摘要：本研究以β-乳球蛋白为模板,针对不同过敏原表位,基于正义链和反义链互补的原则,利用计算机辅助分子设计筛选出与β-乳球蛋白过敏原表位很好结合的适配体。分子对接结果表明,适配体QWVW,RRSL,GWGLP,RDGY和WVDL与β-Lg对接的能量是几个主要的过敏原表位中较低的,其中适配体RRSL与β-乳球蛋白对接的能量为本次实验最低,为-107.292 kcal/mol。并通过对分子对接过程中氢键作用、静电作用、疏水作用的研究,证明设计筛选出的适配体可以特异性地与β-乳球蛋白过敏原表位结合,从而达到掩盖β-乳球蛋白过敏原表位的目的。

摘要：虽然营养活性成分具有调节生理机能的功能,但环境敏感性和低溶解度限制了许多活性成分在功能食品、药品和化妆品开发中的应用。可食用载体体系的设计和研发提供了克服这些限制的可能性。阐明载体物质和活性成分间作用机制,是设计和制备非乳状液型载体体系的关键。食品蛋白由于具有高营养价值和多种功能特性,因此被广泛应用于制备载体体系。β-乳球蛋白是牛乳中主要乳清蛋白,具有多个配体结合位点,可结合脂肪酸、维生素、磷脂、多酚类化合物等多种物质。β-乳球蛋白也可同时结合叶酸、白藜芦醇和维生素E,生成蛋白质-多配体复合物。本文概述了β-乳球蛋白与不同营养活性成分间相互作用,以及生成复合物对活性成分的保护作用,讨论了天然β-乳球蛋白作为营养活性成分载体的优、缺点以及开发基于此蛋白的多活性成分载体的可能性。

摘要：目的研究β-乳球蛋白共轭亚油酸复合物(β-lactoglobulin conjugated linoleic acid complex,β-LG-CLA)对人结肠癌LoVo细胞的凋亡诱导作用。方法 WST-1法分析复合物对LoVo细胞增殖的影响;倒置显微镜观察复合物对细胞形态学改变;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位变化;caspase-3蛋白活性测定。结果β-LG-CLA可抑制LoVo细胞增殖,抑制率呈时间剂量依赖性;β-LG-CLA作用于结肠癌LoVo细胞,使结肠癌细胞出现了细胞数量明显减少,体积缩小,皱缩变形,进一步有凋亡小体产生,随着β-LG-CLA浓度的增加,此现象更加明显;β-LG-CLA剂量组细胞线粒体膜电位降低,呈现浓度依赖性;β-LG-CLA剂量组细胞caspase-3蛋白活性含量比对照组高,且呈现剂量-时间反应关系。结论β-LG-CLA可诱导结肠癌LoVo细胞凋亡,表现为细胞内线粒体膜电位降低以及释放性蛋白caspase-3活性升高。

摘要：分别采用2.1、6.0μm的大孔有机整体柱为载体,制备固定化胰蛋白酶反应器(MITRs),比较不同方案对固定化得率及酶比活的影响.相较于氰基硼酸,以2-甲基吡啶硼烷为还原剂的固定化方案虽提高了酶的比活,但导致固载量减少了32%~50%.此外,孔径大小对酶的比活无显著影响.MITRs可有效水解β-乳球蛋白,且水解效率随着循环流速的增加而提高.其中使用2.1μm-MITR的水解产物主要为相对分子质量小于3 ku的小肽.在18次重复实用过程中,6.0μm-MITR表现出更高的稳定性,具有较高的重复利用性.

摘要：为研究山羊乳蛋白基因编辑,实现羊乳"人源化"改造。利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中致敏原β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点敲入人乳铁蛋白(hLF)基因。针对山羊BLG基因第一外显子设计构建sgBLG/Cas9表达载体经电转染山羊胎儿成纤维细胞验证其编辑活性;将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经筛选检测获得BLG^-/hLF^+打靶细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植;通过剖宫产获取克隆胎儿并验证其中靶情况。结果表明:sgBLG/Cas9编辑山羊BLG位点致突变率约为30%~35%;共筛选72株药物抗性细胞株,其中有37株为基因打靶细胞,打靶效率为51.4%(37/72);挑取形态较好的7株打靶细胞用于核移植,共制备416枚重构胚,移植30只受体山羊;30-35日龄B超诊断有13只受孕,妊娠率为43.3%(13/30);剖宫产获取3只35日龄克隆胎儿均验证为BLG^-/hLF^+基因型,并建立了BLG^-/hLF^+靶向性修饰细胞系。因此,利用CRISPR/Cas9系统可以获得BLG基因座定点打靶hLF基因的转基因克隆山羊,该研究为培育羊乳中低致敏原和富含hLF功能营养成分的转基因山羊新品系提供了科学依据。

