摘要：背景:现阶段骨髓间充质干细胞定向诱导分化为神经元样细胞的方法并不统一。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经样细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的动态表达。设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2006-09/2007-01在苏州大学生命科学学院完成。材料:清洁级SD大鼠2只。胎牛血清为杭州四季青产品,成纤维生长因子、丁羟基茴香醚为Sigma公司产品,二甲基亚砜为Amresco产品。方法:Percoll法体外分离培养、扩增纯化大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞密度为5×107L-1。设立2组,诱导组用含10%胎牛血清和10μg/L成纤维生长因子的L-DMEM培养基预诱导24h后,再以含2%二甲基亚砜和200μmol/L丁羟基茴香醚的L-DMEM无血清培养基诱导1,3,5h。对照组始终用含10%胎牛血清的L-DMEM进行培养。主要观察指标:细胞形态学变化,免疫荧光染色鉴定神经细胞表型。结果:预诱导24h,胞体由原来的长梭形变成多角形或不规则形,伸出多个短棒状突起,可见2～3个核仁,细胞间漩涡状生长趋势消失,排列无规律;诱导1～3h,细胞逐渐变圆,胞质收缩明显,折光性增强,双级或多极的突起互相连接呈网状;诱导5h,突起出现一、二级分支。诱导1h后部分细胞表达神经前体细胞表面抗原巢蛋白;3h后巢蛋白达高峰,同时表达成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白;5h后巢蛋白表达下降,神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白达高峰。对照组细胞形态无明显变化,巢蛋白表达为阴性。结论:在添加化学诱导剂之前先使用成纤维生长因子进行预诱导,能促进骨髓间充质干细胞向神经前体细胞和神经元转化,且在诱导分化过程中神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致。

摘要：背景:诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的方案已基本成熟,但是诱导过程中影响分化效果的因素仍处于探索阶段。目的:观察诱导时机的选择对大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响。设计、时间及地点:以细胞为对象的观察实验,于2006-08/2007-01在苏州大学江苏省干细胞重点实验室完成,省级重点实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于SD大鼠,雌雄不限,体质量150～200g。方法:采用Percoll淋巴细胞分离液分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。将第3代大鼠骨髓间充质干细胞以5×107L-1密度分组培养,诱导组分别于接种当时、细胞达50%～60%融合时、细胞达85%～95%融合时加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的成骨诱导培养基诱导。非诱导组采用普通培养基培养。主要观察指标:诱导后7,14,21,28d行钙钴染色、Von-Kossa染色、碱性磷酸酶活性检测成骨细胞能力。定期在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化及生长状况。结果:经钙钴染色后,诱导组大部分染色的细胞呈阳性反应,胞浆中可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒,大多数多角形细胞呈阳性,如铺路卵石样排列,随着时间的延长,可见片状强阳性细胞,以细胞达85%～95%融合时诱导培养组数量最多,结节体积最大。非诱导组未见片状强阳性细胞。Von-Kossa染色后可见深棕色致密结节。以细胞达85%～95%融合时诱导培养组形成结节较早,同期相比数量较其他组多。细胞内碱性磷酸酶活性检测表明经成骨诱导剂诱导后与同期非诱导组相比细胞内碱性磷酸酶活性明显提高,表现细胞成骨分化特点。结论:初始接种密度相同的情况下,细胞间相互接触程度越高,成骨能力越强。

摘要：目的:筛选和优化环孢素A-聚氰基丙烯酸酯纳米粒处方工艺,并初步考察了纳米粒的相关理化性质。方法:反相高效液相色谱测定环孢素含量;聚氰基丙烯酸酯为载体材料,均匀设计法对乳化聚合技术制备载药纳米粒中油/水比例,乳化刑、蒸发温度和乳化时间进行优化:透射电镜对纳米粒特性和形态进行了鉴定分析。结果:以水:溶剂为5:1作溶剂,0.1%泊洛沙姆为增溶剂,温度为50℃下所制备的环孢素纳米粒分布均匀集中,呈单峰,粒子呈圆形,平均粒径为(39.75±0.50)nm,回收率为(92.21±2.06)%,包封率为(99.57±0.04)%,载药量为(15.33±0.01)%。结论:优化处方工艺制备的环孢素A-景氰基丙烯酸酯纳米微粒有良好稳定性和分散性。

