摘要：目的了解南京市38家医院手术室护士对锐器伤预防的知信行现状,分析其影响因素,为降低手术室护士职业暴露提供依据。方法自行设计手术室护士锐器伤预防的知信行调查问卷,采用便利抽样法,于2021年9-11月对南京市38家医院524名手术室护士进行调研。结果被调查护士对锐器伤预防的知识、信念及行为维度标准化平均得分分别为(92.71±9.77)、(87.91±10.01)和(87.97±6.57)分;不同年龄、工作年限、职称、学历以及医院等级的手术室护士得分差异均有统计学意义(均P80分的独立保护性因素(OR=2.725、2.529,均P<0.05)。结论南京市38家医院手术室护士对锐器伤预防的知信行得分处于中等偏上水平,掌握情况良好,具有积极的态度和良好的执行力。管理者应重视手术室工作环境建设,加强职业防护培训和职业暴露上报管理,提升手术室护士对锐器伤预防的知信行水平。

摘要：目的 构建基于非小细胞肺癌(NSCLC)热点突变的共享新抗原肽库,体外验证其免疫原性,从而建立针对肺癌患者快速、高效且可行的个体化新抗原鉴定及应用新策略。方法 收集2020-01-01-2021-08-31南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心收治的12例晚期NSCLC患者癌组织、血清循环肿瘤DNA(ctDNA)和血液样本。针对中国人群常见的人类白细胞抗原(HLA)分型(HLA-A*0201/0203/0206、HLA-A*2402和HLA-A*1101),使用T细胞表位预测工具NetMHCpan 4.0,优选出高亲和力表位肽并构建新抗原肽库。通过二代测序鉴定肿瘤特异性突变,聚合酶链式反应(PCR)-测序分型方法(SBT)技术鉴定HLA精确分型,设置试验组(加新抗原肽)、阳性对照组(加植物血凝素)和阴性对照组(不加肽),通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和流式细胞术检测活化T细胞标志物IFN-γ及CD137的表达,评估其免疫原性,鉴定具有免疫原性的新抗原表位肽。结果 选择表皮生长因子受体(EGFR)、鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)和TP53 3个驱动基因中的8个热点突变,针对5个中国人群常见HLA,设计和构建高亲和力新抗原肽14条。在12例患者中进行新抗原共享肽库表位肽的免疫原性验证,共验证新抗原肽10条,其中11例(91.60%)患者对新抗原肽有反应性,90.00%(9/10)的新抗原肽对相匹配的患者有反应,共计9条新抗原肽被证实存在免疫原性。在1例患者中,尽管其相匹配的新抗原肽(TP53-2)多轮刺激后能观察到IFN-γ表达及CD137阳性T细胞增加的趋势,但与阴性对照组相比差异无统计学意义,P>0.05。结论 本研究成功构建基于中国人群NSCLC热点突变的共享新抗原肽库,并验证了其免疫原性。为存在驱动热点突变的肺癌人群提供了一个快速鉴定和获取新抗原的新思路,可加速个体化新抗原为基础的免疫治疗的临床应用。

摘要：目的探讨糖尿病患者患糖尿病视网膜病变(DR)的危险因素及胰岛素的使用在糖化血红蛋白(HbA1c)与DR关系中的中介效应。方法横断面研究。采取随机数字表法进行随机整群抽样,抽取江苏省阜宁县疾病预防控制中心登记的50岁及以上的2型糖尿病患者群共计84个抽样点(其中2个为预试验点),进行问卷调查和生化检查,了解受检者的一般情况、全身疾病史、胰岛素使用情况以及糖化血红蛋白浓度等,眼部检查包括眼前节和眼底检查。根据眼底是否有出血点、硬性渗出、棉絮斑、新生血管、视网膜前或玻璃体积血等采用成组病例对照研究设计将受检者分为有DR和无DR两组,通过单因素和多因素Logistic回归分析,筛选出DR的影响因素,采用比值比(OR)及其95%置信区间(CI)描述关联强度。利用Karlson-Holm-Breen分析方法进行中介效应分析。结果共检录了2067例糖尿病患者,实际接受调查1965例,最终纳入统计分析1802例,应答率为87.2%,其中DR患者660例,检出率为36.63%。多因素分析结果显示,糖尿病病程(OR=1.166,95%CI:1.138~1.196)、糖尿病家族史(OR=1.325,95%CI:1.001~1.755)、使用胰岛素治疗(OR=1.995,95%CI:1.434~2.777)、HbA1c水平(OR=1.513,95%CI:1.189~1.925)和饮酒(OR=0.712,95%CI:0.514~0.985)是DR的独立影响因素。使用胰岛素的中介作用占HbA1c水平对DR总效应的13.67%(P<0.001)。结论糖尿病患者发生DR的危险因素是胰岛素治疗史、糖尿病病程长、糖尿病家族史、饮酒和HbA1c水平高,其中使用胰岛素会使得HbA1c水平对DR的影响增加,对DR具有部分中介效应。

