摘要：为降低RNAi技术的毒副作用,筛选高效抑制猪瘟病毒复制的shRNA序列,根据有关报道构建了荧光报告系统shRNA筛选平台。该平台以9种抑制效率分别为强、中、弱的shRNA筛选载体作为参照,结合荧光报告系统进一步量化shRNA的抑制效率。根据2种已知体外有效抑制猪瘟病毒复制的siRNA-N2、siRNA-NS5B,分别设计得到shRNA-N2、shRNA-NS5B表达载体,继而采用高效、高灵敏度的shRNA筛选平台对这2种shRNA进行了检测,结果显示单拷贝情况下,shRNA-N2抑制靶序列效率较强,shRNA-NS5B抑制效率弱。本试验通过新策略大大提高了shRNA干扰效率检测的灵敏度,为采用shRNA转基因克隆动物进行抗病育种的研究提供了保障。

摘要：为建立转基因大豆Roundup RReady2YieldTM(RR2Y)转化体特异性定性PCR检测方法,以lectin基因作为内参照基因,根据RR2Y外源插入片段5’端与植物基因组连接区序列设计特异性引物,从RR2Y中特异性地扩增出223bp的预期产物。对该方法进行重现性、特异性、灵敏度、稳定性和可重复性测试,结果显示:该方法能够特异性检测出RR2Y转化体;将100%RR2Y基因组DNA用A3244基因组DNA进行梯度稀释,以100ngDNA为模板,该方法的检测灵敏度达到0.05%,约为40个起始模板拷贝;以RR2YDNA含量为10%、1%、0.1%的样品为模板,进行稳定性和可重复性,假阴性率为0。结果表明:此方法适用于RR2Y的转化体特异性定性PCR检测。

摘要：利用hiTAIL-PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR)法扩增获得了转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入位点的左旁侧序列450bp,与水稻参考基因组数据比对发现其左边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 765 位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和外源基因右边界序列,设计引物扩增得到485bp的特异片段,通过数据库比对发现其右边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 825 位核苷酸残基之前。因为外源基因插入和非正常重组,水稻基因组上缺失了59个核苷酸。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻BPL9K-2的事件特异性定性PCR检测方法,可以分别扩增到片段大小为449bp和485bp的特异条带。该方法特异性好,灵敏度高,能够在BPL9K-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因成分。依据旁侧序列,建立了快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。这些方法的建立,为转基因水稻BPL9K-2的应用和检测提供了技术支持。

摘要：随着生物技术的迅猛发展,发展转基因产业的战略选择与公众对转基因安全疑虑的矛盾十分突出。通过转基因舆情分析,指出我国转基因风险交流存在的不足主要为风险交流工作缺乏顶层设计,信息公开程度较低,风险交流方式和内容单调,公益机构未能发挥应有作用。在此基础上,提出了加强转基因风险交流的政策建议:(1)明确转基因风险交流的目标;(2)建立转基因风险交流协调框架;(3)建立转基因信息公开平台和信息监测平台;(4)完善管理部门和公益机构的风险交流职能;(5)改革科技项目政策。

摘要：拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑FGF5基因的绒山羊细胞株。在FGF5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物,构建2个编辑FGF5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶(T7E1)检测载体活性,选择活性最高的载体转染细胞,单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。经测序分析共获得20个FGF5基因敲除细胞株(包括FGF5+/-和FGF5-/-),总突变率为14.81%。双敲除突变细胞株可作为供体细胞进行重构胚构建,为创造高产绒性状的FGF5基因编辑绒山羊奠定基础。

摘要：应用锌指核酸酶(Zinc Finger Nuclease,ZFN)和序列同源的供体(Donor)作为模板,借助DNA的同源重组修复机制能够对动物基因组实现精确的遗传修饰。目前关于供体长度与ZFN介导的同源重组修复效率相关性的报道相对较少。本研究构建了一对靶向EGFP的ZFN并鉴定了活性,同时设计了一系列不同长度的供体,应用流式细胞分析术,在稳定整合了带有移码突变的EGFP基因的CHO细胞中系统分析了供体长度对ZFN介导的同源重组修复效率的影响。结果发现当同源臂单臂仅有50 bp时,即可有效支持ZFN介导的同源同组,随着同源臂长度的延伸,同源重组的效率有所提高,但要实现高效率的同源重组(较传统方法提高104倍),同源臂单臂长度需要延长至1 000 bp以上。这为今后如何设计合适的Donor,以提高ZFN等基因组编辑工具介导的同源重组效率提供了借鉴。