摘要：采用壳聚糖对浓缩乳清蛋白溶液进行处理以除去牛乳中主要过敏原β-乳球蛋白(β-Lg)。在室温条件下,应用响应面分析法对反应条件进行优化,以β-乳球蛋白的减少量来评价反应的程度,得到的最适条件:pH值为6.69,壳聚糖添加量为2.04g/L;此条件下可去除94.89%的β-乳球蛋白,剩余78.68%的α-乳白蛋白(α-La)和35.41%的牛血清白蛋白(BSA)。此外,对β-乳球蛋白和壳聚糖的回收进行研究,采用正交试验设计考察pH、醋酸钠溶液浓度和添加比例对β-乳球蛋白回收率的影响。结果表明,最佳工艺条件为pH值为9.0,醋酸钠溶液浓度0.2mol/L,添加比例1∶15,此条件下可回收87.23%的β-乳球蛋白,纯度为84.1%。

摘要：研究选用了几种商业蛋白酶对乳清蛋白浓缩物(WPC)进行酶解,通过比较各酶解产物中α-乳白蛋白(α-La)和β-乳球蛋白(β-Lg)存余率的高低,筛选出Protease A具有优先降解β-Lg的能力;通过单因素实验设计和正交实验设计优化了Protease A优先降解β-Lg的工艺。最佳工艺为温度40℃,pH值为7.3,E/S为800U/g蛋白,酶解时间为3h,此时水解物的水解率(DH)为8.40%,α-La和β-Lg的存余率分别为5.3%和1.4%,水解产物的溶解性得到了明显地改善(P<0.05)。

摘要：从奶山羊乳腺中快速抽提总ＲＮＡ，根据已发表的绵羊β乳球蛋白（ｏＢＬＧ）基因的序列，设计并合成与ｏＢＬＧ基因第一个外显子和最后一个外显子的部分序列相对应并能与特定载体末端互补的一对引物，经反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒ｐＤＩＲＥＣＴ退火，获得重组质粒ｐＤＢＬＧ。ＰＣＲ鉴定、限制性分析和分子杂交均表明已克隆到奶山羊ＢＬＧ的ｃＤＮＡ。

摘要：采用三因素二次通用旋转设计和体外检测法,对胰蛋白酶水解β-乳球蛋白获得ACE抑制肽的条件进行优化。结果表明,底物浓度(X1)、温度(X2)、酶与底物的质量比(X3)对ACE抑制率的影响回归方程为:Y=50.62-2.33X1-1.97X2+5.81 X3-3.36X2X3-6.56X22-1.96X32,胰蛋白酶水解β-乳球蛋白获得ACE抑制肽的最优水解条件为:底物质量浓度为60 g/L,水解温度30℃,酶与底物的质量比为5.5%,水解时间6 h,水解产物对ACE抑制活性最大抑制率为53.86%。

摘要：尝试利用CRISPR-Cas9系统敲除山羊基因组中β-乳球蛋白(BLG)基因,以实现在BLG基因座敲入人乳铁蛋白(h LF)基因,并进一步探讨了不同浓度RAD51蛋白激活剂(RS-1)对同源重组效率的影响。首先针对山羊BLG的第一外显子设计并构建了sg RNA和Cas9共表达载体p Cas9-sg BLG,将该载体转染至山羊耳成纤维细胞,利用PCR和T7EN1法验证了其基因组编辑活性;然后进一步构建了BLG基因打靶载体p BHA-h LF-NIE(包含NEO/EGFP);将该打靶载体与p Cas9-sg BLG载体共转染至山羊耳成纤维细胞,分别用0、5、10和20μmol/L RS-1处理细胞,分析了绿色荧光蛋白的表达效率;同时用800μg/m L G418对不同浓度RS-1处理后的细胞进行筛选,挑取EGFP阳性细胞克隆,进一步通过PCR和测序鉴定h LF定点敲入的阳性细胞克隆。结果显示:设计的sg RNA编辑山羊BLG位点的效率为25%-31%;报告基因的表达效率提示RS-1可以促进基因敲入效率的提高,其效率与RS-1浓度呈正相关,20μmol/L RS-1处理组的效率是对照组的3.5倍;利用G418筛选h LF敲入阳性细胞克隆后,当RS-1浓度为0-10μmol/L时,h LF敲入效率随着RS-1浓度增加而升高,在10μmol/L时阳性克隆率最高为32.61%,然而在20μmol/L时敲入阳性克隆率下降至22.22%,且衰老细胞克隆增多。以上结果表明,利用CRISPR-Cas9系统可以实现在山羊耳成纤维细胞中敲除BLG基因和敲入h LF基因,且适宜浓度的RS-1可以显著提升基因敲入效率,本试验为高效利用CRISPR-Cas9系统获得基因敲入的细胞提供了参考依据。