摘要：目的建立基于血清肿瘤特异性蛋白70(tumor specific protein 70,SP70)和常规实验室指标的针对乳腺乳腺影像学报告和数据系统(Breast Imaging Reporting and Data System,BI-RADS)4类结节良恶性鉴别诊断的列线图模型,并验证其预测效能。方法采用队列研究设计,回顾性分析2021年1月至2022年4月在南京医科大学第一附属医院通过乳腺彩色多普勒超声诊断为BI-RADS 4类乳腺结节的429例女性患者资料,年龄范围为16~91岁,中位数年龄50岁。依据病例纳入时间的先后,将患者分为建模组(314例)和验证组(115例)。以术后的病理结果为金标准,使用单因素和多因素logistic回归分析确定用于模型的预测变量并绘制列线图及预测模型的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线和校准图,使用一致性指数(C-index)和校准曲线对模型的区分度和校准度进行评价。结果术后病理结果显示429例乳腺BI-RADS 4类结节中286例(66.7%)为恶性结节,143例(33.3%)为良性结节。血清SP70(OR=1.227,95%CI:1.033~1.458,P=0.020)、NLR(OR=1.545,95%CI:1.047~2.280,P=0.028)、LDL-C(OR=2.215,95%CI:1.354~3.622,P=0.002)、GLU(OR=2.050,95%CI:1.222~3.438,P=0.007)、PT(OR=1.383,95%CI:1.046~1.828,P=0.023)、结节长径(OR=1.042,95%CI:1.008~1.076,P=0.015)及年龄(OR=1.062,95%CI:1.011~1.116,P=0.016)是用于鉴别乳腺BI-RADS 4类结节良恶性的独立影响因素(P<0.05),将上述7个变量纳入模型绘制列线图,建模组及验证组的一致性指数(C-index)分别为0.842(95%CI:0.786~0.898)和0.787(95%CI:0.687~0.886)。建模组和验证组使用该模型鉴别乳腺BI-RADS 4类结节良恶性的敏感度、特异度分别为83.5%、72.5%和79.2%、73.6%,校准曲线显示列线图预测值与实际值之间具有良好的一致性。结论本研究联合血清SP70水平、常规实验室指标及乳腺彩色多普勒超声指标,建立术前乳腺BI-RADS 4类结节良恶性鉴别诊断列线图模型。此模型可能具有良好的预测效能,可为临床治疗方案选择提供参考依据,可能有利于指导乳腺癌的筛查和预防。

摘要：目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28 (Sj G28)基因片段作为靶序列,应用DNAMAN 7.0软件设计合成引物及荧光探针,建立荧光RAA反应体系。扩增不同拷贝数的Sj G28重组质粒,评价荧光RAA检测的敏感性;分别以日本血吸虫、曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫基因组为模板进行荧光RAA检测,以评价该方法的特异性。采用荧光RAA分别检测500、 200和50条日本血吸虫尾蚴感染的兔粪中虫卵DNA。分别在50只阴性钉螺中混入1、 2、 3、 4、 5、 10只阳性钉螺,并提取DNA进行荧光RAA检测。结果以不同拷贝数的Sj G28重组质粒为模板进行荧光RAA扩增,在5 min时即可观察到明显的荧光信号,随着拷贝数的不断降低,检测到荧光信号的时间也随之延长,不同拷贝数的扩增均在10 min内完成,最低可检出的质粒浓度为10拷贝/μl。以曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫及华支睾吸虫基因组DNA为模板的荧光RAA扩增结果均为阴性。不同数量尾蚴感染的兔粪中提取的DNA样品经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在15 min内完成。含不同数量阳性钉螺的50只阴性钉螺提取的日本血吸虫DNA经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在10 min内完成。结论本研究建立的可检测日本血吸虫核酸片段的荧光RAA方法,反应快捷,敏感性和特异性均较高。

摘要：目的建立曼氏裂头蚴感染小鼠动物模型,并观察感染后小鼠血常规及血清中特异性IgG抗体变化。方法从青蛙体内检获曼氏裂头蚴,以口服灌胃法感染昆明小鼠25只(3条/只)。于感染前2 d和感染后第2、7、14、21、28、35、42、49天采集小鼠血液,检测血常规(白细胞总数、红细胞总数、血红蛋白、血小板总数)及血清中特异性IgG抗体(ELISA法);于感染后第49天处死全部小鼠,解剖并仔细查找小鼠体内的曼氏裂头蚴。结果小鼠感染曼氏裂头蚴后,白细胞总数在第2天明显升高;血清中特异性IgG抗体于感染后第14天开始检出,于第21天从全部小鼠检出。在小鼠多个组织器官检出曼氏裂头蚴,其中以皮下肌肉多见。结论成功建立小鼠感染曼氏裂头蚴动物模型,该法造模简单、经济。白细胞及血清中特异性抗体检测可作为曼氏裂头蚴的辅助诊断方法。

