摘要：目的研究小干扰RNA(siRNAs)表达载体沉默RAB5A基因的位置效应,寻找沉默RAB5A基因的最佳作用靶点。方法利用MFold软件分析RAB5A mRNA的二级结构,构建针对RAB5A mRNA不同位点的siRNAs表达载体,转染Anip973细胞后,通过RT-PCR和Western-blot方法评价siRNAs对RAB5A基因表达的抑制作用。结果针对RAB5A mRNA编码区内最可及位点设计的siRNAs分别抑制72％和85％的RAB5A基因表达,而针对最不可及位点设计的siRNAs则完全没有活性;非编码区内也存在沉默RAB5A基因的siRNAs有效作用靶点;siRNAs分子与RAB5A mRNA靶序列之间引入2个错配碱基时,siRNAs的抑制活性完全丧失。结论MFold软件分析的RAB5A mRNA二级结构可以作为分析和寻找可及位点的依据,siRNAs的作用效率与RAB5A mRNA靶位点的可及性密切相关。