摘要：背景:骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化,而失去多分化潜能,因此必须对培养的细胞及时冻存,需要时再进行复苏。目的:建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法。设计、时间及地点:对照观察细胞学实验,于2005-06/2008-06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成。材料:健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取。方法:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并进行传代扩增培养。将第2代骨髓间充质干细胞与12.5%DMSO混匀置于冻存管中,采用慢冻快融法进行冻存和复苏:将冻存管置于-4℃冰箱2h,然后移入-30℃冰箱2h,再置于厚壁塑料泡沫盒中,扎紧密封,置-80℃冰箱过夜后,取出冻存管直接放入液氮中保存,或放入-80℃冰箱保存。复苏时将冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出,立即置37℃水浴并轻轻摇动,1～2min内迅速解冻。主要观察指标:复苏前后细胞成生长活性及形态变化。结果:分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长,贴壁及增殖能力强,传代细胞贴壁较快。经过液氮长期冻存后,将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养,细胞形态及生长状态与冻存前无差异,均呈长梭形均匀分布生长,细胞生长增殖旺盛。结论:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法可获得犬骨髓间充质干细胞,应用慢冻快融技术进行冻存和复苏,较好的保持了冻存细胞的活力和功能。

摘要：目的探讨运动疼痛诱发试验对早期膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的诊断价值。方法采用横断面研究设计,数据来源于2018年杭州社区KOA健康管理项目,共纳入1816例符合标准的病例。根据KOA患病情况及程度,分为未患KOA(正常人群组530例),患KOA且Kellgren-Lawrence(KL)分期≤Ⅱ(早期组534例),患KOA且KL>Ⅱ(中晚期组752例)。将启动、蹲起、上下楼梯和做家务4项运动纳入诱发试验,统计指标包括年龄、性别、视觉模拟疼痛评分(visual analogue scale,VAS)。先进行相关性分析,根据结果绘制接受者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线,比较曲线下面积(area under the curve,AUC)值,并给出相应最佳临界值。通过倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)校正年龄、性别两项混杂因素,校正后平衡性检验P>0.05。通过Kappa分析评价运动疼痛诱发试验和X线片诊断早期膝骨关节炎的一致性。结果正常人群组、早期组、中晚期组年龄分别为(67.39±7.43)岁、(67.41±9.52)岁、(71.55±9.87)岁,三组性别的分布为男238例,女292例;男209例,女325例;男357例,女395例。正常人群组与早期组在年龄和性别分布上没有异质性(P>0.05),早期组与中晚期组在年龄和性别分布上有异质性(t=-0.034,P0.05)。正常人群组和早期组ROC曲线结果显示最严重疼痛的AUC值最高,为0.98,最佳临界值为1分。校正混杂因素后早期组和中晚期组的ROC曲线结果显示最严重疼痛的AUC值最高,为0.72,最佳临界值为4分;由于早期组和中晚期组之间ROC曲线的AUC值偏低,使用获得的运动疼痛诱发试验诊断方法与X线片诊断方法对早期和中晚期患者进行一致性检验,Kappa值0.41(P1分并且≤4分可初步诊断早期KOA,对鉴别正常人群和早期KOA患者的价值高并且近似于X线片检查;对区分早期和中晚期KOA患者的价值中等,与KL分期的一致性中等,在有条件的情况下还需完善影像学检查综合判断。

摘要：目的：设计积雪草总苷缓释片的处方并进行评价和优化。方法：以积雪草水溶性有效部位（积雪草总苷）为研究对象，采用拟水平的均匀设计表U6（6^6）设计缓释制剂处方，反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法直接测定制剂中反映积雪草主要药效的2个指标成分——积雪草苷和羟基积雪草苷的释放度，利用指标成分的体外释放度与各辅料之间的回归方程对处方进行优化。结果：积雪草总苷为18mg／片，处方中各辅料的组成为羟丙基甲基纤维素（HPMC）30～50mg／片、微晶纤维素（MCC）50mg／片、7．5％聚维酮（PVP）醇溶液时，指标成分在水中可维持12h缓慢释放。结论：中药成分复杂，通过处方设计和优化可对积雪草指标成分的释放进行控制，这是利用现代制剂技术研究中药缓释制剂的有效途径之一。

