摘要：目的设计并筛选针对大鼠Smad3基因的siRNA,构建靶向Smad3基因的shRNA重组慢病毒。方法针对大鼠Smad3基因设计并合成6对siRNA(siRNA001～006)及1对无关对照siRNA,转染大鼠肝细胞株BRL-3A,应用Western Blot检测各siRNA对SMAD3蛋白表达的抑制作用,挑选抑制效率高的siRNA。依据所得的序列合成并克隆到pLL3.7载体中,与包装质粒pRSV-rev、pMDLg-pRRE和VSV-G共转染293FT细胞获得靶向Smad3的慢病毒。通过流式细胞仪绿色荧光蛋白(GFP)荧光计数来检测病毒滴度。结果 Western Blot检测证实siRNA001、siRNA005、siRNA006对SMAD3蛋白表达的抑制作用明显,抑制率分别可达83.36%、86.99%及64.88%,而对照siRNA无明显作用。酶切和测序结果显示Smad3 shRNA及对照shRNA重组载体质粒pLL3.7-shRNA构建成功,将构建的质粒进行慢病毒包装可产生有感染活性的慢病毒颗粒。结论筛选出针对大鼠Smad3基因有明显抑制作用的3对siRNA,并成功构建表达相应shRNA的4种重组慢病毒,为研究调控Smad3的表达对肝再生或肝纤维化的影响提供了实验条件。

摘要：目的亚低温治疗作为一种辅助治疗手段,可使重型颅脑创伤病死率下降,促进其神经功能恢复并改善预后。本文设计了一种可实现局部亚低温控制的外围电路实验装置。方法该实验装置包括单片机控制系统、人机交互界面、输液泵、双腔导管和传感器。传感器监测目标位置的温度变化,单片机系统控制输液泵驱动冷却液,在导管的热交换头处进行热交换,以实现并维持目标位置的亚低温状态。结果设计并实现了局部亚低温控制的外围电路实验装置,实验结果显示可以较快的速率实现降温效果,并通过自动控制实验装置的冷却液速率来实现亚低温的保持。结论该实验装置可为局部定点亚低温控制技术提供研究基础。