摘要：为建立快速、特异、灵敏的鉴别伪狂犬病病毒(PRV)野毒株和疫苗株的方法,本试验基于PRV gB和gE基因保守区域序列,设计了2对特异性的引物和探针,探针标记不同发光基团,以区分野毒株和疫苗株。通过对引物的筛选和反应条件的优化,建立了可鉴别PRV野毒株和疫苗株的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和干扰性等进行评估。结果显示,该方法能同时特异性地检测出PRV野毒株和疫苗株,而与PPV、PCV2、PRRSV、CFSV、JEV等无交叉反应;该方法灵敏性高,对PRV gE和gB基因最低检测量分别为27.1 copies/μL和2.74 copies/μL;该方法重复性好,变异系数小于1%;用该方法对18份临床样本进行PRV gB和gE基因检测,且与普通PCR方法相比,符合率高达100%。结果表明,本试验建立的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法可用于临床样本中PRV野毒株和疫苗株的鉴别检测,为猪伪狂犬病防制和净化提供了一种有效的技术手段。

摘要：采用罗丹明B平板法和脂肪酶活力测定从张弓老酒大曲中分离筛选出一株高产脂肪酶菌株E-11,经形态学、生理生化试验和16SrDNA序列分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。通过单因素和响应面试验设计对该菌株的产酶条件进行优化,结果表明,最佳产酶条件为葡萄糖3%、蛋白胨4%、初始pH值为8.0。优化后的脂肪酶活力达15.09U/mL,是优化前产酶能力的1.2倍。

摘要：为了丰富果酒种类,以菠萝、梨为原料,通过单因素试验和响应面试验设计优化菠萝梨复合果酒的发酵工艺。结果表明,菠萝梨酒的最佳发酵工艺条件为初始糖度23.8%,酵母添加量0.08%,果胶酶添加量121 mg/L。在此优化条件下,菠萝梨酒酒精度为12.8%vol,酒体澄清透明,呈淡黄色,口感香醇,菌落总数<50 CFU/mL,大肠菌群≤2 MPN/100 m L,致病菌未检出。

摘要：曲奇饼干存在高油、高糖的问题,苦荞中不但含有丰富的膳食纤维,也有较多的多酚类物质。以黄油、全蛋液、绵白糖及苦荞粉的添加量为单因素,以感官评分、饼干硬度和色度为基本检测指标,同时结合苦荞的抗氧化活性,旨在开发一种新型的高膳食纤维曲奇饼干。通过单因素试验确定各因素的最优水平,再进行四因素三水平的正交试验。结合极差分析和方差分析结果,确定苦荞曲奇饼干的最优配方为:黄油19 g,绵白糖22 g,全蛋液2.5 g,苦荞粉4 g。且添加苦荞粉可显著降低饼干中丙二醛含量(P<0.05),可在一定程度上延长饼干的货架期,大大增加曲奇饼干的营养价值。本研究为新产品开发提供了理论基础。

摘要：为了保障食品公共卫生安全,基于实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RT-RPA),针对鼠伤寒沙门菌、沙门菌血清型4,[5],12:i:-共同携带的STM4495基因以及鼠伤寒沙门菌携带的flj B1,2基因,设计2条探针和一系列候选引物,并进行引物筛选、特异性试验、敏感性试验、各种方法比较检测和人工污染试验,建立一种快速检测鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的双重RT-RPA方法。结果显示,该方法在39℃条件下20 min内完成检测,鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的检测下限分别为25.6和251CFU/0.1 m L,不能检出其他肠道致病菌,针对猪产业链及临床样品来源的99株沙门菌与PCR、RT-PCR方法的检测结果一致,针对人工污染样品的检测结果与传统培养法一致。本研究成功建立了一种快速检测鼠伤寒沙门菌与沙门菌血清型4,[5],12:i:-的双重RT-RPA方法,具有特异性高、敏感性强的特点,快速简便,20min获取检测结果,在新鲜猪肉、临床病猪肝样品中得到初步应用。

摘要：猪病学是应用型本科动物医学专业的一门重要专业选修课,该课程的主要任务是培养学生解决猪病相关问题的综合能力。基于应用型本科培养人才特点、猪场兽医就业岗位需求以及养猪行业变化等,从教学目标、教学内容、教学方法、教学成绩考核等方面进行了应用型本科猪病学课程教学设计,并在教学中应用,取得较好效果。

摘要：为研究miR-155基因在猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21)中的功能,采用CRISPR/Cas9系统构建miR-155敲除的猪肺泡巨噬细胞系。首先,采用sgRNA-cas9程序,设计4个靶向miR-155的特异性sgRNA引物序列。然后构建sgRNA表达载体,与pEGFP-C1-cas9载体共转染3D4/21细胞,进行流式分选并富集表达绿色荧光蛋白GFP的细胞。最后,采用T7E I酶酶切、Sanger测序、实时荧光定量PCR(qPCR)、western blot等方法检测敲除效率,发现miR-155基因可以被以上4个sgRNA编辑,其中sgRNA39的敲除效率最高,T7E I酶酶切检测流式分选后的敲除效率有42%;Sanger测序显示sgRNA39细胞系敲除31个碱基;RT-qPCR结果显示miR-155-5p/3p表达量均有下降;western blot结果表明miR-155靶基因SHIP1的蛋白表达量升高。成功构建miR-155敲除的3D4/21细胞为进一步探讨miR-155在巨噬细胞发挥的调控功能研究提供细胞模型。

摘要：有机化学是农林院校理工科基础化学课,在传授学生专业知识的同时,将社会主义核心价值观以课程思政的方式贯穿其中,同时提升学生的专业素养和人文素养,形成可持续发展的学习氛围。本文以有机化学课程的“旋光异构”一课作为教学设计案例,具体探讨在课程目标设置、课程导入设计、教学过程设计以及学习效果评价与反馈等环节中,将课程思政与专业课程深度融合的教学设计思路与方法。

摘要：猪瘟是一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,给全球养猪业带来严重的经济损失。疫苗免疫是预防该病的主要手段,目前为止尚未研究出针对猪瘟病毒(CSFV)的特异性治疗药物。CSFV是一种专性细胞内寄生物,其复制严格依赖于宿主细胞,病毒与宿主细胞因子的相互作用关系决定了病毒感染、复制和致病的分子基础,因此设计针对相互作用的病毒蛋白或宿主蛋白的药物有可能治疗CSFV引起的疾病。本文对CSFV与宿主蛋白相互作用及其机制进行了综述,为猪瘟的预防及治疗提供理论依据。

摘要：建立一种快速检测猪δ冠状病毒(PDCoV)的方法。根据GeneBank收录的PDCoV M基因序列,设计两对特异性引物和TaqMan探针,对PDCoV TaqMan荧光定量RT-PCR反应条件进行优化。Ct值与质粒模板之间呈现良好的线性关系,标准方程为y=-3.6421x+34.194,相关系数R 2=0.9992。荧光定量RT-PCR方法仅对PDCoV呈现特异性扩增,无交叉反应。敏感度试验结果显示,最低检出量为1.25×10^(1)copies/μL,灵敏度高。重复性试验结果显示,批内和批间测定均具有良好的重复性。TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法是一种可靠的快速检测PDCoV的方法。