摘要：茚并异喹啉是一类具有抗肿瘤活性的化合物,这类化合物可以克服喜树碱类拓扑异构酶Ⅰ(topoisomerase I,Top1)抑制剂的缺陷,获得活性更加稳定、毒性更小的抗肿瘤化合物。近来发现茚并异喹啉类化合物还具有Top1和酪氨酸-DNA磷酸二酯酶(tyrosyl-DNA phosphodiesterase I,Tdp1)双重抑制作用和潜在的肿瘤预防作用。本文简要介绍了Top1抑制剂的作用机制和茚并异喹啉类的作用优势,重点综述了近年来出现的一些茚并异喹啉酮类化合物的构效关系及研究成果。

摘要：随着生物技术药物研发的增加,使用非人灵长类动物进行发育和生殖毒性研究已越来越普遍。食蟹猴是发育和生殖毒性研究最理想的非人灵长类动物模型,这一种属在生殖和内分泌方面与人类十分类似。本文介绍了非人灵长类在发育毒性(胚胎-胎仔发育,围产期发育)和生殖毒性(雌性和雄性)研究中的应用,为灵长类发育和生殖毒性实验设计的优化提供参考。

摘要：目的:华蟾素注射液作为一种传统中药注射剂,已在临床使用40多年,已有临床报道显示其可能诱导心血管不良反应。故而本实验的目的为评价华蟾素注射液心脏毒性。方法:本实验为通过SpragueDawley(SD)大鼠连续2周静脉注射给予华蟾素注射液,探索华蟾素注射液对心脏的毒性作用。本实验初次设3个组,包括溶剂对照组(0 g·kg^-1,0.9%氯化钠注射液)和华蟾素注射液组(剂量分别为1和5 g·kg^-1),给药容量为10 mL·kg^-1。实验每组10只动物,雌雄各半。补充设计SD大鼠连续1周静脉注射给予华蟾素注射液。设2个组,包括溶剂对照组(0 g·kg-1,0.9%氯化钠注射液)和华蟾素注射液组(剂量为10g·kg^-1),给药容量为20 mL·kg^-1。实验每组10只动物,雌雄各半。实验期间评估以下指标:死亡或濒死、临床征状、心肌损伤指标[心肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTn-I)、肌酸磷化脢-同功脢MB(creatine kinaseisoenzymes MB,CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]、大体解剖、脏器重量以及组织病理学检查。结果:实验期间,各剂量组动物均未见死亡或濒死。1,5和10 g·kg^-1组雌雄动物临床征状、脏器重量、心肌损伤指标(CK-MB,AST,LDH,CRP)大体解剖以及组织病理学检查均未见与受试物相关的改变异常。与溶剂对照组相比,仅5和10 g·kg^-1组cTn-I出现与受试物相关的异常改变,cTn-I在给药后1.5和/或3 h升高,且至24 h已经基本恢复。结论:本实验结果证实了华蟾素注射液具有心脏毒性,其次为临床上监测华蟾素注射液的心脏毒性提供了可参考的监测时间点和监测生物标志物。

摘要：目的设计并合成用于检测乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的双光子荧光探针,并考察探针对ACh E的成像检测性能。方法经酯化、取代等多步有机反应合成探针,并通过^(1)H-NMR、^(13)C-NMR和ESI-MS确认结构。考察探针与ACh E发生响应后的荧光信噪比、灵敏度、特异性、酶动力学和双关子吸收截面积数值等指标;研究探针可否用于ACh E抑制剂的体外筛选;利用单-双光子成像试验考察探针在细胞和组织水平上对ACh E活力变化的检测能力。结果通过^(1)H-NMR、^(13)C-NMR和ESI-MS确认了产物的结构。体外试验表明探针与ACh E响应后的荧光信噪比为15倍,检测限达到0.23 U·mL^(-1),并具有很强的特异性和优良的酶亲合能力,在波长820 nm有最优的双光子吸收;探针可用于AChE抑制剂的体外筛选;探针通过单-双光子成像技术可对细胞和组织水平上的ACh E活力变化进行成像检测,并且组织成像检测深度可达110μm。结论本研究成功开发了可用于AChE检测的双光子荧光探针,有潜力成为可用于活体中检测AChE活力的双光子成像试剂。

摘要：构建CC型趋化因子受体5(CCR5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默CCR5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测CCR5的基因表达,选择CCR5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人CCR5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shCCR5-1和shCCR5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测CCR5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默CCR5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默CCR5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。

摘要：目的:采用星点设计-效应面法优化丹酚酸缓释微丸的处方。方法:以3,4,6 h的累积释放度为考察指标,以HPMC K4M,PVP K30的用量和乙醇浓度为考察因素,采用多元线性模型和二次多项式模型描述考察指标和考察因素之间的数学关系,根据最佳模型绘制等高线图和效应面图,选择最佳处方。按照最佳处方制备丹酚酸微丸,验证处方。结果:二次多项式为拟合的最佳模型,最佳处方微丸3,4,6 h的累积释放度为16.09%,67.56%,78.85%,满足设计要求;实测值与预测值接近,偏差均小于8%。结论:采用星点设计-效应面法很好地优化了丹酚酸缓释微丸的处方,所得最佳处方能够达到实验设计的要求。

