摘要：为了解云南腾冲市牛、羊中无形体病的流行情况,本研究选择该市11个乡镇为采样点,采集牛、羊血液样本,参照无形体16S rRNA基因设计引物,采用PCR方法检测牛、羊无形体流行情况。结果显示,从758份牛和羊的血样中共检出阳性样品255份,总阳性率33.64%。其中羊血样本427份,检出114份,阳性率26.69%,分布于8个乡镇;牛血样本331份,检出阳性141份,阳性率为42.60%,11个乡镇均有检出。对扩增的16S rRNA基因(约660 bp)片段测序后,对该基因序列经同源性和遗传进化分析,对无形体进行种类鉴定,结果显示,检出的阳性样品共涵盖7种无形体,其中羊阳性检出样品中包括嗜吞噬细胞无形体(10份)、山羊无形体(1份)、绵羊无形体(72份)、边缘无形体(1份)、牛无形体(5份)和血小板无形体(25份),共6个种类;牛检出阳性样品中包括嗜吞噬细胞无形体(9份)、中央无形体(5份)、绵羊无形体(6份)、边缘无形体(65份)、牛无形体(4份)和血小板无形体(52份),共6个种类。以上结果表明,腾冲市养殖的牛、羊中存在无形体病的广泛流行,且流行的无形体种类复杂多样,对家畜健康威胁较大,有些种类是对人致病的人兽共患无形体,需加强防范。本研究为腾冲市乃至云南边境地区无形体病的防治提供了科学依据。

摘要：应用PCR技术检测江苏徐州地区三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus蚊胃血来源，研究其吸血习性。根据三带喙库蚊可能吸血对象（猪、人、牛、羊、鼠、鸡）的线粒体DNA细胞色素b序列的差异，设计种特异引物，建立聚合酶链反应（PCR）体系鉴定三带喙库蚊胃血来源。同时，用该方法检测猪血、人血、牛血、羊血、鼠血、鸡血中提取的DNA，验证其特异性；对吸饲人血后不同时间（1、12、24、36、48、60h）的中华按蚊进行检测，测试该方法的敏感性。该方法可从已知动物血样提取的DNA中分别扩增得到689（人）、561（牛）、453（猪）、225（羊）、485（鼠）、266bp（鸡）大小的特异性条带；吸人血36h内的中华按蚊均能扩增出特异性条带，在吸人血后48、60h的中华按蚊中，均未扩出特异性条带。共检测24只现场三带喙库蚊，血源来自猪、人、鸡、牛、鼠、羊分别为7、6、3，2、2、1只，其中5只蚊虫兼吸吸血。建立的PCR检测方法可鉴定三带喙库蚊蚊胃血来源，结果稳定可靠；徐州地区三带喙库蚊不仅嗜吸猪血和人血，也可兼吸其他动物血。

摘要：以单增李斯特菌inl A基因为靶基因,设计一对特异性引物,以16S rRNA为扩增内标对照,建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法。优化了PCR反应体系,并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试。对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测,结果显示,只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段,其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段。灵敏度实验结果显示,基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×10~2fg/μL和1.21×10~2CFU/m L。当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/m L时,经8 h增菌培养后可被该方法检出。采用该研究建立的检测方法对36种食品样品进行检测,证实了该检测方法可以指示检测过程中出现的假阴性现象。综上所述,该研究建立的PCR检测方法能特异性的检测单增李斯特菌,并可有效排除检测过程中出现的假阴性现象,提高检测的准确性。

摘要：基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法建立特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法。优化设计合成溶葡球菌酶序列,构建重组表达载体pQE30-Lys,转化至大肠杆菌M15并诱导表达,镍柱纯化得到目的蛋白。利用重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法特异定量检测金黄色葡萄球菌并与平板计数对比。成功表达了重组溶葡球菌酶,并建立了特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法,与平板计数具有显著线性关系。本研究建立的将重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法相结合的检测方法操作快捷简单,具有良好的应用前景。

