摘要：目的:研究白藜芦醇(Res)对肠癌细胞焦亡的影响。方法:(1)葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠结肠癌(CRC)实验:30只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Contro组),氧化偶氮甲烷(AOM)组,AOM/DSS组,AOM/DSS+Res组和Res组,每组6只,造模周期共70 d。第1周第1日对AOM组、AOM/DSS组和AOM/DSS+Res组小鼠AOM(10 mg/kg)腹腔注射一次,无菌水饮水,1%DSS水供AOM/DSS组和AOM/DSS+Res组饮用,对AOM/DSS+Res组和Res组小鼠灌胃给予Res(50 mg/kg),造模结束后,取小鼠结肠组织固定、包埋、切片;IHC和Western blot检测小鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达情况。(2)离体实验:HCT 116细胞给予Res(2.4μg/L)以及转染miR-31,加Res实验分为4组,分别标记0 h、12 h、24 h、48 h组;细胞转染分组为5组,即control组、miR-31 mimic组、miR-31 mimic+Res组、miR-31inhibitor组、miR-31inhibitor+Res组,48 h后收集细胞,每组设置三个复孔,并通过Western blot检测细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达情况。结果:动物实验:与control组相比较,AOM/DSS组NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达显著升高(P<0.01),AOM/DSS+Res组NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达水平相较于AOM/DSS组有显著下降(P<0.01);细胞实验:与control组相比,miR-31 mimic组NLRP3(P<0.01)、GSDMD-N(P<0.05)、IL-18(P<0.01)蛋白表达显著升高,miR-31 inhibitor组NLRP3、GSDMD-N、IL-18蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:Res可通过细胞焦亡抑制结肠癌。

摘要：目的观察姜黄素对心肌肥厚大鼠的心脏保护作用,并探索其作用机制。方法AAC法建立SD大鼠压力超负荷心肌肥厚模型,实验分为Sham组、AAC组和姜黄素组。术后16周给予灌胃治疗;术后20周,超声心动图评估大鼠心脏功能;生物机能实验系统采集大鼠心率变化、血压变化和左室内压指标;BCA法检测各组大鼠MPs蛋白浓度;CCK-8法检测各组MPs对HUVEC活力的影响。结果术后20周,仅AAC组死亡2只大鼠。与Sham组相比,AAC组结论姜黄素对压力超负荷心肌肥厚大鼠具有明显的心脏保护效应,推测其机制与降低大鼠循环MPs水平,提高内皮细胞存活率有关。

摘要：目的:观察杏仁核沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白对慢性束缚应激(CRS)大鼠抑郁样行为的影响。方法:60只SD雄性大鼠随机分为6组(n=10):正常对照组(Control)、慢性束缚应激组(CRS)、CRS+氟西汀(FLU)组(CRS+FLU)、CRS+生理盐水组(CRS+NaCl)、CRS+SIRT1过表达组(CRS+AAV-SIRT1)和CRS+空载体组(CRS+AAV-EGFP)。除了正常对照组,其余各组均接受慢性束缚应激造模21 d。造模结束后,氟西汀组和生理盐水组大鼠每天分别灌胃给予氟西汀(10 mg/kg)或生理盐水(10 mg/kg),持续3周;SIRT1过表达组和空载体组大鼠分别脑立体定位,注射腺相关病毒AAV-SIRT1或AAV-EGFP于杏仁核,待病毒表达3周;正常组和抑郁症组大鼠则不给予任何药物。应用糖水偏好实验(SPT)、旷场实验(OFT)和强迫游泳实验(FST)检测各组大鼠的抑郁样行为学变化;蛋白免疫印迹实验检测大鼠杏仁核中SIRT1蛋白的表达;免疫荧光技术检测大鼠杏仁核中SIRT1阳性细胞数量。结果:与正常对照组相比,CRS抑郁大鼠杏仁核中SIRT1蛋白水平和SIRT1阳性细胞数显著降低(P<0.01),糖水偏好程度明显降低(P<0.01),旷场实验中运动总距离和中心停留时间显著缩短(P<0.01),强迫游泳不动时间明显延长(P<0.01)。氟西汀治疗或SIRT1过表达均可以部分逆转CRS大鼠杏仁核SIRT1蛋白和SIRT1阳性细胞数的下调(P<0.05,P<0.01),并且可以显著改善上述抑郁样行为。结论:氟西汀治疗可以部分逆转CRS大鼠下调的SIRT1蛋白及SIRT1阳性细胞数,同时显著改善抑郁样行为,其抗抑郁疗效可能与CRS大鼠杏仁核中SIRT1蛋白的上调有关。