摘要：利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM)Lucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800~20.81 ng·mL^(-1),靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10^(4)和2.5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%、(82.44±5.15)%、(110.69±11.71)%、(129.23±5.22)%和(162.15±3.66)%;回收率在103%~120%,RSD均小于11%,线性检测范围为50%~150%。本研究利用DoE设计成功筛选、优化和建立基于报告基因的抗CD38单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗CD38单抗ADCP生物学活性的评价方法。

摘要：目的建立具有高灵敏度和高选择性测定人血浆中沙格雷酯药物浓度的液相色谱-串联质谱检测方法,并将其应用于盐酸沙格雷酯片的人体生物等效性研究。方法血浆样品经乙腈沉淀,采用C_(18)色谱柱,在多反应监测正离子模式下,以电喷雾离子源作为电离技术扫描分析,离子通道分别为:沙格雷酯m/z 430.200→135.100,沙格雷酯-d3 m/z 433.200→138.200。采用单中心、开放、随机、单次口服、两序列、四周期、全重复试验设计,中国健康受试者分别空腹和餐后口服单剂量100 mg盐酸沙格雷酯片受试制剂及参比制剂后于不同的时间点采集血样,利用所建立的方法进行检测分析,计算2种制剂的药动学参数并进行统计分析。结果血浆中沙格雷酯线性范围为1~1000 ng·mL^(-1),定量下限为1 ng·mL^(-1),回收率在94.2%~96.2%内,批间批内精密度RSD均小于10%,内标沙格雷酯-d3的平均提取回收率为95.6%。在稳定性试验中的各种储存条件下沙格雷酯及内标沙格雷酯-d3的稳定性均良好。药动学结果显示,空腹和餐后状态下沙格雷酯受试制剂和参比制剂均具有生物等效性。高脂饮食可使沙格雷酯在体内的t_(max)延长和ρ_(max)降低。结论所建立的方法操作简单快捷,重复性好,特异性强,灵敏度高,可用于沙格雷酯的药动学研究与血药浓度监测;空腹和餐后状态下两制剂生物等效,高脂饮食可影响沙格雷酯在体内的药动学特征。

摘要：本研究以肿瘤免疫治疗相关蛋白吲哚胺2,3-双加氧酶1 (indoleamine 2,3-dioxygenase 1, IDO1)为靶点,提出并设计构建了基于酶学-细胞水平的IDO1抑制剂筛选模型并进行了体内验证。首先采用基因工程手段表达纯化重组人IDO1蛋白并建立简单高效的IDO酶学筛选体系;其次通过干扰素γ(interferon-γ, IFNγ)刺激A172细胞或者构建高表达人IDO1蛋白的质粒瞬时转染HEK293细胞构建特异性的IDO1细胞水平筛选体系;最后在C57小鼠通过LC/MS/MS方法检测小鼠血浆中犬尿氨酸和色氨酸的含量和比值,从体内进一步验证筛选得到的化合物对IDO酶的抑制作用。本研究中建立和优化的酶学、细胞水平的筛选模型再结合体内的验证方法能高效、通量、特异性筛选到真正体内有效的IDO1抑制剂,为新药的快速研发奠定了良好的基础。动物实验均严格遵循中国医学科学院药物研究所动物实验中心标准操作规程,尽量减少实验对动物造成的伤害。

摘要：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactic acid-glycolic acid,PLGA)微球体系在肺部缓控释递药系统中具有独特优势。然而,肺巨噬细胞的吞噬清除极大地限制了药物在肺深部的长期滞留。为规避肺巨噬细胞清除作用,本文设计了一种经聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(polyethylene glycol-distearoyl-glycero-phosphoethanolamine,PEG-DSPE)包裹的PLGA微球,并探究了PEG-DSPE链长及比例对巨噬细胞摄取的影响。以香豆素-6为荧光探针,经膜乳化联合溶剂挥发法制备了各PLGA微球制剂,粒径控制为3~5μm、包封产率大于90%。在细胞液中孵育48 h后,荧光素体外泄漏量低于1.5%,排除了游离荧光素对细胞摄取的干扰。选用鼠源性巨噬细胞RAW264.7进行体外细胞实验。细胞毒性实验表明各制剂对细胞均无毒性。细胞摄取实验结果显示,与未包裹制剂相比,高低比例(PEG-DSPE/PLGA 1∶1、0.25∶1) PEG5000-DSPE、PEG10000-DSPE包裹均可显著减弱巨噬细胞对粒子的吞噬作用。对于PEG2000-DSPE包裹微球,可通过增加PEG在粒子表面的比例达到逃逸巨噬细胞吞噬的效果。综上,PEG-DSPE链长及比例是影响巨噬细胞摄取的关键因素,在肺部缓控释递药系统中,可通过选用高分子量PEG-DSPE (PEG5000-DSPE、PEG10000-DSPE)或高比例(PEG-DSPE/PLGA 1∶1)的PEG2000-DSPE包裹微球,达到逃逸肺巨噬细胞吞噬、延长药物肺内滞留的效果。