摘要：为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-Gal-2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA-Gal-2,将pPICZaA-Gal-2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1%甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因克隆成功;山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功;山地乌骨鸡Gal-2基因在酵母中得到表达。

摘要：鸡β防御素1在鸡防御系统中起重要作用,为实现其在真核细胞中的表达,本研究利用RT-PCR从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,同时参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal-1成熟肽片段新基因,并在其3'端添加6×His序列以检测鸡β防御素1的表达情况,分别构建分泌型表达载体pPIC9K-Gal-1和pPIC9K-Gal-1-a-His,线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115,G418抗性筛选高拷贝转化子,阳性克隆用甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定表达上清液。结果表明,从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,其序列与GenBank登录号AF033335的序列同源性为100%;Gal-1和Gal-1-a-His基因均成功整合到毕赤酵母基因组中,重组酵母蛋白Gal-1-His获得了成功表达。本研究为后续鸡β防御素1的高效表达和生物学活性研究奠定了基础。

摘要：为了研究不同品种或品系鸡β防御素Gal-2基因，试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物，采用RT—PCR技术从宝万斯尼拉、罗曼粉、山地乌骨鸡、大恒优质肉鸡配套系A、B骨髓细胞中扩增出Gal-2基因，经PCR和酶切鉴定后测序，并采用DNAStar软件进行生物信息学分析。结果表明：成功克隆出5个品种（品系）Gal-2基因，5个编码区核苷酸序列同源性为100％。与GenBank中鸡β防御素Gal-2编码区核苷酸序列同源性为97．4％-100％，说明鸡B防御素Gal-2尽管高度保守，但不同地方品种间仍然存在遗传多样性。

摘要：本试验从鸡的肝脏中提取总RNA,根据GenBank公布的鸡β-防御素Gallinacin-8(简称gal-8)基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术扩增出大小为201bp的鸡β-防御素gal-8的基因片段。通过序列分析得知其由66个氨基酸组成,包括20个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸的原片肽及41个氨基酸的成熟肽。BLAST分析表明与GenBank中已公布的序列相比较缺失2个碱基,其同源性达到98%。将该基因克隆进pGEM-T Easy载体中,并转化大肠杆菌感受态DH5α,经筛选和测序鉴定获得了阳性重组质粒。从重组质粒中扩增出的成熟肽,大小约123bp。试验为进一步构建重组核蛋白及表达具有广谱抗微生物活性的防御素提供了实验基础。