摘要：目的重组表达制备日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原(SjMP10)。方法根据日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10分子的读框序列设计合成1对引物,扩增SjMP10DNA片段并克隆到表达载体pGEX-4T-3中。转化BL21(DE3)后,诱导表达谷胱甘肽转移酶-虫卵中毛蚴抗原10(GST-SjMP10)融合蛋白。采用洗脱法制备GST-SjMP10融合蛋白,应用免疫印迹法(Westernblotting)和淋巴细胞增殖试验进行重组蛋白的抗原性分析。结果SjMP10基因克隆到表达质粒pGEX-4T-3后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导能表达出Mr39000的GST-SjMP10融合蛋白,经电洗脱法纯化的上述重组融合蛋白可被血吸虫感染兔血清所识别,并能刺激血吸虫感染鼠脾淋巴细胞增殖。结论日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10融合表达获得成功。

摘要：目的　建立一种以多重 PCR-高效液相色谱 (high performance liquid chromatography,HPL C)分析为基础的错配修复基因 DNA大片段缺失检测技术。　方法　设计合成 35对引物 ,分 8个多重PCR反应扩增 MSH2和 ML H1基因的 35个外显子 ,PCR产物经高效液相色谱半定量分析 ,确定各外显子拷贝数。 (1)双盲法分析阴性和阳性对照样本 ,完成方法学可靠性检验。 (2 )分析 14例遗传性非息肉性大肠癌患者外周血细胞 DNA和 13例散发性大肠癌患者癌组织细胞 DNA样本 ,筛查 MSH2和 ML H1基因DNA大片段缺失。　结果　 (1)稳定检出阳性对照样本的 DNA大片段缺失 ;(2 )在筛查样本检出 2例新的MSH2基因 DNA大片段缺失 ,分别为 MSH2基因外显子 7遗传性缺失和 MSH2基因外显子 1～ 6体细胞性缺失。　结论　多重 PCR- HPL C分析系统可以作为突变基因分析系统的一个重要补充 ,在基因 DNA大片段缺失检测中发挥作用。

摘要：前期设计合成了一种模拟人载脂蛋白E(apoE)结构域的小分子多肽EpK,体外实验证实该拟肽具有抑制巨噬细胞炎症及增强高密度脂蛋白(HDL)介导细胞胆固醇外流的作用.本文拟借助慢病毒体系分泌性表达EpK,研究EpK在体对apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.将11月龄雌性apoE-/-小鼠18只,随机分两组,分别经眼球后静脉丛注射p WPI慢病毒(Lv-GFP对照组)和含EpK的重组慢病毒(Lv-EpK组).小鼠普食喂养,间隔采血监测血脂状态,检测血浆对氧磷酯酶(PON1)活性,病毒注射18周后小鼠安乐死,从主动脉根部连续冰冻切片及主动脉胸腹段纵剖面(en face)进行油红O染色分析斑块面积,采用实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏相关基因的m RNA表达水平,蛋白质印迹检测血浆中apo A-Ⅰ、PON1及血清淀粉样蛋白A(SAA)水平.结果显示:慢病毒感染小鼠可成功在血循环中检测到EpK,与Lv-GFP对照组比较,Lv-EpK组apoE-/-小鼠的血脂及脂蛋白分布、apo A-Ⅰ水平、PON1活性无明显改变,但EpK组小鼠的主动脉斑块面积较对照组显著减少(主动脉根部斑块面积(0.87±0.07)mm2 vs(1.03±0.08)mm2,P<0.05;主动脉胸腹段斑块占管腔比42.0%vs 55.8%,P<0.01).EpK可显著降低血中SAA水平,并抑制肝脏炎症因子TNFα和IL-6的表达.结果说明,EpK拟肽具有减退apoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的作用,其机制可能与其发挥的抗炎作用有关.

摘要：目的　了解中国人hMLH1基因T1151A多态与胃肠道肿瘤的遗传易感性。方法　采用病例对照研究设计,提取233例大肠癌(结,直肠癌)患者,273例胃癌患者和268例健康人外周血细胞的基因组DNA。PCR扩增hMLH1基因T1151A多态所在第12外显子的部分DNA片段(217bp),变性高效液相色谱(DHPLC)检测,DNA测序验证,比较分析T1151A基因型在胃肠道肿瘤的分布。结果　正常人群中T1151A多态T/A基因型频率为6.34%,其等位基因A频率为3.28%,在大肠癌患者和胃癌患者中T/A基因型频率与正常人群相比存在显著性差异,分别为11.6% (P=0.039)和12.1% (P=0.021),尤其在<45岁的大肠癌患者和<50岁的胃癌患者中,等位基因A频率与正常人群相比差异更为显著, 分别为10. 66% (P=0.002)和11.27% (P=0.001)。结论　T1151A作为中国人hMLH1基因上的一个多态位点,可能是中国人大肠癌和胃癌遗传易感因素,可作为中国人胃及大肠肿瘤、尤其是低龄胃及大肠肿瘤高危人群筛选的侯选指标。

摘要：目的评价近10年来中医药治疗慢性浅表性胃炎(CSG)的临床随机对照试验(RCT)的文献质量。方法在多个电子数据库中检索相关文献,汇总资料加以分析,以了解试验的随机方法和一些质量相关特征,根据CONSORT文献报告规范进一步评价RCT质量。结果近10年来中医药治疗CSG的RCT设计仍存在诸多问题。结论中医药治疗CSG的RCT设计有待进一步规范,以便提高文献报告质量。

摘要：新生儿败血症是严重的全身细菌感染性疾病,目前仍缺乏快速、准确的诊断方法.我们在16SrRNA基因内,自行设计引物,建立了16srRNA基因聚合酶链反应(PCR)加反相杂交法诊断败血症新方法,取得了较好结果,现将结果报告如下.

