摘要：根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经Zeoc inTM抗性筛选后获得大量多拷贝重组子,SDS-PAGE和W estern-b lot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出相对分子质量约为19 000的PoIFN-α特异蛋白,其有效蛋白表达量较高达54.105 mg/L.经Vero-VSV系统测定,PoIFN-α效价达到5.87×107U/L.试验将PoIFN-α成熟肽全基因密码子进行改造,并实现了其在毕赤酵母菌表达系统中的高效分泌表达.

摘要：根据GenBank中鸡α干扰素（IFN-α）基因序列设计1对引物，应用PCR技术直接从鸡肝组织基因组中扩增罗曼鸡、海兰鸡及固始鸡α干扰素基因，并进行克隆和测序。结果表明，获得了3个品种鸡IFN-α全基因序列，长度均为582bp，编码193个氨基酸残基。3个品种鸡IFN—α基因及推导的氨基酸序列比较结果显示，海兰鸡和罗曼鸡IFN-α基因序列完全一致，而固始鸡与海兰鸡和罗曼鸡IFN-α基因核苷酸同源性99．3％，有4个碱基发生非同义变异，氨基酸同源性为97．9％。克隆的3个品种鸡IFN-α基因序列与Gen-Bank上发表的7条鸡IFN-α基因序列进行比较分析发现，核苷酸同源性在98．1％～100％之间，氨基酸同源性在96．9％-100％之间。

摘要：为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制性内切酶位点、Linker序列以及His标签的特异性引物扩增出猪IL6和IFNα的成熟肽基因序列,并分别与克隆载体pMD18连接后转化Esche-richia coli DH5α,提取质粒酶切并连接构建重组质粒pMD18-IL6-IFNα。将该重组质粒和表达载体pET32a同时酶切并连接构建pET32-IL6-IFNα重组质粒,依次转化*** DH5α和*** Rosetta(DE3)感受态细胞,并经不同终浓度的IPTG以及不同时间的诱导表达。结果成功构建了IL6和IFNα的融合表达载体,SDS-PAGE检测pET32-IL6-IFNα融合蛋白在*** Rosetta(DE3)中得到了较高表达,且经1.00 mmol/L IPTG诱导7.0 h后表达量最大,目的蛋白的相对分子量为44 960,与理论预期值一致。SDS-PAGE检测显示融合蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在。

摘要：根据Genbank中发表鸡α-干扰素基因序列设计一对引物,采用PCR法从SPF鸡的全血白细胞中克隆了α-干扰素基因(ChIFN-α)。序列分析结果显示,与已发表的ChIFN-α的同源性在98.1%以上,与其他禽类的IFN-α同源性在67.4%以上,其中与火鸡IFN-α同源性在89.8%,而与鸭α干扰素同源性仅为67.4%。将该基因连接到原核表达载体pET-28a上,构建重组表达质粒,转入BL21,IPTG诱导后SDS-PAGE分析,可见一条约19ku的清晰蛋白带,结果表明克隆的ChIFN-α基因在原核中获得表达。

摘要：根据GenBank上已发表的东北白鹅α干扰素(IFN-α)基因(AY524422)序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR从经鹅副粘病毒(GPMV)刺激培养的鹅外周血淋巴细胞中克隆获得广西鹅IFN-α基因,将其连接pMD18-T载体、转化DH5α感受态细胞后进行序列分析。结果表明,广西鹅IFN-α基因完整的开放阅读框大小为576 bp,共编码192个氨基酸残基,其推导的氨基酸中有7个半胱氨酸残基和2个潜在的糖基化结合位点(NDT和NHT)。与GenBank上已公布的其他IFN-α基因进行同源性比较分析,发现广西鹅IFN-α基因与东北白鹅的同源性最高(核苷酸同源性为98.3%、氨基酸同源性为96.4%),与鸡、牛、猪、鼠、犬、人等的同源性较低。说明IFN具有种属特异性,且亲缘关系越近同源性越高,这与物种之间的进化亲缘关系一致。

摘要：目的构建以人HBsAg单链抗体(HBScFv)为导向作用、α干扰素为治疗作用的融合蛋白酵母表达载体pPICZ-αB/ScFv-IFN-α。方法通过重叠PCR构建目的蛋白质基因,再亚克隆到酵母表达载体pPICZαB中,DNA测序后,转化巴氏毕赤酵母宿主菌GS115 ,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定重组酵母,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS PAGE分析鉴定表达产物。结果DNA测序结果显示构建的目的基因片段(HBScFv IFN-α)的序列与原设计序列相符合;菌落PCR结果显示目的基因已整合到酵母菌中;诱导表达后,SDS PAGE结果显示在相对分子质量约4 4 0 0 0处可见目的蛋白质表达带。

摘要：项目来源：黑龙江省科技计划（GA0068202）技术水平及获奖专利情况：发明专利名称：人工设计原核表达系统高效表达牛α干扰素成熟多肽的基因。专利申请号：2．00810064638．

摘要：项目来源：黑龙江省科技计划（GAO06B202）技术水平及获奖专利情况：发明专利名称：人工设计原核表达系统高效表达牛α干扰素成熟多肽的基因。专利申请号：200810064638.6项目简介：干扰素是一族具有抗病毒、影响细胞生长、分化和调节免疫功能等活性的蛋白质。牛α干扰素对牛的许多病毒性疾病都有明显的治疗效果,生产实践之中,将牛干扰素作为疫苗佐剂,与治疗不同疾病的疫苗联合,可以研制出免疫效果更好的新型疫苗,对牛病防治产生积极的影响。利用基因重组干扰素来防治家畜的病毒性疾病,是一种非常有效的手段。

摘要：根据GerlBank中牛干扰素-α（IFN-α）基因序列（A00145），设计并合成了一对引物，以梅花鹿肝脏组织DNA为模板，采用PCR技术扩增梅花鹿IFN—a全基因，并克隆、测序。结果表明，梅花鹿IFN—α基因全长570bp，编码189个氨基酸，含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸；序列比较分析发现，

摘要：为采用SYBR GreenⅠ染料建立检测水貂IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中登录的MiIFN-α和MiIFN-β、MiIFN-γ和3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因序列,分别设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增MiIFN-α、MiIFN-β、MiIFN-γ和MiGAPDH的基因片段,构建到pMD18-T载体中制备质粒标准品,建立了相应基因mRNA的荧光定量RT-PCR检测方法并建立标准曲线。结果表明,MiGAPDH、MiIFN-α和MiIFN-β和MiIFN-γ基因的Ct值与标准品稀释度在10拷贝质粒/μL^107拷贝质粒/μL内均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均为1.00,熔解曲线均呈单一熔解峰,检测下限为10拷贝质粒/μL,重复性试验表明组内、组间变异系数均小于4.5%。临床样品检测结果表明水貂感染肠炎病毒后,MiIFN-α、MiIFN-β和MiIFNγ相对表达水平均在6d达到最高峰值,MiIFN-α相对表达量要比MiIFN-β和MiIFN-γ相对表达量高两个数量级,并且在感染期(4d^6d)MiIFN-α相对表达量明显提高。本研究为水貂IFN mRNA的定量分析提供了有效工具。