摘要：目的构建HPV16 E7(E7)真核表达载体,观察E7过表达对A431细胞增殖和侵袭的影响。方法从Caski细胞中抽提总RNA,针对E7序列设计特异引物,进行逆转录和聚合酶链式反应扩增得到E7cDNA。应用基因工程方法将得到的PCR片段克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点。重组质粒经双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamineTM 2000转染A431细胞。Western blot检测E7在细胞中的表达。WST-1和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力。流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化。ELISA检测TGF-β分泌情况。结果经酶切、测序鉴定,E7基因正确插入到pEGFP-N1多克隆位点,获得pEGFP-E7;Western blot检测结果显示:与未转染组相比,转染组E7蛋白高表达。过表达E7的A431细胞增殖和侵袭能力均显著增强,细胞周期中S期细胞数量增多,G1期细胞数量相对减少。TGF-β分泌增多。结论E7过表达可改变细胞周期,提高皮肤鳞癌细胞的增殖和侵袭能力,而分泌增多的TGF-β并不能抑制肿瘤的增殖和侵袭。

摘要：目的探讨人脐血源基质细胞(human umbilical cord blood-derived stromal cells,hUCBDSCs)联合脐血单个核细胞(human umbilical cord blood-mononuclear cells,hUCB-MNCs)共移植促进放射损伤BALB/c小鼠造血重建与植入的效应。方法BALB/c近交系小鼠经60Coγ射线8.5Gy辐照后1d按照完全随机设计分为4组,经尾静脉分别输注生理盐水、hUCB-MNCs(1×107/只)、hUCB-MNCs(1×107/只)联合hUCBDSCs(1×106/只)及hUCB-MNCs(1×107/只)联合人骨髓基质细胞(hBMSCs,1×106/只)。检测移植后各组小鼠存活率、外周血象、骨髓病理变化、成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)和脾集落形成单位(CFU-S)计数及人源CD45+细胞植入率、归巢示踪等指标。结果采用hUCBDSCs或hBMSCs联合移植造血受抑轻,恢复快,存活率较单移植组(45%)显著提高(P<0.05),分别为75%和70%。尤其以hUCBDSCs共移植组促血小板恢复作用显著加强,并于移植后第21天恢复至照射前水平。hUCBDSCs共移植组在移植后14dCFU-F(70.40±4.34/孔)、移植后21dCFU-F(94.20±8.44/孔)和移植后12dCFU-S计数(34.75±4.50/只)、CD45+细胞植入率(34.19±2.60)%也显著高于其余组(P<0.05)。CM-DiI标记的hUCB-MNCs在体内主要归巢至骨髓和脾脏,并以hUCBDSCs共移植组小鼠骨髓中的含量(85.20±7.89)最多(P<0.05)。结论hUCBDSCs联合hUCB-MNCs共移植能加速小鼠造血重建,提高植入率。