。　【结果】　实验组各行为能区的DQ均大于对照组 ,存在统计学差异 ,与正常新生儿对照组无统计学差异 ,与正常新生儿的实验组相比仅在适应性和语言上无统计学差异。而对照组各行为能区的DQ与正常新生儿实验组和对照组都有明显的差异。　【结论】　早期干预能促进高危儿的行为发育 ,帮助他们尽早地康复 ,赶上正常儿童。

摘要：目的评价宫颈癌快速筛查(CareHPV)检测的有效性,探索适合于基层妇女宫颈癌筛查的方法及方案。方法选取2013年在江苏省盐城地区东台市唐洋镇进行宫颈癌筛查的20岁以上已婚妇女1703人,于2015年再次随访筛查,并对筛查数据进行统计分析。结果2013年筛查显示,液基细胞学检查(TCT)结果异常者[≥非典型鳞状细胞-不能明确意义(ASC-US)]共68人,占总人数的3.99%;CareHPV检测结果异常者(>1.00RLU/CO)260人,占总人数的15.27%。2015年随访到筛查过的妇女1219例,CareHPV检测阳性178例,HPV感染率为14.60%;TCT异常22例。有阴道镜检查指征的给予活检,病理结果112例:宫颈可疑浸润癌有1例,宫颈上皮内瘤变3级(CIN3)有3例,CIN2~3有1例,CIN2有1例,CIN1有10例,慢性炎症伴鳞状上皮增生(挖空细胞、化生、萎缩等)86例,正常或慢性炎症6例,息肉1例,乳头样增生3例。2013年行CareHPV检测,2015年行CareHPV检测和TCT的受试者共1219例,根据HPV感染结果分为:持续感染组81例,非持续感染组110例,新感染组97例,无感染组931例。2013年CareHPV检测为阳性者,间隔两年HPV持续感染率为42.41%(81/191),2013年CareHPV检测为阴性者,间隔两年HPV新感染率为9.44%(97/1028);两者间的HPV感染率比较差异有统计学意义(χ^2=159.350,P<0.01)。间隔两年HPV清除率为57.59%(110/191)。在设计的基层宫颈病变筛查方法策略中,CareHPV初筛及TCT分流有最高的阴性预测值;TCT初筛及Care分型分流有最好的阳性预测值;CareHPV初筛及TCT分流的阴性预测值(99.02%)和阳性预测值(36.36%)是综合评价适用性最优方法。结论在江苏省基层地区开展以CareHPV检测为主的宫颈癌筛查方法,结合TCT分流,以阴道镜活检病理为准,能够有效检出≥CIN2的病变,CareHPV初筛TCT分流或CareHPV初筛CareHPV分型检测分流有很好的阴性预测值,CareHPV初筛及TCT分流是适用性最优方法。

摘要：目的以熔解曲线法测定4株肺癌细胞株和肺癌病人APC基因启动子区的甲基化模式。方法以脐血淋巴细胞DNA及其转甲基后的DNA经化学修饰、克隆测序的质粒，作为完全非甲基化和完全甲基化标准品。设计通用引物，采用加入荧光染料SYBRGreen1的荧光定量PCR法扩增包含21个CpG位点的APC基因启动子区的目的序列，以熔解曲线法通过与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值比较，确定四株肺癌细胞株（NCI-H446，NCI-H460，SPCA1，NCI—H520）在该区段的甲基化模式，并通过克隆测序验证。同时测定两例肺癌患者癌组织中APC基因启动子区甲基化模式。结果四株肺癌细胞株中，NCI-H446，SPCA1和NCI—H520的Tm值与完全非甲基化标准品的Tm值相同，而NCI—H460的Tm值有两个，分别与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值吻合，并经克隆测序验证。两例肺癌患者癌组织的Tm值位于完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值之间。结论小细胞肺癌细胞株NCI—H446，肺腺癌细胞株SPCA1和肺鳞癌细胞株NCI—H520的APC基因启动子区为完全未甲基化型，而大细胞肺癌细胞株NCI—H460APC基因启动子区甲基化模式为等位基因杂合型。两例肺癌患者癌组织中的APC基因启动子均为部分甲基化型。熔解曲线法是简单、经济和实用的甲基化模式检测方法。

摘要：目的探讨高血压、糖尿病及高血压伴糖尿病患者生命质量及其影响因素,旨在为有针对性地开展社区高血压、糖尿病及高血压伴糖尿病患者影响因素的干预,提高其生命质量提供参考依据。方法于2012年11月至2013年1月采用多阶段整群随机抽样方法按1∶2∶2的比例匹配高血压伴糖尿病、高血压、糖尿病患者,使用自行设计的问卷、生存质量评价量表(SF-36量表)、匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)、焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)进行面对面调查。应用线性逐步回归模型分析患者生命质量的影响因素。结果高血压伴糖尿病组总体生命质量、生理健康(PCS)得分均低于患有单一疾病组,差异均有统计学意义(P0.05)。经多因素逐步线性回归分析显示,按贡献大小,影响高血压组生命质量因素依次为焦虑、年龄、PSQI、并发症和性别(标准系数分别为-0.316、-0.230、-0.173、0.136和-0.121);影响糖尿病组生命质量的因素依次为PSQI、焦虑、年龄、病程和血糖控制(标准系数分别为-0.311、-0.308、-0.189、-0.133和-0.089);影响高血压伴糖尿病组总体生命质量的因素依次为PSQI、焦虑、年龄、并发症、血压控制(标准系数分别为-0.356、-0.248、-0.229、0.157和-0.117)。结论焦虑、年龄、睡眠质量为高血压、糖尿病和高血压伴糖尿病患者的共同影响因素,在众多因素中对患者的生命质量影响较大,在开展社区干预工作时,除有效控制血压、血糖外,还应关注患者的睡眠质量和焦虑情绪,进行心理疏导。