摘要：目的设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins,BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法设计并化学合成针对BMP-2的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞中BMP-2在mRNA水平和蛋白水平的变化,体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化。实验共分6组,①正常对照组;②空白对照组;③阴性对照组;④～⑥分别为BMP-2-siRNA-A、BMP-2-siRNA-B、BMP-2-siRNA-C转染组。结果RT-PCR和Western blot显示3对特异性BMP-2-siRNA转染肝癌细胞SMMC7721之后,其BMP-2的基因和蛋白表达均受到抑制,以siRNA-B抑制效果最明显[(0.32±0.07)vs(0.92±0.14),(0.37±0.10)vs(0.89±0.17),P<0.01]。体外侵袭实验显示转染后肝癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组[分别为(6.48±3.62)、(23.72±3.24)、(22.38±3.84),P<0.05]。结论BMP-2与肝癌的侵袭转移潜能相关,siRNA-BMP-2能明显抑制肝癌细胞SMMC7721的BMP-2表达,从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。

摘要：背景:理想的硬脑膜替代材料要求其自身具有一定的韧性与弹性。目的:通过对经冻干辐照处理后猪硬脑膜胶原酶Ⅰ型酶解时间、最大负荷及抗张强度进行测定,验证经冻干、辐照处理过的猪硬脑膜是否符合硬脑膜移植对生物力学的要求。设计、时间及地点:对比分析实验,于2007-07/2008-06在南昌大学烧伤研究所、南昌大学-新三思公司联合力学实验室、江西中医学院中药固体制剂国家工程研究中心与江西天兆科技发展公司完成。材料:选用健康活体猪6只,无菌条件下取新鲜猪硬脑膜。方法:猪硬脑膜经过冲洗、预冻、冻干、60Coγ射线照射等处理,按照处理方式分成新鲜猪硬脑膜组、冻干猪硬脑膜组、辐照猪硬脑膜组及冻干+辐照猪硬脑膜组。主要观察指标:取5mm各组猪硬脑膜圆片用胶原酶Ⅰ型酶解计算其完全酶解时间;用EMT彩屏电子拉力试验机分别测出各组替代材料的最大负荷、抗张强度。结果:新鲜猪硬脑膜组、冻干猪硬脑膜组、辐照猪硬脑膜组及冻干+辐照猪硬脑膜组硬脑膜胶原酶酶解时间分别为(8.3±2.5),(7.6±1.8),(23.6±5.7)与(21.1±5.3)min,最大负荷和抗张强度分别为(79.93±4.36),(70.50±5.97),(96.97±4.84)N和(93.59±4.61),(7.98±0.44),(7.05±0.60),(9.70±0.48)和(9.40±0.46)N/mm,与新鲜猪硬脑膜组和冻干猪硬脑膜组比较,辐照猪硬脑膜组和冻干+辐照猪硬脑膜组时间明显延长,差异有显著性意义(P0.05)。结论:经Coγ射线照射后的硬脑膜抗酶解能力、生物力学特性增强;辐照与冻干+辐照猪硬脑膜均能满足硬脑膜移植对其生60物力学方面的要求。

摘要：背景:新近的一些研究认为,采用体外重组瘦素替代疗法对遗传性肥胖、难愈性创面和内源性瘦素缺乏应是行之有效的方法。目的:取人脂肪组织获取瘦素基因,构建pET28a-leptin重组子。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2004-06/2007-12在江西省医学科学研究所抗肿瘤室完成。材料:取自22岁汉族女性行重睑手术时皮下脂肪组织,冻存于液氮中备用,供者知情同意。方法:取人脂肪组织,反转录-聚合酶链反应得到瘦素基因后,通过DNA重组技术克隆至pMD18T载体与pET28a原核表达载体,EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切及测序鉴定。主要观察指标:①cDNA扩增结果。②重组质粒鉴定。③DNA测序结果。结果:扩增得到520bp目的基因;所构建重组瘦素原核表达载体pET28a-leptin经双酶切电泳见520bp目的条带,DNA测序与相应基因序列同源性达100%。结论:通过DNA重组至pET28a原核表达载体,经EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切及测序鉴定成功构建pET28a-leptin重组子。

