摘要：为分析基于诊疗大数据研究的循证医学证据等级,文章分别从诊疗大数据研究的特点、可能的研究设计、数据分析方法、GRADE证据质量分级规则等角度,分析证据质量提升的可能性。基于诊疗大数据研究可能的研究设计方案包括队列研究、历史对照研究、病例对照研究、横断面研究、病例系列研究等,有机会按照GRADE的三大质量提升标准实现高质量证据。因此,应强化循证医学证据等级意识,优化基于诊疗大数据研究的设计,为临床实践提供更多的高质量证据。

摘要：中医单病种临床研究是中医优势病种诊疗规范研究必不可少的研究过程。目前在中医临床研究中，越来越强调研究项目的科学性、合理性、可行性和质量的可控性，以保证研究过程的顺利完成。其中，前3者取决于项目的设计水平，有可遵循的研究设计基本原则。

摘要：中西医结合治疗2019冠状病毒病(COVID-19)临床研究既有中医临床研究的特殊性,又有新发传染病特殊诊疗情境下开展临床研究的特殊性,观察性研究成为最可行的研究设计类型。为了获得临床研究更好的科学性,建议按照中西医结合的时机不同进行干预分组,可以引入外部对照进行比较,采用多种方法进行基线均衡性的校正,在效应指标设计时考虑由主到次、由终点结局指标到替代指标的策略。

摘要：背景:骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化,而失去多分化潜能,因此必须对培养的细胞及时冻存,需要时再进行复苏。目的:建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法。设计、时间及地点:对照观察细胞学实验,于2005-06/2008-06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成。材料:健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取。方法:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并进行传代扩增培养。将第2代骨髓间充质干细胞与12.5%DMSO混匀置于冻存管中,采用慢冻快融法进行冻存和复苏:将冻存管置于-4℃冰箱2h,然后移入-30℃冰箱2h,再置于厚壁塑料泡沫盒中,扎紧密封,置-80℃冰箱过夜后,取出冻存管直接放入液氮中保存,或放入-80℃冰箱保存。复苏时将冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出,立即置37℃水浴并轻轻摇动,1～2min内迅速解冻。主要观察指标:复苏前后细胞成生长活性及形态变化。结果:分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长,贴壁及增殖能力强,传代细胞贴壁较快。经过液氮长期冻存后,将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养,细胞形态及生长状态与冻存前无差异,均呈长梭形均匀分布生长,细胞生长增殖旺盛。结论:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法可获得犬骨髓间充质干细胞,应用慢冻快融技术进行冻存和复苏,较好的保持了冻存细胞的活力和功能。

摘要：目的建立清合口服液的多指标含量测定方法,并对其提取工艺进行考察。方法采用HPLC测定清肺口服液中绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素的含量。色谱条件:流动相为0.3%甲酸溶液(A)和乙腈(B),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(−1),进样量10μL;采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,柱温35℃,检测波长为310 nm(0~25 min)和330 nm(25~75 min)。通过正交试验设计考察水提方法的纯水用量、浸泡时间、回流提取次数及回流提取时间对清肺口服液中各指标提取工艺的影响。结果绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素分别在2.28~145.70μg·mL^(−1)(r^(2)=0.9984)、3.07~196.70μg·mL^(−1)(r^(2)=0.9989)、1.63~104.30μg·mL^(−1)(r^(2)=0.9990)、1.49~95.20μg·mL^(−1)(r^(2)=0.9988)、1.22~77.80μg·mL^(−1)(r^(2)=0.9993)、0.62~39.70μg·mL^(−1)(r^(2)=0.9990)有良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.82%,100.71%,100.06%,99.09%,98.73%,101.71%,相对标准偏差分别为1.89%,3.19%,1.61%,3.45%,3.09%,2.55%。最佳提取工艺为8倍量的纯水浸泡1 h,并连续回流提取2次,每次回流提取时间为1.5 h。结论本研究建立的清肺口服液多指标含量测定方法简便、准确、重复性好;优选的提取工艺稳定可行。

