摘要：为获得贵州省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株全基因组序列,根据GenBank上PRRSV VR-2332株设计合成8对特异性引物,对发生在贵州省安顺地区某养猪场PRRS疑似病例进行了PRRSV分离以及全基因组测序与分析。结果表明:组织病料悬液接种Marc-145细胞后,出现细胞皱缩、聚集成簇或脱落等细胞病变,并将分离毒株命名为PRRSV AS株;采用8对PRRSV引物对接种细胞RNA提取物进行RT-PCR扩增,均可得到与预期大小(1 057bp,20 16bp,1 771bp,1 902bp,2 263bp,2 569bp,2 734bp,3 778bp)相一致的特异性条带;对RT-PCR产物测序后进行比对和拼接,得到PRRSV AS株基因组全长为15 338bp,其中G+C含量为52.2%,与欧洲型LV株、美洲型VR-2332株、中国早期毒株CH-1a和新近变异毒株JXA1的核苷酸相似性分别为61.5%、89.1%、94.2%和98.1%。成功获得了贵州省安顺地区PRRSV流行毒株即AS株全基因组。

摘要：目的:构建携带pcDNA3.1-DEV-NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌。方法:大量培养含pcDNA3.1-DEVNP28/gB大肠杆菌DH5α,提取重组质粒,转化至感受态减毒沙门氏菌SL7207中,培养后再提取重组质粒,通过双酶切、PCR和序列测序进行鉴定。结果:经对重组质粒双酶切和PCR后,均可得到与预期大小相一致的DNA片段(1 062bp);测序发现重组质粒目的基因序列与预期设计一致。结论:成功构建了携带pcDNA3.1-DEV-NP28/gB的减毒沙门氏菌SL7207。

摘要：为了解贵州省猪轮状病毒（PoRV）VP7蛋白的结构及功能,根据Gen Bank发表的猪轮状病毒VP7基因序列设计1对特异性引物,扩增1株猪轮状病毒贵州流行株VP7基因全序列并进行序列测定及生物信息学分析。结果显示：VP7基因全长为1 062 bp,包含一个981 bp的开放发阅读框,编码326个氨基酸,氨基酸突变主要发生在高变区。与已知的14个国内外参考毒株VP7核苷酸和推导的氨基酸序列比较,同源性分别为71.5%-97.0%和72.4%-98.7%,与G4型毒株核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性分别为86.6%-97.0%和92.9%-98.7%。核苷酸系统进化树结果显示,贵州流行株与G4型毒株CMP070/09属同一个分支,因此推测贵州流行株为G4型猪轮状病毒。预测PoRV VP7蛋白理论相对分子质量为37.2 ku,等电点为4.75,半衰期为30 h,不稳定系数为31.22;跨膜结构及信号肽分析表明VP7蛋白有2个跨膜区,无信号肽区域;抗原表位预测显示VP7蛋白在第69-104、145-150、176-183、210-224、311-321位及其附近肽段可能为其优势抗原表位;结构预测显示,VP7蛋白存在1个N-糖基化作用位点、14个磷酸化位点,不存在O-糖基化位点。

摘要：为了了解贵州省鸵鸟感染新城疫病毒后的症状及分离株F基因的分子生物学特性，试验通过患病雏鸵鸟临床症状、剖检病变观察和鸡胚感染分离鉴定，并针对新城疫分离株F基因序列设计特异性引物，采用RT—PCR方法对从贵州省某养殖场采集的雏鸵鸟病料进行新城疫检测。结果表明：该病例感染了新城疫病毒，分离株F基因裂解位点的氨基酸序列为^112G—R-Q-G-R-L^117，是1株新城疫弱毒株；与其他贵州省毒株间的核苷酸同源性为84．1％～89．7％，与国内外新城疫病毒代表株的核苷酸同源性为83．9％-89．9％；系统发生树分析显示，贵州分离株与新城疫病毒弱毒株在同一分支上，属于基因Ⅱ型新城疫病毒。

摘要：为储备小反刍兽疫疫情防控技术,根据GenBank公布的小反刍兽疫病毒N基因序列设计合成特异性引物,以小反刍兽疫弱毒疫苗为材料,建立小反刍兽疫病毒一步法PT-PCR检测方法,并对所建方法进行条件优化和性能评价。结果显示,建立的方法能有效扩增大小约447bp目的基因片段。该一步法RT-PCR最佳模板质量浓度为6.76×10-3 g/L,最佳退火温度60℃。该一步法RT-PCR检测方法性能评价结果显示,其最小模板检出质量浓度为6.76×10-6 g/L,且方法具良好的特异性和临床应用性,可用于小反刍兽疫多种样本的检测。