摘要：目的 荧光定量聚合酶链反应（FQ PCR）用于单纯疱疹病毒（HSV）分型检测的方法学评价及其初步应用.方法 以HSV-1 DNA多聚酶基因和HSV-2糖蛋白D基因为靶基因区,设计合成正向引物、反向引物和探针,采用FQPCR分别检测HSV-1和HSV-2标准株,对FQ-PCR进行方法学评价,并与病毒分离培养法相比较. 结果 建立的FQ-PCR对HSV检测和分型具有特异性;线性范围好（标准品的浓度在5×10^2 ～5×10^8 copies/ml,r=0.998）;灵敏度达到5×10^2 copies/ml;重复性较好,批内CV值为2.3％,批间CV值为4.8％.对120份生殖器棉拭标本用FQ-PCR和分离培养法进行分型检测,FQ-PCR的阳性率为25.8％,高于分离培养法的阳性率20.0％ （P＜0.05）. 结论 FQ-PCR方法具有快速、特异性好、敏感性高的优点,且分型准确,可用于HSV感染的早期诊断和分型.

摘要：汉坦病毒(hantavirus,HV)属汉城病毒S4亚型(Seoul virus-S4 subtype,SEOV-4)是东南沿海地区的主要HV流行亚型,目前尚缺乏快速诊断检测方法。本研究基于酶切探针等温扩增技术(Enzymatic Probe Isothermal Amplification,EPIA),以SEOV-S4较为保守的S序列为靶序列设计引物和探针,建立了一种快速检测SEOV-S4的方法。用靶基因合成质粒梯度稀释进行灵敏度和重复性验证,并用人源其他亚型HV进行特异性验证,结果显示,基于EPIA的SEOV-S4检测方法灵敏度可以达到10 copies/μL,且与人源其他亚型HV无交叉反应。结果表明,本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于相关样本的诊断与筛查。

摘要：为监测东南沿海舟山地区蝙蝠携带轮状病毒的流行情况,探索其流行机制,2015—2018年,在浙江省舟山地区采集蝙蝠,以蝙蝠肠组织为模板,设计针对轮状病毒VP3序列的特异引物进行RT-PCR检测。结果显示,2015年采集的65只蝙蝠,轮状病毒阳性率为6.15%(4/65),2016年采集的48只蝙蝠,阳性率为2.08%(1/48),2017年采集的70只蝙蝠,阳性率为2.86%(2/70),而2018年采集的101只蝙蝠,未检测到轮状病毒序列。针对2017年小菲菊头蝠Rhinolophus hipposideros体内发现的一株轮状病毒进行基因组扩增,获取部分基因组序列并进行生物信息学分析,发现VP7基因序列与蝙蝠源轮状病毒相似度最高,同源性为96%;VP3基因序列与人源轮状病毒同源性为90%;VP6基因序列与猫同源性为95%。根据上述结果,我们推测舟山蝙蝠来源轮状病毒是一株重组病毒株,具有潜在跨种传播给人类的可能性。本研究系首次在东南沿海舟山地区蝙蝠体内检测到轮状病毒,对该地区轮状病毒的监测和预警具有一定的公共卫生意义。

摘要：人工设计合成规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)序列特异性引物,将从临床分离的大肠埃希菌株作为模板,采用PCR扩增方法筛选含有CRISPR系统的大肠埃希菌;利用噬菌斑法从医院未经消毒处理的污水中分离大肠埃希菌噬菌体,经过PEG沉淀的方法浓缩得到高滴度的噬菌体,再用该筛选噬菌体感染上述含有CRISPR的大肠埃希菌以筛选耐受该噬菌体的大肠埃希菌菌株。最后从70株大肠埃希菌中筛选到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分离到1株大肠埃希菌*** 147-30的裂解性噬菌体IME-EC1,在此基础上利用*** 147-30筛选到1株耐受噬菌体IME-EC1的大肠埃希菌菌株,命名为*** 147-30R1。

摘要：随着大量与细菌耐药相关的基因的发现和其表达蛋白结构的成功测定,从已有的化合物中通过计算机模拟方法筛选对耐药蛋白靶点有作用的候选化合物,成为了药物发现的一个标准途径。虚拟筛选在耐药基因抑制剂的发现中可以提高效率、降低实验成本。本文介绍了Autodock Vina和Discovery Studio在基于分子对接法的虚拟筛选中的使用,并对比分析其对β-内酰胺酶活性位点的筛选结果。希望通过这种比较促进虚拟筛选在药物设计领域中的应用,提高耐药基因抑制剂的发现速度。