摘要：目的:观察抗I型幽门螺杆菌IgY、黄连、太子参体内外抗活性空泡细胞毒素+、细胞毒素相关蛋白A+幽门螺杆菌的效果及其联合应用效果,并筛选出最佳剂量组合。方法:实验于2003-09/2004-03在江西医学院免疫学教研室完成。①中药药液制备:称取样品黄连60g(购自四川省峨眉),加5倍体积的水浸泡30min。称取样品太子参100g(购自安徽省宣州市),加入5倍体积的水浸泡30min后,两者皆用文火煎煮1h,过滤。滤渣各再加5倍体积的水,文火煎煮30min,过滤,合并2次滤液,加热浓缩至含生药1和1.6g/mL2种原液。②体外实验方法:采用琼脂稀释法进行联合应用和各单一成分的体外抑菌实验。联合应用组的剂量设置采用L1837正交设计。体外联合应用实验剂量设定:IgY的1,2,3分别表示5,10,20g/L;黄连及太子参的1,2,3分别表示20,40,60g/L。③体内实验方法:选用昆明种小鼠100只,6～8周龄。联合应用组的剂量设置采用L1837正交设计。体内联合应用实验剂量设定:IgY的1,2,3分别表示5,10,20mg;黄连的1,2,3分别表示15,30,60mg;太子参的1,2,3分别表示45,90,180mg。单一成分组及对照组采用中间剂量。④动物分组:各单一成分分组和联合应用组。除健康对照组外,所有小鼠经灌胃幽门螺杆菌液0.5mL/只(浓度1×1012CFU/L),每间隔12h重复1次,共3次。建立昆明系小鼠胃黏膜幽门螺杆菌感染模型。取30只小鼠按随机区组法分为5组并编号(1～6号):IgY组、太子参组、黄连组、枸橼酸铋钾组、生理盐水组。在造模后4周给药,前4组分别灌胃10,90,30,0.9mg相应药液0.5mL/只。生理盐水组和健康对照组(未造模,n=6):灌胃0.5mL蒸馏水和无菌生理盐水。1次/d,重复5d。体内实验联合应用组(n=36)按L1837正交设计表进行实验,重复1次。并观察小鼠胃黏膜的病理变化。⑤体外实验评分标准:共分为菌苔、尿素酶、H2O2试验、涂片4项,每项5分。分数越高,感染越严重。体外单一成分各组用综合评分确定最低抑菌浓度。⑥体内实验评分标准:共包括Warthin-Starry染色、苏木精-伊红染色、尿素酶试验三大项,每项15分,共45分。分数高,感染越严重。⑦体内单一成分各组方差分析SNK法及联合应用组的体外体内实验均用正交设计的方差分析进行数据处理。结果:①昆明系小鼠胃黏膜幽门螺杆菌感染模型:实验小鼠在感染4和8周后,胃黏膜涂片镜检、尿素酶试验及组织病理学Warthin-Starry染色检查均阳性,幽门螺杆菌感染率100%。②体外抑菌实验结果:联合应用组实验结果:黄连、太子参是综合评分的主要影响因素(P0.05),其最低抑菌浓度分别为40和60g/L。各单一成分组实验结果:黄连、太子参均有明显抑菌效果,其最低抑菌浓度分别为50和80g/L。③体内实验结果:联合应用组实验结果:黄连、IgY对综合评分起主要作用(P<0.05),太子参与黄连,太子参与IgY之间均有协同作用(P<0.05)。联合应用组中17号小鼠已经完全康复(综合评分为0),即3种成分均在中间用量时(IgY10mg,黄连30mg,太子参90mg),疗效最好。单一成分组实验结果:IgY、黄连、太子参、实验阳性对照对综合评分均有影响(P<0.05)。IgY对幽门螺杆菌及炎症转归均有影响(P<0.05)。结论:①当IgY10mg、黄连30mg、太子参90mg联合应用时,黏膜损伤和炎症反应消失,幽门螺杆菌被根除。②IgY是一种较为理想的免疫治疗剂。③黄连用量为5或10mg/只小鼠时,在体外和体内都能抑制幽门螺杆菌。

