摘要：利用响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法的酶解条件。将酶解设备(X1)、酶解时间(X2)和酶加入量(X3)作为影响因子,以A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量(Y3)的质量浓度为评价指标。根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,针对检测方法中酶解反应这一关键步骤,通过单因素实验优选,响应曲面法研究酶解时间(X2)和酶加入量(X3)与A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量(Y3)之间的关系。确定最佳酶解条件为:酶解设备(X1)为水浴摇床,酶解时间(X2)为2.5 h,酶加入量(X3)为15μL。

摘要：本研究以水牛乳β-酪蛋白(β-CN)基因多态性分析结果为依据,从水牛乳中分离并纯化出具有活性的β-酪蛋白亚型。采用体外消化模型分析其在胃肠道中的消化性能;根据水解液的抗氧化活性来分析生物活性肽的释放。高效液相色谱法(HPLC)结果显示,水牛乳中β-CN有A和B两种等位基因。消化性能结果显示A等位基因更利于β-酪蛋白在肠道的消化,抗氧化性结果显示A等位基因的1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)清除能力要优于B等位基因,但在·OH自由基清除能力和还原性能力上B等位基因更有优势。β-CN基因多态性与体外消化功能和抗氧化活性的不同密切相关。这些结果可为精准设计水牛乳功能性乳制品提供理论基础。

摘要：目的基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术,开发A1A2牛奶鉴别试剂盒,并对市场上A2牛奶产品进行检测应用,实现对A2牛奶的鉴别检测。方法本研究先利用D-loop基因片段设计了牛内参基因引物探针组(标记FAM荧光)。随后,在β-酪蛋白基因突变位点分别设计了A1基因引物探针组和A2基因引物探针组(均标记VIC荧光)。基于ARMS-PCR技术构建了双通道ARMS-PCR反应体系与程序,进而成功开发了A1A2牛奶实时荧光ARMS-PCR试剂盒。为进一步验证试剂盒性能,将其应用于市场上A2牛奶的检测,并将检测结果与DNA测序法结果对比。结果本试剂盒特异性强,检测DNA灵敏度为0.1 ng/L;10份市售实际样品的应用检测结果与测序结果一致。结论本试剂盒特异性好,灵敏度高、准度度高,适用于A2牛奶的真实性鉴别。

摘要：该文用PCR扩增了牛β－酪蛋白基因5′－端上游调控序列，并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝，提取DNA。在牛β－酪蛋白基因外显子1和上游调控区内设计引物，扩增其上游调控序列。两条引物长均为19个核苷酸，引物间跨度为635bp。以牛肝DNA为模板，进行PCR扩增，扩增产物在2％琼脂糖凝胶上电泳，可见特异的目的条带。从凝胶中回收目的片段，克隆到pGEM－T载体中。重组质粒提取DNA，进行序列分析。测序结果与文献发表的类似序列相比，仅有4个碱基不同，同源性达99．4％。表明获得了牛β－酪蛋白基因5′－端上游调控序列的克隆。

摘要：采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ，将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物，引物长度１９ｎｔ，跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示，在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近，出现一明显亮带，这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物，煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒，ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ，Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中，经筛选、酶切、测序鉴定，结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。

摘要：旨在研究β-酪蛋白(β-casein,CSN2)对奶山羊泌乳性能的影响,利用CRISPR/Cas9系统敲除奶山羊胎儿成纤维细胞(GFFs)CSN2基因,为转基因动物模型构建提供核供体。针对CSN2第二号、八号外显子设计5个靶向CSN2基因sg RNA(T1、T2、T3、E1和E2),与PX330-e GFP载体连接,构建PX330-e GFP-sg RNA敲除表达载体,经T7E I酶切实验评估敲除效率;选择第八号外显子敲除效率最高sg RNA,构建PX330-Neo-sg RNA敲除载体,将PX330-e GFP-sg RNA T及PX330-e GFP-sgRNAE与PX330-Neo-sgRNAE组合转染细胞,经流式分选、G418药筛获得敲除CSN2基因细胞。Western blot测定转染细胞CSN2表达情况。测序结果表明各sgRNA均正确连入PX330表达载体中,T7E 1酶切实验表明sg RNA T1、sgRNAE2敲除效率最高达34.9%和25.9%;经荧光定量PCR及免疫荧光检测结果表明,eGFP+Neo转染组CSN2敲除细胞比例显著高于e GFP+e GFP转染组(P<0.05)。综上表明,CRISPR/Cas9系统可有效应用于奶山羊胎儿成纤维细胞基因编辑,产生的突变细胞为制备CSN2基因敲除奶山羊提供核供体材料。

摘要：激素调节所需的特异调节区域已经被证实,具有多绑定位点并可结合几个转录因子的复合应答元件已经得到确定。乳腺特异的基因表达的调节需要多个因子间相互作用的合作,由催乳素调节的信号转导通路引发了转录因子与调节元件的绑定和相互作用及乳蛋白基因的表达。β-酪蛋白和乳清酸蛋白mRNA的基因内5’序列和3’非翻译区分别对于基因的有效表达起到至关重要的作用。近年来,科学工作者们设计了许多种载体,可在乳腺中表达外源基因。这项技术可用于操纵转基因家畜的乳汁成分,利用乳腺作为生物反应器应用于生物制药学中。