摘要：基于PC机的桌面虚拟方式,设计出了一个具有视觉反馈、简单听觉反馈和力反馈的虚拟近视眼手术实习训练系统。该系统为实习医生提供了反复进行手术训练的平台,使实习医生间接获得大量的临床实践经验,同时还能大大节约培养实习生的费用。

摘要：目的优选虎耳草醋制工艺。方法 L9(34)正交设计试验,以用醋量、浸润时间、炒制温度、炒制时间为考察因素,以化学指标原儿茶酸、岩白菜素含量和药效学指标小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数综合加权评分,优选虎耳草醋制工艺。结果米醋用量为55%、浸润时间为2h、炒制温度控制在80℃、炒制时间为20 min时为醋制虎耳草最佳炮制工艺。结论优选出的醋虎耳草炮制工艺稳定可行,重复性好,止咳作用较强,可为虎耳草药材的炮制提供指导。

摘要：本文主要介绍了研究生组织学技术切片制作的实验设计与准备过程以及实验中需要的各种器材和试剂配制、设计方法。

摘要：需求分析阶段的任务是确定软件系统功能,用例建模是面向对象软件开发技术中的一个重要部分,它从用户角度描述软件系统功能。以医学院临床管理信息系统为例,利用统一建模语言UML对系统进行抽象,建立用例模型;根据用例建模,采用结构化设计的方法设计出临床毕业实习管理系统功能模块,完成系统初步设计。

摘要：为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。

摘要：目的探讨通过RNA干扰技术抑制α3神经型尼古丁受体（nAChR）基因表达后该受体对神经细胞抗氧化能力的影响，来了解α3 nAChR的神经保护作用。方法设计并体外合成α3 nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸，退火后克隆至pSilencer 3．1-H1 neo质粒中，构建重组质粒α3 nAChR pSilencer 3．1-H1 neo。将α3 nAChR pSilencer 3．1-H1 neo转染SH-SY5Y细胞，用含G418的培养液筛选，挑选阳性克隆后采用即时荧光定量PCR和Western blot方法检测转染细胞中α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化。用1μmol／L β-淀粉样肽1-42（Aβ1-42）处理转染细胞后，用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定细胞活力；用比色法测定其脂质过氧化产物含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果成功构建α3 nAChR siRNA表达质粒，转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株，与对照组相比，α3 nAChR mRNA及蛋白表达量均降低（抑制率分别为98％和66％）；经转染处理的细胞活力明显低于对照组，细胞中脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加。超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性不同程度的降低；抑制α3 nAChR基因表达后能增强Aβ的神经细胞毒性作用。结论成功构建的α3 nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3 nAChR基因表达，α3 nAChR基因表达抑制后可引起氧化应激水平升高，并增加Aβ的神经毒性，表明α3 nAChR具有一定的抗氧化能力和神经保护作用。

摘要：目的:设计合成灯盏乙素生物素标记探针4和10,并考查其抗肿瘤活性。方法:以灯盏乙素苷元与生物素为原料,经过酯化反应、酰胺反应、水解反应、取代反应等,在灯盏乙素苷元的4'位引入生物素标记,得到灯盏乙素生物素标记探针4和10,并对其进行细胞水平的抗肿瘤活性研究。结果:合成的探针化合物及中间体均经过1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS进行了结构表征,确证结构与目标产物一致。细胞实验结果表明灯盏乙素生物素标记探针4和10均具有较好的抗肿瘤活性。结论:灯盏乙素生物素标记探针4和10均表现出与灯盏乙素相当的抗肿瘤活性,将为进一步的灯盏乙素抗肿瘤靶标的发现奠定基础。

摘要：目的用RNA干扰技术抑制神经型尼古丁受体(nAChR)α3亚单位基因表达并观察对神经细胞淀粉样蛋白前体蛋白(APP)代谢的影响。方法设计并体外合成α3nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸,退火后克隆至pSliencer3.1-H1neo质粒中,构建重组质粒α3nAChR pSilencer3.1-H1neo。将α3nAChR pSilencer3.1-H1neo转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α3nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化;并测定分泌型APP、总APP蛋白表达的变化。结果成功构建α3nAChR siRNA表达质粒,转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α3nAChR mRNA及蛋白表达量均降低(抑制率分别为98%和66%);分泌型APP表达下降,总APP水平比较表达水平无显著性差异。结论α3nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3nAChR基因表达,α3nAChR可能通过增加α-分泌酶对APP的切割发挥神经保护作用。

摘要：Sirtuin蛋白是一类称为依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的组蛋白去乙酰化酶,共有7个成员,均是潜在的疾病治疗靶点。然而,目前的荧光筛选方法,只适用于SIRT1~SIRT3。因此,根据SIRT5的新酶活,设计、合成了针对SIRT5的荧光标记多肽（ISGASE（Su K）-AMC）,并通过LC-MS和荧光检测证明了该荧光标记多肽能应用于SIRT5的活性筛选。

摘要：目的构建人HuR基因慢病毒干扰载体和基因敲低细胞株,为揭示C/EBPβ3’UTR RNA与HuR蛋白相互作用抑制肝癌细胞增殖的分子机制奠定基础。方法根据shRNA设计原则设计人HuR基因的shRNA序列,用化学合成法合成shDNA序列,以LV10(pGLVU6/RFP/Puro)为载体骨架,构建慢病毒干扰载体LV10-HuR,并与慢病毒包装辅助载体(pLP1、pLP2和pLP/VSVG)共转染HEK293T细胞,收集病毒液纯化后感染SMMC-7721细胞并用嘌呤霉素杀死未感染的肝癌细胞,荧光显微镜下挑取单克隆红色荧光细胞集落,扩大培养后通过Western blot验证肝癌细胞内源性HuR蛋白表达。结果经DNA测序鉴定,LV10-HuR正是所需的慢病毒干扰载体。通过共转染获得的重组慢病毒颗粒感染的肝癌细胞在荧光显微镜下显示红色荧光。嘌呤霉素筛选和单克隆细胞集落挑取获得显示红色荧光细胞株,western blot证明稳转细胞内源性HuR基因表达下降,证明LV10-HuR慢病毒干扰载体可以抑制肝癌细胞内源性HuR基因表达。结论成功构建慢病毒干扰载体LV10-HuR,包装出有活性的重组慢病毒颗粒,建立HuR基因敲低肝癌细胞株。