摘要：目的设计马尔尼菲青霉菌种特异性引物,探讨马尔尼菲青霉病早期诊断的方法。方法采用真菌通用引物ITS1和ITS4 PCR扩增我科保存的2株和广西医科大学附一院惠赠的1株马尔尼菲青霉菌rDNA ITS,扩增产物纯化后直接测序,测序结果在国际基因库核酸序列数据库进行同源序列搜索、比对、分析。结果3株临床分离的马尔尼菲青霉菌rDNA ITS序列相同;与来源于美国、印度尼西亚、法国、澳大利亚的马尔尼菲青霉菌的rDNA ITS序列一致;马尔尼菲青霉菌与荚膜组织胞浆菌、新生隐球菌、念珠菌以及曲霉和青霉属间的rDNA ITS序列差异较大,而青霉种间的rDNA ITS序列差异不大。结论不同来源的马尔尼菲青霉菌种间的rDNA ITS序列具有高度的同源性;提示该区不适合作为靶基因来设计该菌的种特异性引物或探针,应考虑在别的区域继续寻找。

摘要：背景:CT扫描所得DICOM数据在Mimics软件中的运用是目前国际上公认的计算机辅助手术的"金标准"。目地:探索一条可行的计算机辅助手术途径。方法:将骨盆肿瘤病例CT扫描图像数据导入Mimics10.01软件,三维重建包含髂血管的全骨盆几何模型,并按Enneking and Dunhan提出的标准分型,该病例为TypeⅡ型。利用mimics软件的三维重建全骨盆几何模型的各项数据进行术前测量,设计肿瘤切除范围,并进行模拟肿瘤切除假体置换。结果与结论:利用mimics软件重建的全骨盆三维几何模型可准确反映骨盆的三维立体结构和预测肿瘤的大小,并可进行任意旋转观察,精确测量出相关的各项指标。为定制假体提供有意义的参考数据,有效实现了骨盆肿瘤广泛切除特制假体置换术的模拟。结果提示Mimics软件重建的包含髂血管的全骨盆几何模型可立体直观显示骨盆内部解剖结构并明确肿瘤分型。Mimics可以为术前设计和手术模拟提供快捷、便利、精确、可重复运用的模型。

摘要：背景:大鼠airpouch模型作为一种对骨科生物材料较敏感的体内模型,多用来检验磨损微粒刺激引起的细胞和炎症因子反应。而在人工关节置换的中晚期,磨损微粒可诱导假体周围组织细胞产生一系列生物学反应,导致假体周围骨溶解,最终产生无菌性松动。目的:评价应用大鼠airpouch模型进行磨损微粒造成无菌性松动机制分析的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物体内实验,于2009-01/03在南昌大学第一附属医院中心实验室完成。材料:取SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,即Ti-6Al-4V微粒组、UHMWPE微粒组及生理盐水组,每组10只。另外,取人工髋关节无菌性松动假体周围界膜组织设计为界膜组。方法:大鼠背部皮下注射过滤后的空气3mL,每2d1次,共6次。1周后各组大鼠囊腔内分别注射Ti-6Al-4V微粒悬液、UHMWPE微粒悬液及生理盐水。主要观察指标:注射1周后处死动物,切开分离囊腔组织进行大体及光镜下观察,以免疫组织化学法检测白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达。结果:大体观察发现,囊腔组织表面可见增生的小血管,部分区域可见纤维状组织,类似于无菌性松动假体周围界膜组织。2个微粒组光镜下可见大量吞噬细胞,界膜组出现同样的组织细胞反应,生理盐水组未见明显组织细胞反应。Ti-6Al-4V微粒组、UHMWPE微粒组及界膜组白细胞介素6的表达水平均高于生理盐水组(P0.05)。结论:2种微粒均能刺激炎性细胞因子产生及活性升高,其效应类似于人工关节磨损微粒所引起的溶骨反应。提示大鼠airpouch模型能够代表磨损微粒所引起的生物学反应,是磨损微粒造成无菌性松动机制研究中较为可行的动物模型。