摘要：目的评价人泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在不同肿瘤组织中的表达水平,并构建其shRNA干扰重组质粒。方法通过网络数据库GEPIA和Ualcan分析USP42在不同肿瘤组织中的表达水平。以人USP42 mRNA为靶序列设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体pGPU6/Neo,构建重组质粒USP42-shRNA。采用Neofect®DNA转染试剂将重组质粒转染至人结肠癌细胞HCT116(干扰组),同时设对照组(转染NC-shRNA),Western blot法检测USP42表达的干扰效果,Transwell小室试验检测USP42对结肠癌细胞迁移和侵袭功能的影响。结果经GEPIA和Ualcan数据库分析发现,USP42在胆管癌、胃癌、胸腺癌和结肠癌等肿瘤组织中呈高表达。测序鉴定证明重组质粒USP42-shRNA构建正确。与对照组比较,干扰组HCT116细胞中USP42蛋白表达水平明显降低(t=16.97,P<0.001),且能显著抑制HCT116细胞的侵袭和迁移能力(t分别为4.974和7.787,P<0.01)。结论USP42可能在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用。建立的重组质粒USP42-shRNA可在HCT116细胞中有效干扰USP42的表达,并能抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移。

摘要：目的探究白藜芦醇是否通过SATB2调控HCT 116细胞凋亡及其机制。方法用不同浓度白藜芦醇(resveratrol,Res)处理HCT 116细胞24 h,确定最佳Res给药量为8.33μg/mL。HCT 116细胞分为control组、si-SATB2组、si-SATB2+Res组、空质粒组、SATB2过表达组、Res组、SATB2过表达+Res组,处理结束后,收集细胞提取总蛋白,Western blot检测SATB2、Bax、Bcl-2,Caspase-3、Caspase-9,Cyt-C蛋白的表达。结果 (1)Res上调SATB2蛋白的表达。(2)抑制SATB2表达、开高Bcl-2/Bax比值,下调Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达;Res可逆转此作用。(3)过表达SATB2降低Bcl-2/Bax比值,上调Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达,Res加强此作用。结论抑制SATB2降低HCT 116细胞凋亡水平,Res能够通过上调SATB2促进HCT 116细胞Bax-Caspase3、9凋亡通路蛋白表达。

摘要：目的探讨缺失第8外显子的沉默信息调节因子1(SIRT1)剪接变异体(SIRT1-ΔExon8)和SIRT1全长(SIRT1-FL)在氧化应激损伤中可能发挥的不同作用。方法在人胚肾293T细胞分别转染SIRT1-ΔExon8干扰质粒和SIRT1-FL过表达质粒,给予过氧化氢(H2O2)诱导氧化应激损伤模型,应用CCK-8检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定法检测细胞的损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧簇(ROS)水平,Real-time PCR法检测细胞SIRT1-ΔExon8和SIRT1-FL mRNA的水平。结果 H2O2(50~800μmol/L)可剂量依赖性地诱导细胞氧化应激损伤,包括细胞活力下降,LDH释放增加,细胞凋亡和胞内ROS含量增加,并引起SIRT1-FL mRNA水平降低和SIRT1-ΔExon8 mRNA表达增加;此外,过表达SIRT1-FL或干扰SIRT1-ΔExon8也可以部分抑制H2O2(400μmol/L)引起的细胞氧化应激损伤。结论 SIRT1-ΔExon8可能促进细胞的氧化应激损伤,而SIRT1-FL则发挥相反的作用。

摘要：目的探讨靶向药物联合应用对多驱动基因调控增殖的肝癌细胞SK-Hep-1的影响及作用机制。方法利用对肝癌细胞SK-Hep-1敏感的靶向药物(HG6-64-1、dasatinib、crizotinib、sunitinib)绘制单靶点动力学分析曲线和双相分析曲线,对SK-Hep-1细胞进行动力学分析;Western blot法检测这些靶向药物对SK-Hep-1细胞关键信号通路的影响;MTT法检测这些药物单用和联合应用对SK-Hep-1细胞增殖的影响。结果与单靶点动力学分析曲线比较,双相分析曲线可更好拟合靶向药物对肝癌细胞SK-Hep-1的影响,并且预测出HG6-64-1、dasatinib和MK-2206三药联合应用能有效抑制SK-Hep-1细胞增殖。结论双相动力学分析可以更好地定量描述多驱动增殖的肝癌细胞SK-Hep-1对靶向治疗的反应,联合使用HG6-64-1、dasatinib和MK-2206是治疗肝癌潜在的药物组合。