摘要：从蒙古绵羊输卵管、子宫、子宫颈、阴道组织中提取总RNA,根据GenBank中羊的β-防御素的cDNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了301bp的片段。将该片段克隆于pMD-18T载体后进行序列分析,确认该PCR产物为β-防御素。通过相同的RT-PCR反应体系和条件后,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,以β-actin为参照,根据PCR产物的亮度推断不同组织中β-防御素的表达量。结果,蒙古绵羊雌性生殖道上皮各组织均有β-防御素表达,说明β-防御素在蒙古绵羊雌性生殖道的先天免疫中起重要作用。β-防御素的表达量在雌性生殖道各组织内不同,提示雌性生殖道各组织的防御功能强度不同。

摘要：为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎。根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物。收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA。经RT-PCR扩增牛β-防御素cDNA片段,回收纯化PCR产物,连接pMD18-T载体,转化感受态细胞JM109。在含X-Gal、Amp及IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR及双酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段碱基数为189bp,含有一个完整的ORF,能编码63个氨基酸的多肽,多肽中含6个保守半胱氨酸残基。用Blast程序进行检索比较,表明扩增序列与GenBank中发表的BNBD-7编码区序列96.3%相同。结果成功克隆出奶牛β-防御素家族的成员BNBD-7基因,为重组牛β-防御素的开发奠定了基础。

摘要：本试验旨在研究沙葱黄酮对肉羊生产性能和肠道组织免疫因子β-防御素-1(sBD-1)和β-防御素-2(sBD-2)基因表达的影响。选取60只健康、体重[(39.9±3.2)kg]相近的6月龄小尾寒羊羯羊,采用单因素完全随机区组设计,共分为4组,每组15只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加11(低浓度黄酮组)、22(中浓度黄酮组)和33 mg/kg沙葱黄酮(高浓度黄酮组)的试验饲粮,共饲喂70 d,其中预试期15 d,正试期60 d。每天记录各组羊的采食量,每隔15 d晨饲前空腹称重1次。试验结束后每组随机选取3只羊进行屠宰,采集十二指肠、空肠、回肠组织样,应用实时荧光定量PCR进行sBD-1和s B-2基因相对表达量的测定。结果表明:1)试验第30~45天以及第45~60天,各试验组肉羊的平均日采食量均显著高于对照组(P<0.05),其中以高浓度黄酮组肉羊的平均日采食量最高;试验第45~60天,与对照组相比,各试验组肉羊的平均日增重显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05),其中以中浓度黄酮组肉羊的平均日增重最高,高浓度黄酮组料重比最低。2)与对照组相比,饲粮添加33 mg/kg的沙葱黄酮显著提高了sBD-1基因在空肠和回肠中及sBD-2基因在空肠中的相对表达量(P<0.05),饲粮添加22 mg/kg的沙葱黄酮显著提高了sBD-2基因在十二指肠中的相对表达量(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加22~33 mg/kg的沙葱黄酮能够显著提高肉羊生产性能和β-防御素(sBD-1、sBD-2)基因在肠道组织中的表达。

摘要：用设计的特异性引物，采用RT-PCR方法扩增到广西黄鸡β-防御素基因gallinacin-1（简称Gal-1）-gallinacin-13（简称Gal-13）．通过克隆、测序获得这13个基因的cDNA核苷酸序列，并提交到GenBank（Gal-1-Gal-13基因的注册号为：DQ858297-DQ858310）．比较分析广西黄鸡13种β-防御素Gal-1～Gal-13基因分别与GenBank中注册的防御素基因氨基酸序列的相似性，其氨基酸的相似性均在95．5％～100％之间．利用DNAStar软件对所获得的13种广西黄鸡β-防御素基因进行系统发育树分析，结果Gal-1与Gal-5、Gal-12、Gal-2在同一分支上，Gal-6、Gal-7、Gal-9、Gal-8在同一分支上，Gal-10、Gal-11、Gal-4在同一分支，Gal-13独自为一分支．同样用RT-PCR方法分析了广西黄鸡肛防御素Gal-1～Gal-13基因在不同组织中的分布，结果发现：Gal-1、Gal-2、Gal-4、Gal-5、Gal-6、Gal-7、Gal-10的表达分布非常广泛，Gal-3、Gal-8、Gal-9、Gal-11、Gal-12、Gal-13的分布较少．

摘要：为了从塔里木马鹿的子宫黏膜上皮组织中提取总RNA,以此RNA为模板进行RT-PCR,根据已获得的梅花鹿β-防御素siBD-1基因序列设计并合成引物,采用RT-PCR技术进行扩增,双向克隆测序。结果表明:该基因序列为塔里木马鹿雌性生殖道黏膜β-防御素(TWSBD-1),包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),编码64个氨基酸残基的前原防御素,其中6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基,符合β-防御素特征性结构。

摘要：目的：检测大鼠β-防御素一1基因表达的组织分布。方法：从Genbank检索到的Norway大鼠β-防御素-1 cDNA序列，据此设计一对特异引物，采用RT-PCR技术在Wistar大鼠10种受检测组织的总RNA中，扩增其特异cDNA片段，然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果：在10种大鼠组织中，

摘要：根据GenBank公布的鸡β-防御素序列设计一对特异性引物,运用RT-PCR技术从新郑三黄鸡肺脏组织中扩增其β-防御素基因并测序分析,结果表明,获得了195bp的cDNA目的片段,编码65个氨基酸;BLAST分析表明,该片段与GenBank中已公布的鸡β-防御素gal-9序列基因同源性达到98%。其与已公布的10个gal-9序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树的结果显示,所测的防御素基因核苷酸同源性为91.8%～94.4%;进化树分析表明获得的目的基因与gal-9基因处于同一进化分支。这为进一步研究gal-9基因在地方品种鸡中的先天性免疫功能奠定了基础,也为研发具有广谱抗菌活性的新型肽类生物制品奠定了前期基础。

摘要：根据已发表的牛β-防御素基因序列设计引物,从具有临床乳腺炎症状的荷斯坦奶牛血液中性粒细胞中提取RNA,克隆牛β-防御素基因并插入到原核表达载体pQE-30中,构建了原核表达质粒pQE-30/β-defesion。测序结果表明,克隆的目的基因长189bp,编码1个氨基酸,与已报道的牛β-防御素氨基酸序列同源性达95.6%。本研究为牛乳腺防御素的表达及功能、活性的研究奠定了一定的基础。

摘要：从梅花鹿的舌黏膜上皮组织中提取RNA,根据已获得的驯鹿β-防御素reBD-1基因序列设计并合成引物,采用RT-PCR技术进行梅花鹿β-防御素siBD-1基因的扩增,将获得的300bp的cDNA进行双向克隆及序列测定分析。结果表明所克隆出的cDNA为梅花鹿β-防御素siBD-1,该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),编码64个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。siBD-1 cDNA的获得为以后更好地研究梅花鹿黏膜防御机制奠定了基础。

摘要：根据基因库中鸡β-防御素Gal-6cDNA基因序列设计2对引物,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从安徽三黄鸡白细胞RNA中扩增了β-防御素Gal-6cDNA基因片段。得到了大小为250bp片段。将扩增产物纯化并克隆到PGEM-T-Easy载体上,转化感受态细胞DH-5α,经筛选获得重组质粒并测序,用P3/P4引物从重组质粒中扩增出成熟肽,大小约150个bp。测序后Blast分析表明,安徽三黄鸡序列与基因库上已发表的序列相差一个碱基,Gal-6多肽共有67个氨基酸组成,分别是20个氨基酸残基的信号肽、5个氨基酸的原片段、42个氨基酸的成熟肽。