摘要：目的了解江苏省曼氏迭宫绦虫宿主感染情况,为曼氏裂头蚴病防控提供科学依据。方法2018—2019年在江苏省随机抽取9个县(市、区)作为调查点。各调查点随机抽取100名常规健康体检者作为调查对象,进行曼氏迭宫绦虫血清学及病原学检查;在野外环境中调查猫、犬等终宿主及剑水蚤等中间宿主曼氏迭宫绦虫感染情况。结果江苏省9个调查点人群曼氏迭宫绦虫感染率均为0(0/900),血清抗曼氏裂头蚴Ig G抗体阳性率为1.22%(11/900);中间宿主剑水蚤原尾蚴阳性率为0.33%(3/900),猫、犬等终宿主粪检曼氏迭宫绦虫虫卵阳性率为1.48%(2/135)。结论江苏省自然环境中存在曼氏迭宫绦虫感染,应加强曼氏裂头蚴病危害和感染途径的健康教育。

摘要：目的:探索稳定下调VE-cadherin蛋白对K562细胞药物敏感性的影响及其可能的机制。方法:设计靶向人VE-cadherin的特异性干扰序列,连同IRES-GFP及NEO基因片段,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,筛选稳定下调VE-cadherin的K562细胞。应用CCK8法测定K562细胞对伊马替尼药物敏感性的变化,AnnexinⅤ/7-AAD标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测白血病细胞CD133、ALDH1的转录水平;Western blot方法检测白血病细胞VE-cadherin、BCR-ABL和β-catenin表达水平。结果:成功构建重组慢病毒载体pLB-sh VEC-NEO-IRES-GFP,并包装慢病毒,筛选出稳定下调VE-cadherin蛋白的K562细胞株。稳定下调K562细胞VE-cadherin表达后,在相同药物浓度处理下白血病细胞增殖率降低,凋亡率升高,CD133及ALDH1转录水平降低,BCR-ABL融合蛋白表达水平无明显变化,总β-catenin蛋白表达水平下降,细胞核β-catenin蛋白水平亦下降。结论:稳定下调K562细胞VE-cadherin蛋白的表达可使白血病细胞药物敏感性增高,其机制可能与降低β-catenin蛋白的稳定性、减少β-catenin蛋白的核转位有关的。

摘要：目的建立1种适用于现场的快速、高效实时荧光反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)检测寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的方法。方法利用ZIKV膜蛋白基因保守序列设计特异性引物及探针,构建膜蛋白基因重组质粒并作为参考品,建立ZIKV的实时荧光反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)检测方法,并与实时荧光定量RT-PCR法进行灵敏度比较。利用建立的方法对三带喙库蚊进行模拟添加ZIKV检测。结果成功构建ZIKV膜蛋白重组阳性质粒,与ZIKV核苷酸同源性为100%。建立的RT-RPA法扩增产物起飞时间与质粒拷贝数标准曲线为y=-1.0319x+15.146,R^(2)为0.9947,最低检出限为2.91 copies/μL,高于荧光定量PCR法(29.1 copies/μL),检测时间为30 min。结论建立的ZIKV RT-RPA检测方法,简便、灵敏、特异性强,反应快速,适用于ZIKV现场应急、基层实验室或出入境口岸的快速检测。

摘要：目的:探讨稳定下调K562细胞株FMI表达对其甲磺酸伊马替尼药物敏感性的影响及其可能的作用机制。方法:应用Western-blot方法分别检测K562细胞、慢性髓系白血病(CML)病人、慢性髓系急变病人及健康志愿者外周血单个核细胞FMI蛋白表达;设计靶向人FMI的特异性干扰序列,连接入慢病毒载体LV3;用三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,筛选稳定下调FMI的K562细胞;应用CCK8法鉴定K562细胞对伊马替尼药物敏感性的变化,AnnexinⅤ/7-AAD双标记的流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测白血病细胞FMI、Fz8的转录水平,Western-Blot方法检测白血病细胞FMI、Fz8、NFAT1、BCR-ABL、β-catenin的表达水平。结果:在CML急变病人外周血单个核细胞与K562细胞可检测到FMI蛋白表达,在CML缓解期病人及健康志愿者外周血单个核细胞未检测到FMI表达。成功构建重组慢病毒载体LV3/FMI,并包装慢病毒,筛选出稳定下调FMI蛋白的K562细胞株;稳定下调K562细胞FMI表达后,在相同药物浓度作用下白血病细胞增殖率降低、凋亡率升高,Fz8基因转录水平降低,Fz8蛋白表达水平下降,NFAT1总蛋白水平增高,核转位增加,BCR-ABL融合蛋白表达水平无明显变化,总β-catenin蛋白表达水平下降。结论:稳定下调FMI表达后,K562细胞对伊马替尼药物敏感性增高,凋亡增加,此作用可能是通过抑制FMI-Fz8信号通路而激活Ca2+-NFAT与Wnt/β-catenin信号通路实现的。