摘要：树突状细胞在免疫系统对抗原的捕获、处理及提呈过程中发挥极为重要的作用,疫苗的靶向传递主要通过各种功能性载体微粒进行。研究表明,载体微粒大小、表面电荷以及树突状细胞表面不同受体设计的特异性靶向给药系统对疫苗在抗肿瘤免疫治疗中的应用具有重要意义。本文着重阐述了近年来树突状细胞靶向给药系统的研究进展,为进一步研究设计高效靶向肿瘤疫苗制剂提供参考。

摘要：目的评价新型肿瘤标志物甲胎蛋白-IgM免疫复合物（AFP-IgM）对原发性肝细胞癌（PHC）的诊断意义。方法用酶联免疫吸附法与电化学发光法分别检测103名健康人、74例原发性肝细胞癌、27例中度肝硬化和63例慢性肝炎患者血清AFP-IgM与甲胎蛋白（AFP）含量。以非肝癌组（健康人、中度肝硬化和慢性肝炎）作为对照组。结果AFP的ROC曲线下面积大于AFP-IgM（0．85vs0．72，Z=3．21），并应用ROC曲线确定AFP-IgM和AFP的临界值分别为3×10^5AU／L和10μg／L。在此临界值下，AFP-IgM和AFP对PHC的敏感度分别为64．9％和79．7％，特异度分别为75．6％和80．3％，两者的有效性相近；但对早期（Ⅰ与Ⅱ期）肝癌诊断时，AFP-IgM的ROC曲线下面积大于AFP（0．91vs0．82，Z=1．73），差异具有统计学意义，其敏感度分别为94．4％和72．2％，特异度分别为81．9％和79．9％；联合检测以两项均为阳性诊断原发性肝癌：特异度可达89．1％，有效性为79．0％。结论采用AFP联合AFP-IgM检测可提高PHC诊断的特异度和有效性，但对于原发性肝癌的早期诊断AFP-IgM的敏感度与特异度均比AFP更高，AFP-IgM对原发性肝癌的早期诊断更具重要意义。

摘要：目的探讨Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,在含10%血清的培养基中培养6 d细胞汇合后更换无血清培养基继续培养。实验中设计4个时间点,用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化的变化,免疫荧光染色技术鉴定细胞种类以及Rac1蛋白在细胞内的表达,通过Western blot检测Rac1蛋白的表达变化。结果建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系,此体系底层主要是由Ⅰ型胶质细胞组成的单层细胞,GFAP染色呈阳性;在单层细胞上面有一些小圆形强折光性神经前体细胞生长,βⅢ-Tubulin染色呈阳性。更换无血清培养基后上层神经前体细胞大量增殖,βⅢ-Tubulin、Rac1染色呈阳性。Western blot定量分析结果显示,神经前体细胞增殖过程中Rac1蛋白表达上升,而分化过程中Rac1蛋白的表达下降。结论Rac1蛋白表达与神经前体细胞的增殖分化过程密切相关,可能参与了神经前体细胞的增殖分化过程。

摘要：目的:考察环孢素A(cyclosporin A,CsA)脂质体的制备方法、理化性质及其体外释放行为。方法:比较薄膜分散法、逆向蒸发法、乙醇注入法、乙醚注入法所得的环孢素A脂质体(CsA-Lip),并以包封率和载药量为综合指标,正交设计优化CsA-Lip处方工艺;分别采用动态透析法和超速离心法研究CsA-Lip的体外释放行为。结果:乙醇注入法制备CsA-Lip的平均粒径为(80.41±3.12)nm,包封率为(87.09±0.03)%,载药量为(4.98±0.45)%,24 h释放44%。结论:经优化制备的CsA脂质体具有较高的包封率和载药量,并具有缓释作用。