摘要：根据雷公藤悬浮细胞转录组数据设计引物,克隆得到雷公藤鲨烯合酶基因Tw SQS全长c DNA(Gen Bank:KR401220),并对其进行生物信息学分析和诱导表达分析。TwSQS cDNA全长为1 800 bp,开放阅读框为1 242 bp,编码413个氨基酸,编码的蛋白理论等电点为7.94,相对分子质量为47.20 kD。雷公藤悬浮细胞经茉莉酸甲酯(MJ)诱导后,荧光定量PCR表明TwSQS相对表达量明显上升,并于诱导后4 h达到最高。本研究首次克隆得到雷公藤SQS基因,为进一步解析雷公藤三萜类成分生物合成途径奠定基础。

摘要：根据雷公藤转录组数据提供的基因片段设计特异引物,采用全长PCR方法克隆Tw MCT全长cDNA,分析序列同源性,预测TwMCT蛋白结构,并进行序列多重比对和构建系统进化树分析;采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）,以actin为内参,分析雷公藤悬浮细胞受茉莉酸甲酯（MeJA）诱导后0~72 hTwMCT基因的相对表达量。克隆得到全长1 318 bp TwMCT全长c DNA,具有完整编码框,编码311个氨基酸,蛋白相对分子质量为34.14 kDa,理论等电点为8.65;RT-qPCR结果表明该基因受MeJA诱导后表达逐渐上升,在24 h时达到最高值。克隆雷公藤TwMCT全长cDNA和分析表达特性,为进一步研究该基因的功能和雷公藤次生代谢调控提供了基因元件。

摘要：研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据库设计引物,对雷公藤悬浮细胞乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase)基因Tw AACT进行全长c DNA(Gene Bank:KP297934)克隆以及生物信息学分析和基因表达分析。克隆得到Tw AACT c DNA全长为1 704 bp,编码405个氨基酸,等电点为6.10,相对分子质量为41.20 k Da,在线预测表明Tw AACT具有2个催化活性位点。雷公藤悬浮细胞经茉莉酸甲酯(Me JA)外源诱导后,通过荧光定量PCR表明,Tw AACT相对表达量明显增加,在24 h达到最高。研究首次克隆得到雷公藤AACT基因,为进一步阐述雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。