摘要：背景:研究发现通过流式分选的SP肿瘤干细胞具有干细胞功能,提示可用于检测表面标志未知的肿瘤干细胞。目的:观察慢病毒转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)对乳腺癌细胞系MCF-7中SP肿瘤干细胞生物学特性及亚群分布的影响。设计、时间及地点:细胞学基因检测水平体外观察,于2007-06/2008-07在南京医科大学第一附属医院普外科实验室完成。材料:MCF-7细胞株由上海细胞生物学研究所馈赠,GFP-MCF-7细胞株由江苏省人民医院普外实验室保存。方法:取MCF-7与GFP-MCF-7细胞株,加入含10%小牛血清的高糖DMEM培养液,在37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度恒温箱中培养,生长至80%～90%融合时消化传代,取处于对数生长期的两种细胞进行实验。主要观察指标:利用流式细胞技术检测转染前后细胞中SP肿瘤干细胞的比例,运用Percoll不连续密度梯度法分离转染前后富集SP肿瘤干细胞的亚群,平板克隆实验测定各亚群的克隆形成率,观察比较转染前后细胞生长曲线、骨桥蛋白的表达水平。结果:MCF-7与GFP-MCF-7细胞中SP肿瘤干细胞比例分别为2.79%和2.73%,转染前后差异无显著性意义(t=2.184,P>0.05)。经Percoll分选,MCF-7与GFP-MCF-7细胞均分为5层,其中GFP-MCF-7第4亚群中明显富集SP肿瘤干细胞,且克隆形成率最高(t=3.415,P0.05)。结论:慢病毒转染绿色荧光蛋白对MCF-7中的SP肿瘤干细胞比例、亚群分布、细胞生物学特性无明显影响,且Percoll不连续密度梯度法富集效果显著。GFP-MCF-7细胞株可用于乳腺癌肿瘤干细胞转移动物模型的构建等实验。

摘要：针对带标注的肺CT图像数据匮乏而导致的深度学习模型训练困难,以及现有生成算法生成肺结节不同特征模糊、细节丢失的问题,提出了肺结节图像的数据增强RAU-GAN算法。首先,在生成器网络中嵌入残差注意力模块,该模块可以聚焦于局部不同的感兴趣区域,以实现肺结节与背景信息的独立生成,并且重新设计了注意力模块中的残差块来减少网络的深度和训练的复杂度。其次,将判别器设计为U-Net架构,可以给更新后的生成器反馈更多信息,以提高判别性能。最后,在数据集LUNA16和Deep Lesion上进行实验,结果与现有方法相比,在视觉效果和不同评价指标上均有提升,验证了生成图像包含了更丰富的细节信息。

摘要：目的实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对膀胱癌生物学行为的影响。方法设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA，用脂质体转染T24膀胱癌细胞株。采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡；荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达；用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6、1／Neo-survivin。结果脂质体转染T24细胞后的转染效率为92．3％；survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达，呈时间和剂量依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时survivin表达水平下调了75．91％，并显著地抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率亦增至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P〈0．01）。用限制性内切酶将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-survivin。结论***能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平，促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，可能成为膀胱癌基因治疗的新工具。成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。

摘要：背景:裸DNA在基因治疗中易被体内核酸酶降解。携载DNA疫苗的病毒类载体存在致癌和引发免疫应答等安全问题,且制备方法复杂。非病毒载体(尤其是阳离子-DNA聚合物)具有低毒,低免疫反应,能重复给药,易于大量制备等优点。壳聚糖是一种天然阳离子碱性聚多糖,具有良好的生物可降解性、生物相容性及生物安全性。目的:制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖,观察其表征及对DNA的保护作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-06/2008-05在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:壳聚糖,脱乙酰度88%,批号061220,由青岛利中甲壳质公司提供。质粒pHEV23为浙江省医学科学院生物工程研究所实验室提供。方法:通过脱水剂Na2SO4诱导的复凝聚沉淀法制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖。根据壳聚糖质量浓度1.4,0.7,0.4g/L,分别制备壳聚糖(高)-pHEV23、壳聚糖(中)-pHEV23、壳聚糖(低)-pHEV23。主要观察指标:激光纳米粒度分析仪测定壳聚糖-pHEV23粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验分析壳聚糖和pHEV23的聚合;DNaseⅠ的保护试验分析壳聚糖-pHEV23的抵抗核酸酶降解能力;释放实验评价壳聚糖-pHEV23的稳定性。结果:制备的壳聚糖-pHEV23粒径在170～470nm,其中壳聚糖(低)-pHEV23171.6nm,壳聚糖(中)-pHEV23387.0nm,壳聚糖(高)-pHEV23467.3nm。壳聚糖(低)-pHEV23Zeta电位为+22.9mV。包封率均>95%,其中壳聚糖(低)-pHEV2395.8%,壳聚糖(中)-pHEV2396.7%,壳聚糖(高)-pHEV2397.1%。凝胶阻滞分析表明,壳聚糖和pHEV23之间通过静电作用完全结合,纳米粒带正电荷。DNaseⅠ保护试验表明,壳聚糖-pHEV23能有效抵抗DNaseⅠ酶降解,对pHEV23有保护作用。稳定性试验表明,4℃保存60d,纳米粒仍能较稳定地包裹pHEV23。结论:壳聚糖-pHEV23能高效装载外源DNA,稳定性良好,并保护其免受核酸酶的降解。