摘要：该实验旨在探讨三七皂苷单体Rb。对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的作用及其与p38MAP雕号通路的关系。原代培养雄性sD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PAsMcs），取第2～5代细胞，随机分为五组：常氧组（N组）、低氧高二氧化碳（1％02，6％C02）组（H组）、低氧高二氧化碳＋8mg／mLRbl组（RbL组）、低氧高二氧化碳＋40mg／mLRbl组（RbM组）、低氧高二氧化碳＋100mg／mLRb1组（RbH组）。孵育24h后收集细胞，分别采用免疫印迹法测定p38MAPK磷酸化蛋白的表达水平，半定量逆转录一聚合酶链反应技术检测p38MAPK基因的表达水平。p-p38MAPK蛋白在N组表达弱阳性：较之H组，Rbl干预组（RbL、RbM、Rbn组）表达均不同程度减弱，以RbM组最为显著，差异有统计学意义妒〈0．01）；p38MAPKmRNA在N组表达较弱；与H组相比，RbL、RbM和RbH组中p38MAPKmRNA表达均不同程度下降，以RbM组最为显著俨〈0．01）。上述结果表明，p38MAPK信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩；三七皂苷单体Rbl可能通过抑制p38MAPK信号通路的表达而减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。

摘要：目的：设计积雪草总苷缓释片的处方并进行评价和优化。方法：以积雪草水溶性有效部位（积雪草总苷）为研究对象，采用拟水平的均匀设计表U6（6^6）设计缓释制剂处方，反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法直接测定制剂中反映积雪草主要药效的2个指标成分——积雪草苷和羟基积雪草苷的释放度，利用指标成分的体外释放度与各辅料之间的回归方程对处方进行优化。结果：积雪草总苷为18mg／片，处方中各辅料的组成为羟丙基甲基纤维素（HPMC）30～50mg／片、微晶纤维素（MCC）50mg／片、7．5％聚维酮（PVP）醇溶液时，指标成分在水中可维持12h缓慢释放。结论：中药成分复杂，通过处方设计和优化可对积雪草指标成分的释放进行控制，这是利用现代制剂技术研究中药缓释制剂的有效途径之一。

摘要：目的探讨运动疼痛诱发试验对早期膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的诊断价值。方法采用横断面研究设计,数据来源于2018年杭州社区KOA健康管理项目,共纳入1816例符合标准的病例。根据KOA患病情况及程度,分为未患KOA(正常人群组530例),患KOA且Kellgren-Lawrence(KL)分期≤Ⅱ(早期组534例),患KOA且KL>Ⅱ(中晚期组752例)。将启动、蹲起、上下楼梯和做家务4项运动纳入诱发试验,统计指标包括年龄、性别、视觉模拟疼痛评分(visual analogue scale,VAS)。先进行相关性分析,根据结果绘制接受者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线,比较曲线下面积(area under the curve,AUC)值,并给出相应最佳临界值。通过倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)校正年龄、性别两项混杂因素,校正后平衡性检验P>0.05。通过Kappa分析评价运动疼痛诱发试验和X线片诊断早期膝骨关节炎的一致性。结果正常人群组、早期组、中晚期组年龄分别为(67.39±7.43)岁、(67.41±9.52)岁、(71.55±9.87)岁,三组性别的分布为男238例,女292例;男209例,女325例;男357例,女395例。正常人群组与早期组在年龄和性别分布上没有异质性(P>0.05),早期组与中晚期组在年龄和性别分布上有异质性(t=-0.034,P0.05)。正常人群组和早期组ROC曲线结果显示最严重疼痛的AUC值最高,为0.98,最佳临界值为1分。校正混杂因素后早期组和中晚期组的ROC曲线结果显示最严重疼痛的AUC值最高,为0.72,最佳临界值为4分;由于早期组和中晚期组之间ROC曲线的AUC值偏低,使用获得的运动疼痛诱发试验诊断方法与X线片诊断方法对早期和中晚期患者进行一致性检验,Kappa值0.41(P1分并且≤4分可初步诊断早期KOA,对鉴别正常人群和早期KOA患者的价值高并且近似于X线片检查;对区分早期和中晚期KOA患者的价值中等,与KL分期的一致性中等,在有条件的情况下还需完善影像学检查综合判断。

