摘要：目的肿瘤的发生、发展和侵袭转移是影响结肠癌治疗的重要原因,有研究发现DNA甲基化状态在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,抑制T-cadherin表达可增强肿瘤细胞侵袭和迁移能力。本研究探讨siRNA敲减DNA甲基转移酶1(DNA methyl transferase 1,DNMT1)基因表达对结肠癌细胞T-cadherin基因甲基化及细胞生物学行为影响。方法设计针对DNMT1的siRNA1、siRNA2和siRNA3重组质粒,分别转染HT-29、SW620和HCT116细胞系,采用实时荧光定量PCR检测DNMT1表达,以筛选敲减效率最高的DNMT1siRNA和细胞系。用敲减效率最高的DNMT1siRNA转染相应细胞系,采用甲基化特异性PCR检测T-cadherin甲基化水平,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测T-cadherin表达。用敲减效率最高的DNMT1siRNA转染相应细胞系,采用噻唑蓝比色法、流式细胞术、Transwell和细胞划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,观察敲减DNMT1对细胞生物学行为的影响;同时设置T-cadherin shRNA重组质粒转染组,观察同时敲减DNMT1和T-cadherin对细胞生物学行为的影响。结果 DNMT1siRNA1重组质粒对HT-29细胞系DNMT1的敲减效果最好。DNMT1siRNA1转染HT-29细胞后,DNMT1组T-cadherin基因甲基化水平明显低于空质粒组和空白组,DNMT1组与空质粒组(F=314.182)和空白组(F=283.625)差异有统计学意义,均P0.05。结论 DNMT1siRNA1可有效敲减HT-29细胞DNMT1表达,逆转T-cadherin高甲基化状态并上调其表达。敲减DNMT1可明显抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力;而同时敲减T-cadherin能够逆转此种现象,说明敲减DNMT1引起的细胞生物学行为改变可能是通过T-cadherin来实现的。

摘要：目的了解重庆市呼吸专业医生的吸烟状况、烟草危害认知情况、控烟知识及技能的掌握情况、辅助戒烟服务态度及帮助吸烟者戒烟情况，为更有效地发挥其在控烟工作中作用提出建议。方法2012年3月采用自行设计的问卷，对分层随机抽样选出的重庆市8家医院全体呼吸专业医生进行调查，采用Epidata3．1软件建立数据库，SPSS13．0软件包分析数据。结果共发放并回收问卷450份，其中有效问卷428份，有效回收率95．1％。呼吸专业医生总吸烟率为12．4％（95％CI：9．3％～15．5％），其中直属教学医院、主城九区医院、区县医院吸烟率分别为7．4％（7／94）、8．1％（13／160）和19．0％（33／174），差异有统计学意义（）（。=11．734，P=0．003）；男性吸烟率远高于女性。呼吸专业医生对烟草依赖是一种神经精神性疾病的知晓率为80．1％，34．8％的受访者对戒烟药物完全不了解。所有受访者均知道二手烟危害，但仍有16．4％对院内吸烟行为从不上前劝阻；会主动劝阻吸烟行为的医生中53．9％是因服从医院规定，仅27．4％是因不愿吸人二手烟。医师对患者吸烟史的询问及记录情况相对较好，但仅有27．1％的受访者曾向患者推荐具体的戒烟方法，而成功帮助患者戒烟的例数较少；主城九区医院和区县医院呼吸专业医生帮助患者戒烟的情况反较直属教学医院好。结论重庆市呼吸专业医生（特别是男性医生）的吸烟率较高，主动劝阻公共场所吸烟行为的积极性不足；对控烟相关知识及技能的掌握较差，需加强控烟培训；基层呼吸专业医生有其特定的控烟优势．府得到雷视与发挥.

