摘要：为建立病毒性出血性败血症病毒精准快速检测方法,以病毒性出血性败血症病毒基因组特异保守的糖蛋白基因片段为靶目标,设计合成了特异性引物及探针,优化退火温度等关键反应条件,分别进行灵敏性试验、特异性试验及重现性试验,构建病毒性出血性败血症病毒数字PCR检测技术体系,同时,与实时荧光定量RT-PCR方法进行对比分析。试验结果显示,病毒性出血性败血症病毒数字PCR最佳退火温度为58.5℃。灵敏性试验显示,随着病毒性出血性败血症病毒基因组RNA连续10倍稀释,稀释至105倍数时,数字PCR体系仍可以检测到阳性微滴,因此,确定RNA基因组核酸含量19拷贝/μL为病毒性出血性败血症病毒数字PCR的检测低限。特异性试验表明,该方法只与目标病毒——病毒性出血性败血症病毒有特异性扩增,与传染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、流行性造血器官坏死病毒、牙鲆弹状病毒、病毒性神经坏死病毒、锦鲤疱疹病毒、鲤浮肿病毒、真鲷虹彩病毒、淋巴囊肿病毒等10种病毒均无扩增反应。重复性试验结果表明,病毒性出血性败血症病毒数字PCR批内与批间试验的变异系数均小于1%,具备良好的重复性。利用构建的数字PCR方法,对收集到的国内及进境鱼类样品共计1210批次进行病毒性出血性败血症病毒检测,结果显示,数字PCR阳性样本检出率为9.5%,常规实时荧光定量RT-PCR阳性样本检出率为7.69%~7.77%。临床试验结果表明,研究建立的病毒性出血性败血症病毒数字PCR方法较常规技术具有更高的检测灵敏性,适用于水生动物疫病精准检测的需求。

摘要：拉曼在物质检测方面的应用越来越广泛,其中SERS增强拉曼为检测液体中的痕量物质提供了一种较为稳定的方法。本实验将包含增强粒子和具有拉曼活性的分析物聚集成液滴状态,并通过激光诱导形成定点增强的干液滴,评估了在此过程中分析物对拉曼信号的响应强度及再现性情况,讨论了在微摩尔和纳摩尔浓度下,该方法定量分析的前景,最后将该方法应用于对染色和田玉的实际鉴别中,成功获取了染料特征峰,实现对天然和田玉与人工染色和田玉的区分。

摘要：暗色刺参(Isostichopus fuscus)已被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)目录。为精确辨别和有效保护该物种,作者进行了精准鉴定暗色刺参的实时荧光PCR方法的研究。在GenBank中收集暗色刺参及近似种海参的线粒体序列,使用海参的线粒体基因中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(Cytochrome oxidase subunitⅠgene,COⅠ)进行实时荧光PCR中引物和探针的设计。根据收集到的17种海参的25条COⅠ序列,设计了2组具有暗色刺参特异性的引物探针组合I-fu-1和I-fu-2;同时根据暗色刺参实物测序得到的COⅠ序列,设计了引物探针I-fu-3~I-fu-6。实时荧光PCR检测结果显示:I-fu-1、I-fu-3、I-fu-4、I-fu-6仅在目标物种中检测到阳性,I-fu-2和I-fu-5则在墨西哥刺参(Isostichopus badionotus)中也检测到阳性;对纯暗色刺参样本的灵敏度(指在一次荧光PCR反应中能够检测到暗色刺参的最低浓度)检测显示,I-fu-4优于I-fu-1、I-fu-3和I-fu-6,可达到0.0008 ng/μL,因此认为I-fu-4是最佳的引物探针组合。利用I-fu-4对混合物中暗色刺参进行检测,在同属近似种墨西哥刺参含量高达99.9%,暗色刺参含量低至0.05%的混合样品中,暗色刺参的实时荧光PCR检测也显示了强阳性结果。本研究建立的鉴定方法具有高特异性和灵敏度的特性,有助于快速、精准地鉴定暗色刺参。

摘要：本文回顾了我国实验室设计装修行业发展历程,包括基础薄弱阶段、专业化起步阶段和专业化标准化发展提升阶段,并结合检验检测实验室专业特点,分析实验室设计装修过程中面临的专业资质欠缺、专业设计人员短缺、标准体系不完善等问题,提出加强相关人员学习教育、培养专业技术队伍、加强顶层设计、推动检验检测实验室设计装修工作标准化的解决思路。

摘要：非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病。本研究根据ASFV B646L、MGF360⁃14L和CD2v基因设计了3套引物和探针,建立了可同时鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR方法。结果表明,该法特异性强,可同时检测ASFV B646L、MGF360⁃14L和CD2v基因,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪A型塞内卡病毒等无交叉反应;两份ASFV MGF360⁃505R与CD2v基因联合缺失疫苗株DNA三重荧光PCR法检测结果都仅出现一条B646L扩增曲线,与预期一致;灵敏度高,该法对重组质粒pUC⁃B646L、pUC⁃360⁃14L和pUC⁃CD2v的检出限分别为1.572×10^(3)拷贝/mL、1.934×10^(3)拷贝/mL和1.929×10^(3)拷贝/mL,灵敏度比世界动物卫生组织(World organization for animal health,OIE)推荐的荧光PCR高10倍;重复性好,对三种重组质粒检测的Ct值批内和批间变异系数均小于2%;应用该法及OIE推荐的荧光PCR对1215份样品进行平行检测,结果显示23份样品为阳性,1192份样品为阴性,两种方法检测结果一致。本研究建立的方法能鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株(缺失MGF360⁃505R和/或CD2v基因),对将来基因缺失疫苗的推广应用及ASF疫情防控具有重要的意义。