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基于CRISPR/Cas9加工番茄α-man突变体的构建: 收藏
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引用; 《生物技术通报》2019年第6期35卷 9-15页; 作者：张圆圆邵冬南崔百明石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室; 为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因(α-man)为编辑对象,设计由番茄U6 启动子驱动、长21 bp 的guide RNA(gRNA)指导hCas9 核酸酶,靶向编辑α-man 的第1 个外显子。首先构建基于CRISPR/Cas9 系统的...; 为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因(α-man)为编辑对象,设计由番茄U6 启动子驱动、长21 bp 的guide RNA(gRNA)指导hCas9 核酸酶,靶向编辑α-man 的第1 个外显子。首先构建基于CRISPR/Cas9 系统的植物表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得加工番茄转基因株系,然后取转基因番茄叶片基因组DNA,利用限制性内切酶法结合PCR 扩增对α-man 编辑位点附近的DNA 片段进行检测及测序分析。结果表明,14 株转基因番茄植株有2 株检测到突变现象。α-man 突变体TA 克隆测序结果显示有2 种编辑类型,一种表现为52 bp 的缺失突变;另一种表现为单碱基突变。实现了对番茄α-man 的编辑。; 来源：详细信息评论

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