摘要：为了解国内禽多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）流行株外膜蛋白 H（OmpH）基因的变异情况，参考GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计1对特异性引物，采用PCR方法对不同来源的8株禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A、B、D）的OmpH基因进行扩增、测序。结果显示，11个菌株的OmpH基因开放阅读框在1002-1071 bp 之间；SignalIP 4.0预测结果表明，信号肽均为N端20个氨基酸残基，成熟蛋白氨基酸残基数量在314-337 aa之间，推测的分子质量在33.76-37.04 ku之间。与GenBank中15个菌株OmpH基因序列比对结果发现，核苷酸同源性在84.9%-100.0%之间；氨基酸同源性在81.5%-100.0%之间；其中C48-1、1010、9003、890920、921012、XJ-e 6个国内禽Pm分离株OmpH序列同源性为100.0%。试验结果表明，国内禽Pm菌株OmpH基因非常保守。

摘要：为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurellamultocida，Pm）OmpA基因的变异情况，参考Gen-Bank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物，采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A，B，D）的OmpA基因进行扩增，将各菌株纯化回收的扩增产物与pMDl8-T载体连接，筛选阳性克隆进行测序。结果表明：14个菌株的OmpA基因开放阅读框在1047～1077bp之间，其中长度为1062bp的有9个菌株；SignalIP4．0预测表明，信号肽均为N端21个氨基酸残基，成熟蛋白氨基酸残基数量在327～332之间，推测的分子量为35．19～36．35kD。与GenBank中12个菌株OmpA基因核苷酸序列比对及遗传进化分析发现，核苷酸同源性为85．3％～100％；氨基酸同源性为83．1％～100％；其中C48—1，1010，9003，890920，921012，xj等6个国内禽Pm分离株OmpA序列同源性为100％。由此可见国内禽Pm菌株OmpA基因非常保守。

摘要：为了研究禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白A(Omp A)的免疫原性,根据C48-1菌株Omp A基因序列设计一对特异性引物,采用PCR方法扩增去信号肽的成熟Omp A基因.将去信号肽的成熟Omp A基因扩增片段双酶切后,克隆到p GEX-6p-1表达载体中,构建重组表达质粒p GEX-Omp A,转化宿主菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-PAGE的结果显示,融合蛋白GST-Omp A大小约为63 ku,与预期的分子质量相符.免疫印迹分析结果表明,该融合蛋白与鸡抗Pm血清具有明显的免疫反应,说明Omp A具有良好的抗原性,这为禽Pm Omp A在免疫防御研究中的应用奠定了基础.

摘要：鸡β防御素1在鸡防御系统中起重要作用,为实现其在真核细胞中的表达,本研究利用RT-PCR从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,同时参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal-1成熟肽片段新基因,并在其3'端添加6×His序列以检测鸡β防御素1的表达情况,分别构建分泌型表达载体pPIC9K-Gal-1和pPIC9K-Gal-1-a-His,线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115,G418抗性筛选高拷贝转化子,阳性克隆用甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定表达上清液。结果表明,从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,其序列与GenBank登录号AF033335的序列同源性为100%;Gal-1和Gal-1-a-His基因均成功整合到毕赤酵母基因组中,重组酵母蛋白Gal-1-His获得了成功表达。本研究为后续鸡β防御素1的高效表达和生物学活性研究奠定了基础。

摘要：环境污染严重制约了农业和农村经济环境的可持续发展,对农业生产具有至关重要的影响,需要进行有效监控。但是由于污染物复杂多样、含量低,直接检测存在一定的困难,需要采用各种预分离富集技术。浊点萃取是近年出现的一种新兴的液-液萃取技术,因其分离效率高、环境友好、易与各种检测技术联用而广泛应用。本文简述了浊点萃取的基本原理,概述了近几年浊点萃取在环境污染物分离富集中的应用,讨论了浊点萃取与不同检测技术之间的联用情况,包括浊点萃取过程的优化、检测仪器的选择、方法的优越性等,探讨了浊点萃取与不同检测技术联用的发展前景及其对环境监控的应用。