摘要：水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)不同双链RNA片段的三价RNAi(RNA interference)表达载体在转基因水稻中的研究尚未见报道。本研究以RBSDV已报道不同双链RNA序列为基础,设计了针对S2、S6、S10三个基因共605 bp的RNAi靶序列,通过基因合成的方法获得相应的目的片段。利用Gateway~ LR Clonase^TM Ⅱ Enzyme Mix的LR反应将目的基因构建到RNAi载体pBDL03中,然后通过农杆菌转化法转到水稻品种泰粳394中。通过PCR和荧光验证共获得45株阳性苗。T1代植株RBSDV抗性鉴定结果证实针对S2、S6和S10基因的三价RNA沉默载体对RBSDV具有良好的抗性。本研究结果为利用RNAi技术进行植物抗病毒研究奠定了基础。

摘要：草甘膦是世界上应用最广泛的广谱性除草剂,目前我国还没有自主知识产权的抗草甘膦油菜品种。本研究利用农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化方法,将新型抗草甘膦基因*** EPSPS转入甘蓝型油菜品系J9707中,获得了126株阳性转化株,阳性率为97.0%。这些转化单株中的T-DNA插入以单拷贝为主(占44.8%)。通过反向PCR确定了EPS-2、EPS-6和EPS-7等油菜转化体中T-DNA插入位置,并设计转化体特异性引物对它们的T0~T3代材料进行检测,证明了它们的T-DNA在基因组水平上整合的稳定性。RNA和蛋白水平的表达分析证实,*** EPSPS转基因及其蛋白产物在各转化株系不同世代能够稳定表达。苗期进行不同剂量的除草剂喷施处理发现,EPS-1、EPS-2、EPS-5、EPS-6和EPS-7等株系可耐受4倍田间推荐使用剂量的草甘膦。本研究所创建的新型抗草甘膦油菜种质资源将为我国抗除草剂油菜品种培育奠定了重要基础。

摘要：以转基因小麦B73-6-1为研究对象,通过染色体步行技术,成功分离到B73-6-1上pAHC25质粒外源基因插入位点的3'端旁侧序列,其扩增片段覆盖了转化载体及转基因小麦基因组旁侧序列。同时根据旁侧序列设计引物,建立品系特异性定性PCR检测方法,以典型的转基因作物证明该方法检测B73-6-1具有高特异性。该方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确、高效地检测转基因小麦B73-6-1品种。

摘要：G-四链体序列可与Hemin结合形成具有过氧化物酶活性的DNAzyme,被广泛应用于生物传感器的构建中。G-四链体的过氧化物酶活性高低对生物传感器构建至关重要。本研究利用圆二色谱比较分析了生物传感器中常用G-四链体序列的空间构型,筛选出过氧化物酶活性高的G-四链体序列,并比较了G-四链体中鸟苷酸聚集单元数、K+及Hemin对其过氧化物酶活性的影响。本研究应用高过氧化物酶活性的G-四链体作为可视检测信号核酸分子设计了一种可用于核酸检测的G-四链体等温信号扩增体系,不同于通常核酸检测方法直接对目标序列进行扩增,该体系在等温条件下,通过剪切与置换进一步大量扩增作为信号分子的G-四链体序列,致使整个核酸检测过程更为简便,为生物传感器构建、新型核酸检测技术研发提供了新的思路和技术支持。

摘要：为建立转基因大豆OsDREB3品系特异性定性检测方法,以转基因大豆OsDREB3为研究对象,通过染色体步行方法,成功获得转基因大豆OsDREB3上pCAMBIA1301质粒外源基因插入位点的5′端旁侧序列,其扩增片段覆盖了转化载体及转基因大豆基因组旁侧序列,扩增片段大小为344bp。同时根据旁侧序列设计引物,建立OsDREB3品系特异性定性PCR方法,以典型的转基因作物证明该方法检测转基因大豆OsDREB3具有高特异性,灵敏度为0.1%。

