摘要：为研究不同环境中的野牡丹是否为同一生态型,分析海南野牡丹的种间关系。本研究建立、优化了海南省野牡丹属植物DNA提取条件,利用DX8Trial软件分别对CTAB浓度、PVP浓度、β-巯基乙醇浓度、醋酸钠用量等因素进行改良设计。结果表明,最佳提取条件为:2%CTAB、2%PVP、1%β-巯基乙醇、5 mol/L醋酸钠90μL;同时,采用该条件提取野牡丹属其它植物DNA,结果 DNA纯度较高,条带清晰,提取效果好。最终该提取条件适用于海南产野牡丹属植物DNA的提取,为该属植物遗传多样性研究及分子生物学研究提供依据。

摘要：为了进一步探讨TET2蛋白在肝癌的发生发展过程中发挥的生物学功能,本研究使用CRISPR在线设计工具（http：//***/）,针对TET2的外显子设计g RNA,构建靶向TET2基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,转染HepG2细胞。T7E1酶切检测TET2基因的编辑效率,Western blotting检测TET2蛋白表达水平;MTT法、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒分别检测HepG2细胞的增殖活性及凋亡水平的改变。T7EI酶切分析显示敲除效率为31.4%;TET2基因表达量的降低抑制了HepG2细胞的增殖,促进了细胞的凋亡。CRISPR/Cas9质粒系统能够在细胞水平对TET2基因进行编辑,靶向TET2基因的CRISPR/Cas9质粒系统降低了TET2的表达、抑制HepG2细胞的增殖、促进HepG2细胞的凋亡。本研究表明CRISPR/Cas9技术为研究TET2的功能和作用机制提供了有效工具,为研究TET2蛋白在肝癌的发生发展过程中发挥的生物学功能提供实验依据。