摘要：本文旨在开展新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情背景下医院人工智能(AI)应用的宏观探讨,以期推动我国医院AI应用的顶层设计和快速布局,为健康中国建设提供新路径。COVID-19疫情发生以来,中国以举国之力实施疫情防控阻击战,同步以捐赠物资、派遣医疗队、分享医疗诊治经验和高科技手段等方式开展全球抗疫协作。在抗击COVID-19疫情的过程中,一线医疗工作展示了有关医疗AI应用丰富且宝贵的经验,体现了AI在抗疫前线发挥的突出作用,表明了我国医院AI建设需求的迫切性和战略性。研究提出,应进行宏观层面的综合布局,整体推动医院AI的快速建设以形成新的医疗生态,为我国未来医院建设找准发展方向、奠定关键基础。为此建议,在政府层面做好整体规划和顶层设计,进行干预关口前移以改变被动应对局面;科学进行资源统筹,加强硬件体系建设,完善数据和专业人员保障制度,为防范大规模呼吸道急性传染病构建必要条件。

摘要：目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式,并做灵敏性、特异性试验。结果:荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为1.938,最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论:建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。

摘要：目的：建立呼吸道合胞病毒（RSV）核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，并对临床样本进行检测。方法：比对编码RSV非编码蛋白的基因序列，选取其保守片段设计引物和探针，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，并与传统RT-PCR方法进行比较，分别对两者的灵敏性、特异性、重复性及临床样本检验的适用性进行评价。结果：所建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于RSV的特异性检测。相对于传统RT-PCR方法100拷贝，反应的检测灵敏度，实时荧光定量RT-PCR的检测灵敏度达到10拷贝／反应，检测范围为1010-101拷贝／反应，且具有良好的特异性和重复性。从169份临床呼吸道标本中检出RSV阳性40例，高于普通PCR方法（31／169）。结论：建立了RSV的TaqMan探针实时定量PCR检测方法，并可用于临床鼻咽拭子样本的检测，在临床上具有较好的应用前景。

摘要：目的 建立应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测蓝氏贾第鞭毛虫的方法. 方法 体外培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,提取DNA.根据GenBank显示的贾第虫序列及环介导等温扩增技术的原理,设计4条贾第虫特异引物,利用LAMP检测蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以隐孢子虫卵囊DNA、疟原虫DNA为对照,并将不含病原体DNA的纯水作为阴性对照.LAMP产物经SYBR green I显色后观察结果,绿色为阳性,棕色为阴性;对LAMP产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察其特征条带的情况. 结果 蓝氏贾第鞭毛虫DNA检测管经显色后呈绿色,隐孢子虫卵囊DNA、疟原虫DNA及水阴性对照管呈棕色.含有蓝氏贾第鞭毛虫DNA的LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,安氏隐孢子虫DNA、恶性疟原虫DNA及阴性对照水无扩增产物. 结论 成功建立了检测蓝氏贾第鞭毛虫的LAMP方法.

摘要：目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒(HCV)的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。

摘要：目的:建立人博卡病毒(HBoV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并对临床样本进行检测。方法:比对编码HBoV非结构蛋白NP-1的基因序列,选取其保守片段设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与传统PCR方法进行比较,然后分别对两者的灵敏性、特异性、稳定性及临床样本检验的适用性等进行评价。结果:所建立的实时定量PCR检测方法可用于HBoV的特异性检测;相对于传统PCR所达到的250拷贝/反应的检测灵敏度,实时定量PCR的检测灵敏度可高达10拷贝/反应,检测范围为109～101拷贝/反应,且具有良好的特异性和重复性;初步用于76份临床呼吸道标本检测,检出阳性5例,高于普通PCR方法(3/76)。结论:建立了HBoV TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并可用于临床鼻咽拭子样本的检测,为开展HBoV流行病学监测及早期临床诊断提供了技术手段。

