摘要：为了解禽腺病毒4型(FAdV-4)GZ-B1株的遗传进化情况,试验设计合成FAdV-4 Hexon基因的特异引物,对GZ-B1株Hexon基因进行PCR扩增并克隆至pMD-19T载体,基因测序和遗传进化分析。结果:扩增的Hexon基因长度为327 bp,与预期相符。GZ-B1株与国内外13株FAdV参考毒株中的7株FAdV-C毒株同源性较高(95.8%~98.5%),其中与国内强毒株GDMZ、LC1611、SDSG、SDXL同源性最高(均为98.5%),与基因型A、B、D、E的6株参考毒株同源性较低(73.0%~77.5%)。遗传进化树显示,GZ-B1株与基因型A、B、D、E毒株处于不同进化分支,与国内外C基因型毒株处于同一进化分支,表明该毒株与C基因型毒株遗传差异较小,其中与国内C型强毒株LC1611的遗传差异最小,亲缘关系最近。结论:FAdV-4 GZ-B1株属于C基因型、血清4型,与国内流行株FAdV-4 LC1611亲缘关系最近,同源性最高。

摘要：为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化特性。结果显示,猪源APOBEC3F基因编码区(CDS)长1257 bp,编码418个氨基酸,与其他物种该基因的同源性在60%~70%。利用扩增的APOBEC3F基因构建真核表达载体pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F经菌液PCR和测序鉴定正确后,转染Marc-145细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组APOBEC3F蛋白的表达。IFA结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的Marc-145细胞质中出现特异性红色荧光;western blot结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的细胞样品在44 ku处有特异性条带,表明猪源APOBEC3F在Marc-145细胞中获得了表达。在Marc-145细胞中转染不同剂量的pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F或不同剂量的针对APOBEC3F的siRNA,过表达或抑制APOBEC3F表达后感染PRRSV,通过RT-qPCR检测PRRSV N基因mRNA的转录水平,采用western blot检测细胞中PRRSV N蛋白的表达水平,采用TCID50测定PRRSV滴度。结果显示,在Marc-145细胞中过表达的APOBEC3F可以显著抑制PRRSV N基因mRNA转录水平(P<0.01)和N蛋白的表达水平,降低PRRSV滴度(P<0.01、P<0.001),表明APOBEC3F具有抑制PRRSV增殖的作用,且抑制效率与重组质粒的转染剂量呈正相关。在Marc-145细胞中抑制APOBEC3F的表达后,PRRSV N基因的mRNA转录水平(P<0.01)、N蛋白的表达水平与PRRSV滴度(P<0.05、P<0.001)均显著升高,表明抑制APOBEC3F的表达具有促进PRRSV增殖的作用,且该促进效率与针对APOBEC3F的siRNA转染剂量呈正相关。本研究首次证明APOBEC3F对PRRSV在Marc-145细胞中的增殖有抑制作用,为研究APOBEC3F功能提供实验依据,也为研究抗PRRSV相关机制的研究提供参考。

摘要：贵州省某养鸡场两栋鸡舍中的蛋鸡疑似发生了鸡传染性喉气管炎病毒感染,为确定该病病因,引物按已发表的TK基因引物序列进行合成,从发病鸡采集的病料中扩增出1259 bp大小的片段;将阳性病料组织处理后接种LMH细胞,盲传3代后发现LMH细胞出现CPE现象,收集其病毒液对其进行PCR鉴定、生长曲线的测定以及动物回归试验,确定分离到一株ILTV毒株,并将其命名为GZNY202112株。为了进一步了解其遗传特征,根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒TK基因、gD基因设计了特异性引物,使用DNAstar软件绘制遗传进化树。TK以及gD遗传进化分析结果显示该毒株与澳大利亚原产疫苗株CSW-1、V1-99亲缘关系最近,GZNY202112株可能与ILT疫苗株有关。

摘要：为了构建猪源APOBEC3F-N端结构域真核载体,探究APOBEC3F与猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)作用的功能区域,以猪源APOBEC3F-N端结构域为研究对象,根据APOBEC3F蛋白二级结构预测结果设计APOBEC3F-N端结构域引物,以pcDNA3.1(+)5’Flag-APOBEC3F重组质粒为模板进行APOBEC3F-N端结构域PCR扩增,通过无缝克隆技术连接扩增产物至pcDNA3.1(+)5’Flag,构建重组质粒pcDNA3.1(+)5’Flag-APOBEC3F-N,并进行测序鉴定。结果:试验扩增出APOBECF-N端结构域序列,并将该序列连接至pcDNA3.1(+)5’Flag载体,经测序鉴定pcDNA3.1(+)5’Flag-APOBEC3F-N重组质粒构建成功。结论:构建的猪源APOBEC3F-N端结构域真核表达载体可作为研究APOBEC3F与PRRSV相互作用机制的基础。

摘要：工程训练中心的设立对于培养满足社会所需的创新创造性人才具有重要意义,尤其在目前的时代背景下,以多学科交叉发展的理念为指导,探索出一套科学的、有效的工程训练教学体系设计,对于培养学生的工程意识、创新意识、创新能力及增强学生的就业竞争力都具有重要的意义。基于此,该文就多学科交叉下的工程训练中心教学体系进行初步设计并在教学中进行实践。

摘要：“数字系统与逻辑设计”是计算机大类的一门专业必修课。由于内容多,更新快,实践性强,传统教学效果不甚理想。通过实施“MOOC+学习通+头歌”线上线下混合式教学模式改革,利用现代化的教学模式,评价学生的学习行为以及学习效果,同时将项目教学和课程思政融入课堂,不仅使学生的学习兴趣得到极大激发,让学生真正成为学习的主体;还能提高学生的职业素养,了解自己的社会责任,教学效果得到明显提升。