摘要：目的:制备中药复方制剂"复方三棱颗粒",并优选其提取及制备工艺。方法:采用超临界二氧化碳萃取法(supercritical CO_2fluid extraction,SFE-CO_2)萃取三棱、川芎挥发油,通过正交试验法优选萃取工艺条件;将萃取完挥发油的药渣与其余六味药材(制大黄、黄芪、杜仲、金樱子、连翘、蒲公英)共同采用冷凝回流法提取,采用正交试验法优选提取工艺条件;提取液进一步浓缩并制备成颗粒剂。结果:SFE-CO_2萃取挥发油的最佳工艺:萃取压力为25 MPa,萃取温度为50℃,萃取时间为2h;回流提取最佳工艺:乙醇浓度为50%(V/V),料液比为1∶12,提取时间为1 h,提取3次;成功制备了复方三棱颗粒剂,收得率为90.80%。结论:所采用提取工艺简单合理,提取效率高,颗粒剂制备工艺可行,为复方三棱颗粒剂制备工艺的确定及生产条件的控制提供了科学的实验依据。

摘要：目的观察用白藜芦醇（Res）干预对百草枯（PQ）中毒小鼠死亡率和肺损伤的影响，探讨核转录因子-κB（NF—κB）炎症通路在其中的作用机制。方法68只SPF级健康雄性ICR小鼠，20只用于观察死亡情况（每组10只），48只用于指标检测（每组6只）。按随机数字表法将小鼠分为生理盐水（NS）对照组、Res对照组、PQ组和PQ＋Res组，后两组再分为6、24、72h亚组。一次腹腔注射30mg／kgPQ建立PQ中毒小鼠模型；于小鼠染毒后立即于对侧腹腔注射Res60mg／kg进行干预。分别于染毒后6、24、72h取血后活杀小鼠留取肺组织，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素（IL-6、IL-1β）含量；电镜下观察肺组织结构变化；原位末端缺刻标记试验（TUNEL）检测细胞凋亡，并计算细胞凋亡率；蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测胞核内NF—κBp65蛋白表达。结果与PQ组相比，PQ＋Res组小鼠48、72、96h累计死亡数有所下降（分别为0比2、2比5、4比6），但差异无统计学意义（均P〉0．05）.电镜下观察可见，PQ组肺组织损伤较NS对照组明显加重，Res干预能够减轻小鼠肺组织损伤程度。与NS对照组[（2．45±0．61）％]相比，PQ组6h肺组织细胞凋亡率即明显增加（（8．42±1．48）％]，72h达峰值[（21．23±3．47）％]；Res干预能够有效减低PQ中毒后小鼠肺组织细胞的凋亡率[6h：（5．56±1．31）％比（8．42±1．48）％，24h：（11．14±2．07）％比（16．88±2．96）％，72h：（13．28±2．32）％比（21．23±3．47）％，均P〈0．05]。PQ中毒后血清TNF—α、IL-6和IL-1β水平以及肺组织细胞核NF—κBp65表达均明显增加；Res干预后上述各指标均较PQ组明显降低[TNF—α．（ng／L）：6h为2．62±0．29比4．06±0．74，24h为3．98±0．41比6．79±0．80，72h为5．06±0．75比11．00±0．75；IL-6（ng／L）：6h为14．19±1．54比16．55±1．24，24h为13．21±1.37比19．73±0．85，72h为13．72±0．56比22．45±0．72；IL-1β（ng／L）：6h为8．54±1．64比12．59±0．66，24h为10．15±0．29比16．24±1．03，72h为16．14±0．70比19．55±0．56；6hNF—κBp65（以NS对照组为1）：（1．34±0．07）倍比（1．86±0．11）倍；均P〈0．05]。结论Res干预不能避免PQ中毒小鼠的死亡，但能够减轻肺组织损伤程度和细胞凋亡。Res对PQ中毒肺损伤的保护机制与其对NF—κB065炎症反应通路的抑制效应有关。