摘要：免疫荧光可定性分析细胞内蛋白核转位现象,NF-κB/p65蛋白核转位提示NF-κB信号通路的活化,我们尝试运用自主研发设计的免疫荧光分析软件计算荧光图像中胞核和胞质位置的荧光值变化,定量分析核转位情况,并通过蛋白质免疫印迹法验证软件分析结果。应用该软件分析内毒素诱导0.5、1、2和4h后原代人脐静脉内皮细胞的NF-κB信号通路活化,结果提示2h为核转位高峰期,与蛋白质免疫印迹法验证结果一致,表明自主研发的免疫荧光分析软件可应用于免疫荧光的定量分析。

摘要：背景:中医活血化瘀治法是针对血瘀证而设立的,目前关于活血化瘀治疗对干细胞动员和归巢作用的研究甚少。目的:观察丹参、血府逐瘀汤含药血清对兔骨髓间充质干细胞体外迁移的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/12在南昌大学心血管病研究所完成。材料:健康CV级6～8周龄雄性新西兰大耳兔24只,随机分为对照组、丹参组、血府组,8只/组。另取二三周龄雄性新西兰大耳兔24只用于制备骨髓间充质干细胞。丹参饮片、血府逐瘀汤饮片由江西省中医院临床药物实验基地提供。方法:取丹参及血府逐瘀汤的饮片,中药文火水煎二次过滤去渣,合并水煎液后浓缩成含生药0.5g/mL溶液。丹参组灌服丹参溶液2.5g/(kg?d),1次/d,连续7d;血府组同法灌服血府逐瘀汤3.95g/(kg?d);对照组灌服等量蒸馏水。分别于药物干预前、干预7d后抽取各组兔动脉血分离制备相应血清。取transwell系统,下室加入各组对应血清,上室加入第3代细胞骨髓间充质干细胞悬液,于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度培养箱中培养。主要观察指标:ELISA法测定血清间质细胞衍生因子1的质量浓度,利用transwell系统观察含药血清对兔骨髓间充质干细胞迁移的影响,MTT法测定骨髓间充质干细胞的倍增时间。结果:①干预前,各组血清间质细胞衍生因子1的质量浓度大致相同;干预7d后,对照组间质细胞衍生因子1质量浓度无明显改变(P>0.05),丹参组、血府组间质细胞衍生因子1质量浓度均明显升高(P<0.05)。②干预12h后,对照组迁移细胞数增加1倍。与对照组比较,干预4h后丹参组、血府组骨髓间充质干细胞迁移数均明显增加(P<0.05),此后一直呈增加趋势。③与对照组比较,丹参组、血府组骨髓间充质干细胞的倍增时间均明显缩短(P<0.05)。结论:丹参和血府逐瘀汤含药血清均能促进兔骨髓间充质干细胞的体外迁移和增殖,且效果相当,其作用机制可能与升高血清间质细胞衍生因子1的质量浓度有直接关系。

摘要：目的优选樟帮特色米泔水漂白术炮制工艺,为米泔水漂白术炮制规范提供科学依据。方法采用星点设计-效应面法进行米泔水漂白术炮制工艺设计,以米泔水用量、漂洗时间、漂洗温度为考察因素;采用HPLC法测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等成分量,进行加权综合评分计算OD值(归一化值),采用Design Expert进行2次项回归拟合,优选其最佳工艺并进行验证。结果最佳炮制工艺漂洗条件为米泔水用量为9倍、漂洗时间55 h、漂洗温度26℃,在此条件下,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等成分量综合评分OD值为0.960。结论米泔水漂白术在此条件下稳定可行,能为米泔水漂白术饮片生产与质量标准规范提供参考。