摘要：以转赖氨酸基因小鼠为研究对象,根据转入基因的载体结构分别设计赖氨酸基因、新霉素抗性基因、转基因启动子及小鼠基因组内参基因特异性引物,优化反应条件,建立转基因小鼠多重PCR检测方法。结果表明,建立的方法可以用于转赖氨酸基因小鼠的检测,同时为转基因动物检测标准的建立提供试验依据。

摘要：通过均匀设计对大螟人工饲料配方进行了优化,获得的实用饲料优化配方如下:琼脂3g,大豆粉8g,茭白粉11g,酵母16g,蔗糖6g,稻茎粉3g,玉米粉11g,麦芽粉5g,干酪素7g,维生素C 0.8g,山梨酸0.64g,金霉素0.54g,胆固醇0.04g,无机盐1.5g,蒸馏水200g。该配方对大螟已连续饲养超过10个世代,优于以往报道的饲料。该配方饲养的大螟第1代初孵化幼虫发育至蛹的比例(化蛹率87.5%)较原配方(CK,40.8%)提高46.7个百分点。从第1代到第10代的连续饲养过程中,大螟的化蛹率、羽化率、卵孵化率和单雌产卵量等指标没有明显退化趋势,平均分别为42.5%～87.5%、79.7%～95.8%、90.0～94.9%和95～252粒/雌。第10代除雄幼虫历期显著较长外,其余各指标均与第1代无显著差异。

摘要：近年来欧美等主要农产品贸易大国之间由于转基因作物审批不同步引发的农产品贸易问题日益凸显。大量事实表明欧盟于上世纪90年代建立的严格的转基因作物审批制度对其经济产生了较大负面影响。我国与欧盟在农业上具有极为相似的特点,本研究利用文献研究法对欧盟转基因作物审批制度的内容、特点、引发的问题及其经济影响进行了研究分析,并将欧盟与我国转基因作物审批制度的内容及影响因素进行比较,以期能得出对我国转基因作物审批制度改革的启示及具体建议。结果表明:1)安全评估时间较长、商业化审批程序复杂并有一些特殊要求是欧盟审批周期较长的原因,而且受社会经济因素影响,审批的最终结果具有不确定性;2)转基因作物禁止商业化种植使得农民遭受了潜在经济损失,转基因研发企业积极性受到打击并出现大量人才流失;3)转基因作物新品种难以获得进口审批使得欧盟饲料进口量逐年下降,下游的畜牧产业受到冲击,社会总福利每年损失96亿欧元;4)预计未来更多转基因作物新品种将滞留在审批系统中,因转基因成分低水平混杂(LLP)问题引发的贸易摩擦将在更大范围内出现,更多的农户和企业将受到影响;5)欧盟应该通过加快安全评估速度、建立科学的投票表决机制、加强对经济影响的风险评估及其风险交流等措施来提升欧盟审批制度的公平性和效率,进而增进欧盟整体社会福利。建议我国加强转基因作物审批阶段风险管理的科学性、民主性、经济性及社会性,重视并加强与公众的风险交流,适时适量批准转基因作物新品种的进口或商业化。

摘要：从15 000多个水稻转基因株系中发现了一个类病变黄叶突变体。该突变体最显著的特征为叶片由下而上依次黄化,同时出现类似病原体感染的病斑。根据突变体表型,将该突变体命名为syl1(spotted and yellow leaves 1)。遗传学分析表明,该突变性状受1对隐性核基因控制。PCR检测和潮霉素抗性分析显示,该突变表型不是由T-DNA插入引起的。为了克隆该基因,将此突变体和籼稻品种龙特甫杂交获得F2和F3定位群体,利用网上公布的SSR标记首先将突变基因定位在第12染色体短臂端分子标记RM7619附近。随后利用日本晴和9311序列的差异,在该区域新设计了9对InDel分子标记,进一步将syl1基因定位在BAC克隆OSJNBa0002O20内分子标记WL32与WL35之间约102kb的区域。为进一步克隆syl1基因奠定了基础。