摘要：目的:探讨下颌骨骨折行坚固内固定术后与感染相关的危险因素。方法:设计病例对照研究,收集我院2009年1月—2015年12月期间下颌骨骨折坚固内固定手术患者447例,其中出现术后感染的病例为26例(实验组)。从每例发生术后感染的患者入院前2周内,随机选取1例下颌骨骨折坚强内固定术后无任何并发症的患者纳入对照组,共26例。收集整理相关的变量数据,采用SAS9.2软件包在2组间行二变量和多因素Logistic回归分析,确定与术后感染相关的因素。结果:回归分析结果显示,增长的下颌骨骨折严重程度评分(OR=2.509,95% CI为1.083~5.814)以及患者欠佳的全身健康状态(OR=5.019,95% CI为1.294~19.472)是导致术后感染的相关危险因素。在二变量检验中,抗生素使用天数与术后感染具有相关性(P<0.05)。结论:骨折的严重程度和患者欠佳的身体健康状态是下颌骨骨折术后感染的危险因素。

摘要：目的研究简化调强放疗技术在原发性肝癌放射治疗中的剂量学与临床应用特点。方法招募15例局灶性原发性肝癌患者为研究对象,分别以3野适形放疗(3DCRT)、3野普通调强(IMRT)和3野简化调强(sIMRT)制定放疗计划,利用剂量体积直方图(DVH)比较3种计划的适形度指数(CI)、不均匀度指数(HI)、机器总跳数、相关正常肝组织的受照平均剂量,以及肝脏体积(V5、V20、V30)所包含的正常肝组织。结果 (1)3野sIMRT的CI和HI近似于IMRT,显著优于3DCRT(IMRT=sIMRT>3DCRT);(2)sIMRT相对于普通IMRT在治疗机器跳数、子野数方面明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)sIMRT中正常肝平均剂量及不同剂量水平卷入射野体积低于IMRT,高于3DCRT,但差异无统计学意义(P=0.33)。结论简化调强放疗技术在原发性肝癌放射治疗中具有子野及治疗机器跳数少,正常肝组织的受照体积与剂量小,靶区剂量高等优势,可作为原发性肝癌放疗计划设计的一种重要方式。

摘要：背景:双向凝胶电泳是目前最好的蛋白质分离方法,然而胆汁样品中的盐、脂和蛋白酶对双向凝胶电泳干扰较大,影响电泳图谱的重复性。目的:通过对胆汁样品双向凝胶电泳的几个关键环节的分析,建立起一种适合于有效分离胆汁蛋白质的双向凝胶电泳分离方法。设计、时间及地点:胆汁双向凝胶电泳图谱对照实验,于2008-03/11在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:胆汁标本取自于重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,于肝移植过程中从供体中取得。方法:将标本分别按3种不同方法进行处理:①2D-Clean-up试剂盒处理胆汁标本:用裂解液,7mol/L尿素,2mol/L硫脲,质量浓度为0.4g/L的过硫酸铵,65mmol/L二硫苏糖醇,质量浓度为0.2g/L的载体两性电解质溶解沉淀过夜。②在胆汁标本中加入4倍体积的预冷丙酮,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。③在胆汁标本中加入4倍体积的预冷三氯乙酸/丙酮混合液,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。经过一维等电聚焦和二维SDS-PAGE电泳分离人胆汁蛋白质组。将切取的蛋白质点进行脱色,酶解,萃取,冷冻抽干后,进行质谱鉴定。主要观察指标:胆汁双向电泳图谱上蛋白质点数目,位置及重复性的比较。结果:3种方法均能得到理想的一向电泳等电聚焦,与单纯的丙酮沉淀法相比较,但三氯乙酸/丙酮沉淀法损失了较多的中小分子量的蛋白质,因此不适合于胆汁标本的处理。与2D-Cleanup试剂盒处理法相比,丙酮沉淀法纯化胆汁内盐、脂较丰富,去除干扰成分,具有较好的效果,具有成本低廉、操作简便等优势。结论:通过优化胆汁蛋白质提取、上样量和双向电泳重复性检测等步骤,建立了人胆汁双向凝胶电泳的方法,丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合是获取人胆汁蛋白质组的一种有效方法。

摘要：背景与目的:肺癌细胞的多药耐药(multi-drugresistance,MDR)是药物治疗失败的重要原因,但其机制尚未完全清楚。我们已经通过SSH发现了1条新的耐药相关基因片段,经检索GenBank,发现其与2001年4月公布的一条新的基因序列BC006151同源性高达99%。本研究旨在克隆该基因的全长,并检验该基因在几种肺癌细胞株中的表达,为进一步研究其功能和调控奠定基础。方法:根据BC006151基因序列设计引物,通过RT-PCR证实肺腺癌MDR细胞SPC-A-1/cDDP确实包含BC006151基因后,扩增该基因全长cDNA,通过测序对所得序列进行分析,并对其编码蛋白的氨基酸序列进行预测。应用半定量RT-PCR方法检验小细胞肺癌SH77、大细胞肺癌H460、肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1/cDDP等细胞株中该基因mRNA的表达。结果:成功克隆了BC006151基因的全长cDNA片段,长1298bp,它具有完整的阅读框和编码区,并与经SSH获得的片段有极高的同源性。该基因在MDR细胞株SPC-A-1/cDDP的表达明显高于其亲代细胞株;SPC-A-1表达高于H460,SH77未见表达。结论:BC006151基因是与cDDP致肺腺癌MDR密切相关的一条新基因。该基因全长cDNA片段的克隆将有助于阐明其在肺癌MDR发生中的作用。