摘要：目的确定玄参滴丸最佳制备工艺并制定其质量标准。方法以滴丸的溶散时限、外观及丸重变异系数作为综合评定指标，对玄参提取物与基质的比例、基质配比（PEG4000：PEG6000）、药液温度及滴制过程中滴速、滴距、冷凝液温度进行正交试验设计，优选出滴丸最佳成型工艺及滴制工艺。采用TLC对玄参滴丸进行定性鉴别，超高效液相色谱法（UPLC）测定玄参滴丸中哈巴俄苷的含量。色谱柱：ACQUITYUPLCBEHC18柱（2．1mm×100mm，5um）；流动相：乙腈-1％醋酸（31：69）；柱温：35℃；流速：0．2mL·min-1；检测波长：278am。结果以药物-基质（1：3），PEG4000-PEG6000（4：1），药液温度90℃，冷凝液为二甲基硅油和液体石蜡混合液为最佳成型工艺；滴速（20±21滴·min-1，滴距3cm，冰水浴冷却为最佳滴制工艺。TLC可以很好地鉴别滴丸中的主要成分，哈巴俄苷在0．010～0．040μg内呈良好的线性关系，r=0．9999，平均回收率为99．2％，RSD为0．87％。结论本试验制得的滴丸溶散时限、外观及丸重均符合质量要求，制备方法简便可行。含量测定方法操作简便、专属性强、重复性好、结果准确可靠，可用于玄参滴丸的质量控制。

摘要：目的以市售甘草酸二铵肠溶胶囊为参比制剂,考察自制甘草酸磷脂复合物自乳化胶囊在Beagle犬体内的相对生物利用度。方法 Beagle犬6只,自身交叉对照、单剂量灌胃甘草酸磷脂复合物自乳化胶囊或市售肠溶胶囊。采用HPLC测定血浆中的甘草酸浓度,DAS 2.0程序拟合药代动力学数据。结果参比制剂和受试制剂主要的药动学参数:Tmax分别为(6.00±0.000)h,(2.917±0.585)h;Cmax分别为(12.756±1.075)mg·L-1,(17.751±1.604)mg·L-1;AUC0-t分别为(150.894±22.850)mg·h·L-1,(211.196±40.880)mg·h·L-1;AUC0-∞分别为(159.39±21.862)mg·h·L-1,(221.287±42.164)mg·h·L-1,甘草酸磷脂复合物自乳化制剂相对生物利用度(F%)为139.76%。结论 Beagle犬体内甘草酸的药动学规律均符合一级吸收二室模型,与市售胶囊剂相比,自乳化制剂的Cmax、AUC0-t,AUC0-∞均高于肠溶胶囊,表明自乳化制剂能显著提高药物的生物利用度,初步达到了设计要求。

摘要：[目的]探讨脾虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者的肠道菌群特征。[方法]收集2019年1月1日至2019年3月31日于浙江中医药大学附属第二医院、浙江省中医院、浙江省人民医院以及浙江大学附属第二医院门诊及住院的14例脾虚型UC患者、16例其他证型UC患者的粪便样本,同时收集同时间段至浙江中医药大学附属第二医院体检的8例健康者的粪便样本,提取三组粪便样本中菌群DNA,根据16S V3~V4区设计引物进行扩增,通过Illumina Miseq平台进行测序,以生物信息分析软件对测序结果进行分析,比较三组样本菌群组成和结构,分析脾虚型UC患者的肠道菌群特征。[结果]门分类水平上其他证型UC组中变形杆菌门的相对丰度显著高于健康人群组(P<0.01)。属分类水平上,脾虚型UC组和其他证型UC组中分枝杆菌属、包西氏菌属、丁酸单胞菌属的相对丰度显著低于健康人群组(P<0.05),而埃希氏菌属/志贺氏菌属、假单胞菌属的相对丰度明显高于健康人群组(P<0.05)。此外,代尔夫特菌属的相对丰度在脾虚型UC组中明显低于其他证型UC组和健康人群组(P<0.05)。[结论]脾虚型UC患者的肠道菌群特征与其他证型UC患者及健康人群相比存在一定的差异,代尔夫特菌属明显减少可能是脾虚型UC患者肠道菌群的特征性变化。

摘要：医院诊疗大数据是开展临床研究的重要资源,但是因其数据质量没有得到控制、人群代表性差、非结构性数据大量存在、不能直接回答因果关系和纵向数据结构等特征,尚不能直接用于临床研究,需要做转化处理。通过筛选研究对象、适当补充收集资料、二次结构化和数据转置等研究设计和数据处理方法,能很好地将医院诊疗大数据转化为临床研究资料,供研究使用。