摘要：为了构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列,本试验采用RNAi技术,设计并合成了3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建了RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3),将其转染到小鼠C2C12细胞,并用实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot测定细胞中MEF2C基因蛋白的表达。结果表明:重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致。重组质粒转染C2C12细胞后,MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(33.67±2.51)%、(21.00±3.60)%、(71.67±4.04)%。Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(47.33±0.05)%、(38.25±0.16)%、(67.27±0.12)%。本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础。

摘要：为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。

摘要：目的调查锦州市部分社区儿童心理韧性与突发事件应急能力现状,探讨社区儿童心理韧性与突发事件应急能力之间的关系,为儿童安全教育提供参考依据。方法 2013年5—7月,采用分层整群抽样法随机抽取锦州市部分社区四、五、六年级在校学生450例作为调查对象。参考相关文献,自行设计一般资料调查问卷;采用青少年心理韧性量表(包括目标专注、情绪控制、积极认知、家庭支持和人际协助5个维度)评价儿童心理韧性现状,突发事件应急能力问卷评估儿童突发事件应急能力。共发放问卷450份,剔除无效问卷47份,获有效问卷403份,有效率为89.6%。结果不同性别儿童心理韧性总分及各维度得分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同年级儿童心理韧性总分及目标专注、情绪控制、积极认知、家庭支持得分比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同年级儿童人际协助得分比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中四年级人际协助得分分别高于五年级、六年级(t=1.981、1.962,P<0.05)。不同性别、年级儿童突发事件应急能力得分比较,差异无统计学意义(t=-1.140、F=0.595,P=0.542、0.552)。目标专注、积极认知得分与突发事件应急能力得分呈正相关(r=0.142、0.287,P<0.05)。情绪控制、家庭支持、人际协助得分与突发事件应急能力得分呈负相关(r=-0.155、-0.122、-0.108,P<0.05)。积极认知、家庭支持、情绪控制得分与突发事件应急能力得分有回归关系(P<0.05)。结论心理韧性对儿童突发事件应急能力有一定预测作用,良好的心理防御功能对提高儿童突发事件应急能力、减少突发事件对儿童造成的身心伤害发挥着至关重要的作用。