摘要：[目的]克隆非洲爪蛙Klf4基因的新转录本,并研究其在早期胚胎发育中的功能。[方法]提取胚胎总RNA,反转录构建c DNA文库。从Xenbase数据库中获得Klf4的基因组序列,分析序列发现新的ATG位点,设计引物、PCR扩增,将扩增的目的片段插入p CS2+,插入位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序鉴定,发现载体中插入的目的片段为编码483个氨基酸的Klf4的新转录本。体外转录获得mRNA,显微注射入胚胎,进行表型分析以及原位杂交检测。[结果]成功克隆出了Klf4基因的新转录本;过表达该转录本,表型分析发现胚胎发育异常,原位杂交检测发现Xag2和Dkk1的表达上升。[结论]成功克隆编码483个氨基酸的Klf4基因的新转录本,过表达该转录本胚胎发育异常,Xag2和Dkk1的表达被激活。

摘要：[目的]克隆非洲爪蛙prmt5.L基因并分析其在胚胎发育中的时空表达谱。[方法]收集胚胎,提取总RNA,反转录制备c DNA。设计特异引物,PCR扩增prmt5.L基因的ORF序列,连接到p CS2+载体构建p CS2+prmt5.L重组质粒,连接位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序验证成功构建p CS2+prmt5.L重组质粒。将p CS2+prmt5.L重组质粒用EcoRⅠ酶切,T7 RNA聚合酶转录获得prmt5.L的反义探针。收集不同时期的爪蛙胚胎,固定并脱水后经原位杂交检测prmt5.L在胚胎发育中的表达情况。通过序列比对和进化树分析PRMT5在进化中的保守性。[结果]成功克隆非洲爪蛙prmt5.L基因,原位杂交检测了prmt5.L在早期胚胎中的时空表达谱。序列比对和进化树发现prmt5.L蛋白在进化中非常保守。[结论]成功构建了p CS2+prmt5.L重组质粒。prmt5.L基因在胚胎发育中呈现动态表达且prmt5.L蛋白在进化中非常保守。