摘要：为探究睾丸注射法制备转基因动物的可能性,文章将携带有山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和绿色荧光蛋白标签的重组载体经脂质体包裹后随机打点注射小鼠睾丸。对实验小鼠进行睾丸切片、精子荧光检测以及精子DNA检测,证实外源基因在亲代小鼠体内成功表达。睾丸注射后小鼠与正常母鼠交配产生的F1代,以及F1代自交产生的F2代在不同水平均可检测到外源基因的成功表达,阳性率分别为4%和30.23%。研究结果说明睾丸注射是一种制备转基因动物行之有效的方法,且外源基因可以稳定遗传。该方法的完善和成熟对于动物转基因以及动物性状改良和育种具有理论和实践意义。

摘要：通过对聚合螟虫和稻瘟病抗性基因水稻恢复系的农艺性状配合力进行分析,为杂交水稻聚合恢复系的选育提供了一定的理论基础。按不完全双列杂交5×8(NCII),以抗螟虫抗稻瘟聚合恢复系5个为父本和不育系8个母本设计并配制了40个组合,对穗长,株高,有效穗数,总粒数,实粒数,空瘪粒数和结实率进行了研究、千粒重与单株产量等9项农艺性状配合力与遗传参数分析。一般配合力(GCA)分析表明昌恢891TJH、长田A、圳20A、华盛A、晶泰A、广8A配合力较高,特殊配合力(SCA)分析表明晶泰A/昌恢891TJH、华盛A/昌恢891TJH、圳20A/R205TJH特殊配合力较高。千粒重、总粒数、有效穗主要受到基因非加性效应影响,穗长主要受到基因加性效应影响。穗长、实粒数、空瘪粒数、总粒数的遗传效应主要依赖不育系母本,单株产量的遗传效应取决于聚合恢复系父本,而株高、有效穗、结实率、千粒重遗传效应由双亲共同影响。

摘要：以实时荧光PCR技术鉴定商业化种植的转基因玉米T14/T25品系。根据转基因玉米T14/T25转入的外源基因质粒图谱,设计转基因引物和探针进行PCR和实时荧光PCR检测,建立了转基因玉米品系鉴定的实时荧光PCR方法。实验结果表明,用TaqMan探针可检测到T14/T25产生的荧光信号,而对其他玉米品系则检测不到荧光信号,为转基因产品的鉴定检测提供了新方法。

摘要：转基因玉米MIR162是美国先正达公司开发的新型抗鳞翅目昆虫的转基因玉米品种。本研究目的在于建立该品系转化事件特异性定性、定量检测方法并形成定性检测国家标准。定性PCR体系经实验室内部比对及实验室间循环验证结果表明,该体系特异性强,灵敏度较高(0.1%),具有良好的重复性和再现性。TaqMan探针实时荧光PCR检测结果表明,所设计的探针特异性强,检测低限(LOD)在0.01%以下;定量标准曲线R2均为0.999,扩增效率为98.622%和99.602%,SD范围为0.014～0.209,RSD的范围为0.049%～0.879%,稳定性好;对转基因含量为1.0%、0.5%、0.1%的样品定量结果相对偏差在8.0%以内,结果较为准确。本研究建立的方法完全可用于含转基因玉米MIR162成分样品的检测。

摘要：利用hi TAIL-PCR方法研究了转基因水稻Bar Kasalath-01中外源基因在基因组上插入位点的序列特征,获得了外源基因T-DNA右边界旁侧序列511 bp,与水稻基因组数据库比对发现,外源基因插入位点位于水稻基因组第8号染色体的第3 326 720处。根据整合位点水稻基因组序列和外源基因T-DNA左边界序列设计引物,扩增得到了左旁侧序列783 bp。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻Bar Kasalath-01的事件特异性定性PCR检测方法,扩增片段分别为783 bp和411 bp。该方法特异性强、灵敏度高,能够在Bar Kasalath-01基因组DNA含量为0.1%的模板中检测出转基因成份。依据旁侧序列,还建立了快速鉴定转基因后代植株基因型的3引物PCR检测方法。这些方法的建立,实现了对转基因水稻Bar Kasalath-01转化事件的特异性检测。