摘要：目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链结合。在Phi29DNA聚合酶的作用下,获得线性多拷贝cccDNA扩增产物,以该产物为模板获得cccDNA全序列;通过对模板的系列稀释鉴定RCA方法的灵敏度;以RCA产物为模板扩增肝组织cccDNA的反转录酶区基因,并与同时扩增的同时间采集的同一患者血清中的rcDNA序列进行比较。结果成功建立了HBVcccDNA全序列的RCA方法,最低可检测到10个拷贝的cccDNA分子,并获得了所有扩增cccDNA的全基因序列。27例患者中,18例患者的肝组织cccDNA和血清rcDNA反转录酶区的序列完全一致,9例患者中共检出84个不同的核苷酸位点,平均每个患者9.3个,84个不同核苷酸中只有5个引起了氨基酸的改变。结论滚环扩增方法对肝组织HBVcccDNA的检测具有较好的灵敏度。该方法的建立对深入了解cccDNA在HBV致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效有重要意义。

摘要：目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白CKS-4EP;将合成的4E10表位多肽通过Sulfo-SMCC连接至P64K载体蛋白构建结合型免疫原PKEP。用SDS-PAGE电泳的方法检测各种免疫原的分子质量和纯度。用假病毒中和试验评价豚鼠体内中和抗体水平。结果蛋白电泳显示所有免疫原的分子量大小正确,纯度在95%以上。GST-3EP能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体,3次免疫后5只豚鼠4只阳转,阳转的豚鼠中2只中和抗体水平IC50>200,另外两只抗体水平在100左右。对各组血清50倍稀释后中和抑制率进行统计分析,3EP组与佐剂对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的融合蛋白GST-3EP 3次免疫后能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体。

摘要：目的:基于TaqMan-MGB探针的荧光定量PCR技术,研发出一种定量检测食品污染物中空肠弯曲菌的方法,为食品污染物调查提供快速、可靠的监测工具。方法:根据TaqMan-MGB探针原理,在空肠弯曲菌基因组保守区设计引物和探针,探针的5′端用FAM荧光标记,3′端标记MGB,建立基于TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法。并对其特异性、灵敏度、重复性进行评价,然后对收集的市场食品污染物调查样本进行检测,与常规方法做对照。结果:所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测空肠弯曲菌,最低检测限为10 cfu/ml;对50例市场污染物调查样本进行评价,结果显示6份食品污染物调查样本中空肠弯曲菌为阳性,其余为阴性,结果与常规培养检测结果一致。结论:空肠弯曲菌TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有结果可靠、操作简便等优势,比目前常规检测方法更灵敏,该方法可用于食物污染物调查、临床检验等多个方面。

摘要：目的回顾性研究广西8市2010—2018年HIV抗体阳性母亲使用预防艾滋病母婴传播(prevention of mother-to-child transmission of HIV,PMTCT)的抗逆转录病毒药物后对18月龄幼儿身体发育不良的影响,为国家改进PMTCT的用药方案提供依据。方法选取广西8市作为研究现场,按照回顾性病例对照研究设计,病例组为广西8市2010年1月—2018年12月"全国母婴阻断系统数据库"中使用PMTCT药物的HIV抗体阳性母亲及所分娩婴儿,收集分析其使用PMTCT药物的历史卡片和母婴阻断资料及18月龄幼儿体检资料。对照组为相同8市妇幼保健院2018年健康母亲及所分娩婴儿,收集分析其18月龄幼儿体检资料。幼儿身体发育不良定义为身高、体重和头围3项指标中至少1项指标低于正常值范围。结果病例组的HIV抗体阳性母亲及所分娩婴儿使用PMTCT药物率分别为91.38%(2811/3076)和96.41(2954/3064),病例组18月龄幼儿的HIV抗体阳性率为1.21%(37/3064)、死亡率为2.28%(70/3064)、HIV母婴传播率为2.21%。病例组满18月龄健康体检时发现幼儿身体发育不良率为14.57%(301/2066);对照组满18月龄幼儿身体发育不良率为10.39%(563/5419),病例组与对照组差异有统计学意义(P=0.000)。结论广西8市近9年HIV抗体阳性母亲及所分娩婴儿使用PMTCT药物率高,可能导致满18月龄幼儿身体发育不良率较高,应进一步深入研究影响因素。