摘要：目的 基于Cre/Loxp系统构建CX3CR1^(GFP)基因小鼠,并分析CX3CR1^(GFP)表达效率。方法 通过以限制酶为基础的克隆技术设计靶向载体,用线性化的靶向载体转染胚胎干细胞(embryonic stem,ES),将筛出缺失新霉素抗性基因(neomycin resistance gene,neo)的重组ES细胞克隆注入囊胚中产生嵌合CX3CR1^(+/GFP)小鼠,与野生型小鼠(wild type mice,WT)交配,反复回交得到CX3CR1^(GFP/GFP)小鼠。分别提取WT和CX3CR1^(GFP)小鼠DNA及mRNA,使用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型,RT-qPCR检测小鼠不同组织中CX3CR1的表达水平;Western blot分析GFP蛋白对外周血中的单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)及不同组织中CX3CR1的表达;流式细胞术检测骨髓中免疫细胞的标记效率;免疫荧光观察小鼠不同组织中GFP的表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳结果表明,转基因小鼠基因型为CX3CR1^(GFP/GFP)纯合子。RT-qPCR和Western blot结果表明,增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)已靶向取代CX3CR1基因,因此在CX3CR1^(GFP)小鼠中CX3CR1表达极低,而GFP表达明显上调;流式细胞术和免疫荧光显示,GFP有效标记CX3CR1^(GFP)小鼠,在不同组织及不同细胞均有表达且表达具有差异。结论 本研究构建并鉴定CX3CR1^(GFP)基因报告小鼠,且GFP在小鼠体内稳定表达。为进一步揭示CX3CR1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。