摘要：采用合适的裂解液和沉淀方法,提取胆管癌胆汁中的蛋白质,获得分辨率高、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。通过不同裂解液和蛋白质沉淀方法提取胆汁蛋白的效果比较,设计了不同的样品制备方法,并且对双向电泳(2-DE)的条件进行优化。结果显示,试验确定了适合胆管癌胆汁的裂解液配方(LSⅣ),丙酮沉淀的蛋白分布完整,沉淀效率相对较高。高伏时、长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。因此,本方法可以应用到胆管癌胆汁蛋白的提取,也可以对其他体液蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴。

摘要：目的对两种常温流动根充封闭剂(硅酸钙基-iRoot SP、硅氧烷基-GuttaFlow2)结合单尖充填技术以及常用封闭剂(AH Plus)结合连续波热牙胶充填技术的短期临床效果进行评价。方法将279颗患牙(656个根管)随机分为3组,分别为iRoot SP组、GuttaFlow2组以及AH Plus组。记录每个根管的充填时间,拍数字化牙片评估每个根管的充填效果,并于术后1周及1月进行回访,记录患者的疼痛发生率。SPSS18.0对以上数据行统计学分析。结果3组的根管充填效果均无统计学差异(P>0.05);iRoot SP组与GuttaFlow2组的充填时间无显著差异(P>0.05),较AH Plus组明显缩短(P0.05),iRoot SP组与GuttaFlow2组均较AH Plus组疼痛发生率较低(P<0.05)。结论GuttaFlow2和iRoot SP配合单尖充填技术较常用热牙胶充填技术节省填充时间,且能获得良好的临床效果,术后疼痛发生率较低。

摘要：为控制室内游泳池水和空气中三氯甲烷的产生,采用单因素试验分析p H值、温度和搅动速率等因素对三氯甲烷浓度的影响;并以淡水枝角水蚤和赤子爱胜蚓作为受试生物进行生物毒性试验,探讨了两种生物对室内游泳池水和空气中三氯甲烷的指示作用。结果表明,游泳池水中三氯甲烷浓度与p H值呈正相关,当p H值>7.5时,其生成量随p H值升高呈倍增长;当温度>25℃时,升高温度或增强水体搅动,均能促进三氯甲烷从液相至气相的传质过程;水中三氯甲烷浓度对淡水枝角水蚤24 h的LC_(50)为38.5μg/L,LC100为147.8μg/L;空气中三氯甲烷浓度>530μg/m^3时蚯蚓开始逃逸,>3 000μg/m^3时蚯蚓表现出完全的回避反应。故室内游泳池水p H值不宜超过7.5,夏季及人流量多时应注意通风。

摘要：目的研究放射疗法对乳牙硬组织结构的影响。方法随机选取40个健康且新鲜拔除的滞留乳磨牙,沿近远中方向将牙齿切成颊舌两半,选择40个半切片用于实验。实验采用自身对照原则,照射之前采用显微硬度计对牙釉质进行初始硬度测试。之后分次完成40 Gy照射,2 Gy/次,1次/d,5 d/周,连续4周。每照射10 Gy后,采用显微硬度计对实验标本进行阶段硬度测试,所有照射剂量完成后采用显微硬度计观察乳牙牙釉质的显微硬度,扫描电子显微镜观察微观形态的变化。结果乳牙牙釉质的显微硬度随着照射剂量的增加而降低。扫描电子显微镜观察结果显示:照射过的牙釉质比未经过照射的牙釉质在所有位置上都表现出明显的微观表面形态改变。随着照射剂量的增加,表面形态发生渐进性破坏,表现为非晶体外观。结论随着照射剂量的增加,乳牙硬组织显微硬度降低,牙釉质的表面形态发生渐进破坏。