摘要：目的构建并表达抗人红细胞血型A抗原单链小分子抗体(single-chainFv)蛋白。方法设计合成抗重、轻链可变区引物,通过重叠延伸拼接PCR技术,在50AmAbV和VL基因间引入连结短肽,体外构建50AScFv基因并进行序列分析;将其克隆入表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达;并以免疫印迹测定重组蛋白的生物学活性。结果序列分析表明,50AScFv基因全长747bp,编码249个氨基酸;重组体表达产物聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为29000左右,与预期的结果一致,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在;光密度扫描结果表明,重组蛋白占菌体总蛋白的16.2%,免疫印迹试验显示,重组小分子抗体保留了亲本mAb的特异性和力。结论成功地构建50AScFv基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研制基因工程血型检定抗体奠定了基础。